Производное сефарозы 4 @ с аффинантом- @ (11 @ ,17 @ )-11, 17-дигидрокси-3,20-диоксопрегн-4-ен-21-ил @ тио @ уксусной кислоты,как биоспецифический сорбент для аффинной хроматографии

Производное сефарозы 4 @ с аффинантом- @ (11 @ ,17 @ )-11, 17-дигидрокси-3,20-диоксопрегн-4-ен-21-ил @ тио @ уксусной кислоты,как биоспецифический сорбент для аффинной хроматографии

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Производное сефарозы 4В с аффинантом

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3626598/23-04 (22) 22.07.83 (46) 23.06.85. Бюл. 9 23 (72) А.А. Ахрем, О.В. Гулякевич, А.Л. Михальчук, В.Н. Пшеничный, П.И. Сурвило и В.А. Хрипач (71) Институт биоорганической химии

АН Белорусской CCP (53) 547.689.7(088.8)

{56) 1. W. Rosner, Н. L. Bradlow, Purification of corticostегоid

binding gIobuIin from human pIasma by affinity chromatography.

The Journal of EndocrinoI. metab., 33(2), 193-198, 1971.

2. F. GaiIIard К. К. Нап, M. Pautrevaux, Caracterisation et

properties physico-chimigues de

Ia transcortin human. — "Biochemistry", 57(5), 559-568, 1975.

3. Волчек А. Г., Клящицкий В.А.

Биоспецифическая хроматография как высокоэффективный спосоо очистки транскортина ретроплацентарной плазмы человека. Биол. Науки, 6, 1976, с.. 134-141.

4. U. W. MueIIer, J. M. Potter, Purification and characterization

of human transcortin. — 1оцгпа1

of Biochemistry 197(3), 645-6539

1981

5. D. K. Маhajan, R. В. BiIIiar, Н. В. LittIe, IsoIation of corti-soI — binding gIobuIin (СВО) from

porcine f oII icuIar f Iuid Ьу af f iS-СН,СОЫН(СН,), со

- ОН

„„ЯО„„1162815 А,4(Sl) C 07 3 5/00, 31/00;

В 01 D 15/08

nity chromatography. — JounaI

stегоid biochemistry, 13(1), 67-71, 1980.

6. G. J. Tesser, Н.V. Fisch, R. Schwyzer, Limitations of аГГ

nity chromatography. SoIvoIytic

attachment of Iigands from poIimeric supports. — "HeIvetica chemica ас а", 57(6), 1718-1730, 1974..

7. W. Rosner Н. 1.. Bradlow, IsoIation and purification of

"orticostегоid — binding gIobuIin

from human PIasma Ьу affinity

chromatography. Methods in EnzymoIogy New Jork Academic Press

36, 104-109, 1975.

8. Ахрем А. A., Кукушкина И. И., Свиридов О. В., Стрельченок О. А., Сурвило Л. И., Чащин В. A. Выделение транскортина из сыворотки ретроплацентарной крови методом аффинной хроматографии. Изв. АН БССР.

Серия "Химия", 6, 1977, с, 111—

115. (54) ПРОИЗВОДНОЕ СЕФАРОЗЫ,4В С ФФИНАНТОМ-((11 /, 17 2 )-11,17-ДИГИДРОКСИ-3,20-ДИОКСОПРЕГН вЂ” 4-ЕН-21—

-ил)тио Зуксусной кислоты кАк БиоiПЕ11ИФИЧЕСкИЙ СОРБЕНТ ДЛЯ АФФИННО11

ХРОМАТОГРАФИИ. (57) Производное сефарозы 4В с аффинантом= ((11 А 17 с ) -1 1, 17-дигидрокси-3,20-диоксопрегн-4-ен-21-ил)—

-тио уксусной кислоты общей формулыинсн сн(он)сн,ор »<,.;!>!!I, >! < !I I i5t

« «;

2 .> к 0>) т. .! 3 r?! Il « >xp> > l! Я «- . », i".!,:",«

< т

; «

Гpупл ((р;>CоpOT ОЧ),(>)f r- I(>, «, —. линам. ведет к образованию М,<((-ди- 40 замещенных гуанидинов с отщспленисм лиганда от сефарозы б ",. Сложноз(!)Ир-ная связь 21-гемисукцината кортизола (2$ и 7 подвержена ферментативнорасщеплеиию, для предотвращения 45 кОторОГО дОВОдят рН исхОднОЙ сыворо . ки дто 5 или осуществляют предварительное сгарение сыворотки В тече— ние 1-2 мес.

< 1r » т

f: ; > i., б i т fо t < t . (!i i r < r т к т < :, ! -(! T :: ение отис>:) . сл:-: би; х;!

)<((Н >;(>!1<(;>(. T«,» >(: Р(>I! 3 )С); Н<».:,(< f (.е;)>,р(3!, ("5 >с а((»(1)>((:" где — Ос гаток сефарозь> i>, К(3(> б)((>С(l; тиф(СЧЕСК,>(у C(»pf Cf,т- Н.-,-, а(.)ф!.(и F<0ii хр омет с (pафин . ! (ЗВЕС .НЫ аффи((НЫЕ С Р(:>}!ТЫ ((С: I-, . (>.-.! Н С-l., ) .)ТИ;((:. <. .ij! t < e(3 f(OТ<)j>f..!»? За К. (((>Ч» Т ;: 5 .

В -i!ктизаци!(сефар(>зы, !!0

< « ((<)ОСТPËНСТВРННО(! RCТ (ВК! ((!!С. II> !".тт! (,: —,В т ".(я НРрн , :! В(МИ -(I"!<()-0; р;. <1

,НМ(т i . ; Прн(ОС(>,5(Н()(i i <-.(В:< >(!)5(т, (НТ "!

I1т),>; 3;;0;>;т) (>r "Р—.) <., т" а ()! < < ((: > < > т> . С (j! >, jr < >! r;, tri < i « " " " р "

;";,0)кт, r!!ii(C. ВЕ СЛ. -.:ei; 5<(Л5> -(К (;>—

B ill((! (.Е(!)(>!>03»! ИС((ОЛЬ 3 > 0 :C „j) )tf

) 7 < . ГC<(ИС :К((ИН<(Т КООТИ ЗОН

< !

С РЛЗ?(!(rifi>,МИ Fi П,)ОСТPПНС " I! С((НЫХ

«

>" с с.(:3 как . 1 (3(»моче Винный "" р . ктурт фт)аг tel(t СВЯ.3><"<р(;вj(f <н»<>с-(!)а «"" —

«

В ; < ) тт(С )3 С Т > !3 К ><" С С Рт)(! ) 0 3 <> rj; < О -3 ". 0 .Н I И:IPОЛИЗV Б Ит(< ГeÝНВ((:. —; — . r! «> (, КРО(.(Р ТО! (>, ) < О.«, О»;-(с "Т Н "РИСУ tO! < (! — 1 ., 7-;., ((! ;(>. к(< — ), <.;-; СксоК(т; IO !I.: r б! (бе Ftт I(pi! ((» у .((НИН КОТО,>(>! С т! ТИИ.!ЦИЯ С .)ЕР, )(>, i т><" » 5>тт< (- <; 5» п(>5(i (:р f If<

Ir! т--(><>Ч ).= I >! . (> (><>

,), <(; I ((5! i!iiе . 1 ">3с,::, - .! . к ii: (лн K:!с:(т 0 О0l ". ;i .. ,)(, j5f т>т>т>((Е>! Л И(3Н 0! 0,)с; . !e. (5. С <И (5(C) :. )KH 03(l 0P!. (>3 Н 3! l ГЕ ..! (С < .:I:!ill i".:.

)С! ЕРНЗЯМН Cf-!В;<т)СТКН К;>ОБ((, 1ак((:! Сбp<(30>M, н(л>нньс с(»р . :i ы, ° (МЕ((ЯРМ(<(< ((Н В" "Е> eiii(5< ОС-!! : <, (<:,(ве pг(3)<) ".05»,:i 3рутте нию в 5 c. (. < Иль биоспе;>ифи .< Ской х;)05(((! 0(-0((<1)и т. < i (>:3 f1 rl>=И i ЕЛ i! f f 0 С 0F;,") а(с(а(i CP0 !: С: ri; афф;(Н т(0; с< С ор r>! Н;-а (Н, бО<-,-(< грех Выде?(Сни5(, потеря е..(ости (0(1: (:;,) И ТPe! О . ("I ЛИ". ЕЛЕ>Н! !»(".O ГС "" > (>!(Т .т(! НЬ::((>!jr)P<>ЦИ(, (1,СТЗт)Е(Н>e>,,; (>(3(!

;! fI;(c и 5! (;(с>)zанне p!1 F . г ° и °

-<»(есс < f.. i Иия б" ка

>!Нис>0?т((б< (); -,,кой 5 5(3 обретен((Io ". i ;1я ".тс я <.(;; г! > нн " 53 . .<а! (pF:fi(< cин . е 3<(р 0 ! Е l!НЕ(5! П у СЕ; r (Н (МО бИ НИ За(И(и ГР)ГИ" с ук(гинат(! к: р T>!30?(> на сефарозу

В, активированную бромцианом, -!e ! т рез э., -диаминодипропиламин

Хотя на данном аффинном сорбенте возможно Выделение транскортина, однако он отличается низкой стабильность<о. ?ак, при рН Выще 5)5 (рН сыворотки крови 7,(() гемисукцинат кортизола может частично гидрол (30 ваться под действием

BFl F3 течение 1 -2 ч. Чаc.òè÷íîå вьl

1162815

S — CH,COSH(CH,)(HHCH,CH}OH}Clf,OP

20

-1 5 свобождение кортизола делает невозможным выделение транскортина. По— этому необходимо выдерживать сыворотку крови перед выделением из нее транскортина при рН 5,5 минимум

1-2 мес. где P — остаток сефарозы 4В, как биоспецифическим сорбентом для аффинной хроматографии.

Способ получения предлагаемого соединения заключается в том, что гель моцифицированной сефарозы, полученный последовательной обработкой эпихлоргидрином-и гексаметилендиамином в присутствии едкого натра, подвергают взаимодействию в воднодиоксановой среде с ангидридом (((11 t3, 17р ) — 11,17-дигидрокси-! — 3, 2 Π— ли с и с с п р е г н — 4 -е и — 2 1 -ил1 — ли o) уксусной кислоты с последуюшей отмывкой водным диоксаном, раствором бикарбоната натрия и дистиллированной водой; Предлагаемая матрица является более устойчивой к биохи35 мическим средам в силу отсутствия химических связей чувствительных как к химическому, так и к ферментному расщеплению. Пространственная вставка, построенная последовательностью С-S-С, СО-N С-С, С-N О

С-0-С связей, обеспечивает наиболее благоприятное расстояние между аффинантом и подложкой (13-15 А).

Конформационные и стерические параметры вставки оказывают незна-. чительное влияние на планетарность аффинанта, следовательно, и на биоспецифическое сродство к белку.

Пространственная вставка обеспечивает наиболее благоприятные гидро50 фильные параметры, что также снижает неспецифическое связывание и способствует расположению аффинанта в среде.

Г! р и м е р 1. Способ получения биоспецифического сорбента.

Сефарозу 4В (100 мл) промывают на фильтре 1 л дистиллированной

Цель изобретения достигается производным сефарозы 4В с аффинантом — (((11 р, 17 „. )-11,17-дигидрокси-3,20-диоксопрегн-4-ен-21-ил тиа уксусной кислоты об}цей формулы воды, переносят в круглодонную колбу, содержашую 80 мл 1N NaOH, и прибавляют 10 мл эпихлоргидрина,. После двухчасового перемешивания при

30-40 С гель тщательно промывают на фильтре дистиллированной водой и инкубируют 2 ч с раствором 12 г гексаметилендиамина в 100 мл 0,0}N

Na011. Образовавшуюся аминоалкилсефарозу промывают дистиллированной водой цо отрицательной ингидринной реакции промывных вод. К

10 > iI полученного водного геля аминоалкилсефарозы прибавляют при перемешивании в течение 1-1,5 ч

180-190 мл диоксана, избыток растворителя удаляют, доводя объем до

10 мл, Раствор 0,425 г (0,98 ммоль)

",((l 1 р, 1 7 ж ) — 1 1, 1 7-дигидрокси-3,20-диоксопрегн-4-ен-21 ил)тио уксусной кислоты и 0,204- .г (0,99 ммоль) дициклогенсилкарбодиимида в 15 мл диоксана перемеши-. вают 2-24 ч при комнатной темпера- туре, осадок отфильтровывают, фильтрат прибавляют к полученной воднодиоксановой суспензии аминоалкилсефарозы. Смесь упаривают при пониженном дайпении и температуре не выше 40 С до объема 10-15 мл.

После перемешивания в течение

18-24 ч гель отфильтровывают, промывают на фильтре 3} 15 мл диоксана, содержащего 5Х воды, прибавляют

10 мл диоксана, содержащего 57 воды, и затем при переме}ш вании в течение 1 — 1.5 ч прибавляют 180 †1 мл воды. Полученный водный гель отфильтровывают, промывают на фильтре последовательно 200-300 мл

1-2ь-ным водным раствором МаНСО и 400-500 мп дистиллированной воды, <(> <>) >

« ><> г :!))! <... 0« (3

> т>«<):

<Н I li. 3 (т. :(C>б <,n ))!. !О(. 11 )!а ."!)Iff<, );<" > <, I

Р(3< i!òè н ст Гfiifl!! б»у<)<>е)> < (>(1". т!<т гт< <(pi! ("г Ot)-),,>;г!>) !!Ill тг<т!(О< I) °:

I н< Tlr > Ti(fp(., <1(llf (", «О!3;.,)

I I)! РЬ;1 т <Рот);> ВЦ! > Ю вЂ” — т — — — — fI Ц t "t f n$ т, !»(;(i >j.> К <1<" "« >1«, г (< "j!1l .: 1<Г 3 „(>J(Ü Ç (! г) а- (т . 1;) т«i i )) il (> (> С .

< C l f I t f 1 <.." ! ) С>1 f < ) Ч ! Г " 1» Н .. ), >.! ! Е Н 1 (а ) Т а >< (! f »i О C) () « 3;>,L;: т . < г f f

IIII(<>lI

Г (; ° 1,, Огг:,) < () <3

< ! „: » „it1Ã1! "f, > f;I(C Н >, »> <,) —;НI () -,< О; Н (!!— уl:j .1.(то «f!(. f!>(ОI r) ГЕ:1>: (ОрбЕНТ;< >(» :< Т МКОС Г!т (1 От»I(;j;(;f: а-;.-llO 13(> 3МОЧ(Ной РМIС Г ;11: I;) Пгфи!т:!Р< 1

n « c l; i>p, -,гт{а i«;(<>»!<)цть! i г() <;г

)-:О;: ». а тр (! ",ь) . . :. ()»Ц T "!»(ВОР ОT!:СCИ Р Е" П оj Г(1,{С >3

":)t) Ff Cf: FCj) т> ВИ НС. С О (С т))ка !fC! Й З fl О

Ген {.Iх т< Г> ОllдО в т .«> бавл! Ic "! I >

Нфф!(Н;)ОИ >I1тPH)II» С >(О!т! Еf! I 7);t), I .. ; (!" " >, f t » ) It (3 (> )3 CI f: Ч С » (СО >< > "11 3 < "1 "

П-(С, г Нггт 1< )г ) 1<, У!,1)т. Е! )1! >1 НДО Г С ННЫХ С Тe,) ОИ. ;,< 1: r» С (, нос) О- к<. н;: f«cf I!3J)5!i»!т - . - (1 i» Ff)311(J<. f> -: но. у Г:1», ."-: кубир уют ) I! .и < !! 1)p; .> i,, С : 1ТС«М У ГО:!1,) ТД(ЯК .{Е 1< « г)1<фу(.,jpC>l;,>!!t ОМ г, i (I(;(»)(г

L", C < 1! З({Ы 7(>(5)f ff !T ОГ;> ГОР бС .Н Т" С!т! 3 «" !

) < 1 >»O!T B Оттг" f ЕР Г; гт< if<{I (>IO t (т . г г>1* ((, певуг11;: j{cc . -тгтв н<» «,)f)n I! >1()1 f»«,,>(;,Тр;т,ОС»-(CH,,7C ОМ г < (4

Cq 4

X.4 т

I (! г

>,1, Р— (),. T à......:-<ц pn=3! <

Ук,. «ан: ый сорбент по св 1{м ннIf

1 а<)1 7".)а.! (7)аЗМЕт> Стт>О< ТРО> «T«C, ггойг

)3c-<анки между аффинантом и носителем, конформадионные, объемные и стерические параметры ";7ространственной вставки, биохимические„

ХИМИЧЕСКИЕ И т.н. ) ЯВЛЯЕТСЯ Л гт{Ц{ИМ

И 3 (7РИМЕ!{ ЯЮЦ(ИХСЯ В Н аС Т ОЯ({<Е Е В Р Е»157 для выделения транспортных белков крови.

В ходе проведенных испы-<аний

Определение био)о{м)«чес кой (фер»!(-и— н )« " !» !. .:! ., !< Ч «! !.

i .„,, (), .<, ) .,(,; )5!

;!ф I! 11 III<< ll < ) (1, т) >,, ) > ", (О.> т

><,! , ;>I IT> CЮ > ", ", г .г г;: ->,1 г .;

) .: (, < ) C. 1 Н С :i< 11 t:3, <С<(()Н )т Ра! С!О,) Т.i

;>г,гт. -, г < (гс Н.!>1<Р -)Р(1 )Р " -i ii(>PI»tf<",гi>I ((f il- " p f >»I (O ("г .>f) ..) С г)<). 1); О)3<< >: f (i» :,If,,I>f!1< fr О! T:»1) CÐ."

РОТК!т 5(Г),Г;.С." -»T !«Pi>))I;, Раза 1{t<ЖС, f1<> 1 Н Р><. ТРОП:1;1 ..С-.:-; < (>Г(- - »т 4О Хт !!1) P ; г г ) < !1!i ;

>1 °, . (>3 Г -> ° г-тт г 7

> ), . .. 7<3 i>ИН <1П « 3(< »1:.II5. <1 ..:)» < 2 . т, CI 3Ó e:;iИ - 7!«-,.-Иг»Е -К )!» l- -)Tn (! (1Cn "т< n!. if«1! "e !! {) Е> !. (B eel > i

Г () Г. < . t! Г e i! I и i ) O В С. ; i Я С, C ) < В -i Е т!,1 1 Г ". снойГт»3 -I . ctr;) ц!«Н<..".: О i>i«бе:". 7 (г . ):)T

1,<т> ;, »

<» i 1(В Н О.; У > () ). -; f l )T,3 (< " T(i В = -т - г а —, " Е °,, » » н "-,.т::я.;л n< !ll îí а

:Ц«C "5{3 (ЯЕ t (!51 li»PGJ71(-.:7Ь){nt»f 1{f!КУ(>el()feA пос.-!едних в сыворотке крови челове— ка . (ля сохранения высокой ферментаТИ В и Ой < З С Т Е т) а З ({ ОЙ роток в работе используют свежую сыворотку крови. .(7!тервал между моментом получения крови от дîíoDà и началом инкубац){и не нревьццает б ч ° p

1162815

Оставшиеся 20% суспензии аффинных матриц центрифугируют (6000 g, 3 мин), супернанты отбрасывают, а оставшееся количество аффинных сорбентов подвергают повторному

„c воздействию сывороточных эстераз на матрицы.

Полученные результаты, сыворотки видов крови, численные значения времени и инкубирования сведены в табл. 1.

Исследование химической стабильности осуществляется параллельно на промежуточных 21-гемисукцинате кортизола (эталон) и (((11 р, 17Ы )-1 1, 1 7-дигидро-3, 20-диокс опрегн-4 ен-21-ил1тио)уксусной кислоте экспозицией последних в водно-спиртовых средах в интервале рН 1-10 и слежением за протекающими процессами при помощи ТСХ с использова40

55 метода, позволяющего количественно оценить стабильность аффинного сорбента, используется метод радиационного контроля. Для контроля концентрации аффинанта на носителе при синтезе матриц к исходному кортизолу добавляется (1,2,6,7 -Н)-корти3 зол. Удельные. радиоактивности эталонной матрицы 485920 имп./мин, мг (175900 имп./мин, мкмоль), с 10 предлагаемой матрицы 671000 мк/мин, мг (747900 имп./мин, мкмоль).

В типичном эксперименте к аликвотам (2 мл уплотненного геля) каждо-„ го аффинного сорбента добавляют 15 по 20 мл сыворотки крови человека и инкубируют в течение определенного (табл. 1) промежутка времени при определенной температуре при непрерывном перемешивании. Затем суспензию центрифугируют (6000 g

3 мин) и удаляют надосадочную жидкость. Аффинные сорбенты последовательно промывают (2 20 мп) стандартным буфером (0,05 М трис-HCI . 2 рН 7,6), содержащим 0,2 моль NaCI

807-ным этанолом (2 20 мл). Промытые аффинные матрицы переносят в мерные пробирки и приготавливают из них 207.-ную суспензию в стандарт- ЗО ном буфере. Отбирают пробы полученных суспензий, (0,2 мл) и помещают их в сцинциляционные флаконы для определения радиоактивности, измерение которой осуществляют на жидкостносцинциляционном счетчике "Марк 111 ("Тракор Европа", Голландия). нием стандартных веществ и по данным ИК-спектрометрии о конечных продуктах. При тонкослойной хроматографии в качестве носителей используются силикагель Вельм нейтральный, окись алюминия Вельм" . нейтральная, а также стандартные пластинки "SiIufoI UV-258"..В качестве элюентов используются этилацетат, этилацетат:спирт — 9:1, хлороформ:метанол:вода — 188:12,1.

Проявление УФ, 3<, термическая обработка (250-300 С, 10-20 мин).

Данные ИК-спектрометрии получены на приборе UR — 20,.

В прессовках KBr и в растворах в хлороформе. Кроме того, физико-химические данные конечных продуктов сравниваются с физико-химическими константами стандартных веществ.

Выделение конечных продуктов осуществляется общеупотребимыми методами. Это обусловлено тем, что кислот но-основная стабильность сефароз достаточно хорошо исследована и подобная методика позволяет непосредственно следить за превращением аффинантов как с количественной, так и с качественной точек зрения.

Полученные результаты, количественные значения рН, времени и температуры экспозиции, концентрации растрастворов и количества использованных веществ сведены в. табл, 2.

Таким образом, на. основании полученных результатов в экспериментах с максимальным приближением к практическим условиям использования аффинных матриц и в широком интервале теоретически возможных условий среды установлено, что аффинная матрица на основе сефарозы 4В с аффинантом- )((11 р, 17а()-11,17-дигидрокси-3,20-диоксопрегн-4-ен-21 — ил)тио уксусной кислоты иммо-. билизованным последовательнык построением "пространственной вставки" эпихлоргидрином и гексаметилендиамином практически не подвержена ферментативному (эстеразному) разрушению в процессе эксплуатации.

Кроме того, ферментативная уст6йчивость предлагаемой матрицы на по рядок выше по сравнению с эталонной. Так, убыль аффинанта эталонной матрицы после 5 экспозиций составляет 72Х или в среднем

22,387 на экспозицию, в.то время

1162815

10 ции сывороточных эстераз. Кроме того, представленные результаты (табл. 1) показывают, что эталонная матрица может быть использована не более 3-5 раз, а предлагаемая - до 80 раз.

Таблица 1

Предлагаемый образец

Условия обработки

Эталон

Остаток

Убыль на коКортизол, мг/мл нец стадии, Х

Исходное состояние

100 3,08 0

2,43

100

Ретроплацентарная кровь, t 32 С, 6 ч

72 3 01 2

1,75

То, 4 C% 16

58,4 3,00 0,36 97,4

1,42

1,09

1,36 96,1

23.

44,80 2,96

То же, комн., 16 ч.

Донорская, t комн., 16 ч, 34,2 2,94 0 68 95,45

0,83

23,8

Донорская-; t 4 С, 16 ч.

28,0 2,90 1,40 94, 15

0,68

18,1

Таблица 2

Предлагаемый образец

21- S-уксусная . кислота .кортизола

Эталон-21-гемисукцинат кортизола

Условия обработки

Время, ч

Количест- Количест- Количест- Количество во исход- продукта, ного, % Х во кортизола, %. во исходного, Х

Спирт:Н О вЂ”. 10:5 (15 мл) 0

100

100

К СО (О! 00025 M

34,6 мг) 50

100

1,5 рН 9-10, t комн.

100

100

Спирт:Н О вЂ” 7,5:7,5 (15 мп ) 100

100

КНСО (О;0003 м30,0 мг) 0

100

70 как убыль аффинанта предлагаемой матрицы составляет в тех же услови ях лишь 5,65Х или в среднем 1,13Х на экспозицию. Следовательно, при использовании предлагаемой матрицы отпадает необходимость дезактиваУбыль., на конец стадии, %

Остаток Кортикортико- зол, стероидов мг/мл на матри-. це кортикостероидов на матрице, %

1162815

Продолжение табл. 2 алон-21-гемисукцинат кортизола

Условия обработки

Время . ч

Количестоличество кортизола, Х о исход»

oro Х рН 9, t комн.

100

70

100

100

Спирт:Н Î вЂ” 5:10 (15 мл) 0

100

100

Na C09 ° 10 Н О (0,0003M-85,8 мг) 100

70. рН 8-9, t комн.

100

24

100

100

100

100

100

100

Составитель Т. Гусарова

Техред Л.Коцюбняк Корректор С. Черни

Редактор Л. Гратилло

Заказ 4061/22 Тираж 354

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва; Ж-35, Раутская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент.", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

С тирт:Н20-9:1 (10 мл) (0,5 мл рН 3-4, t комн.) Спирт:Н О вЂ” 9:1 (10 мл) HCI до рН = 1,. t кдмн.

Предлагаемый образец

21-$-уксусная кислота корти зола

Количест- Количество во исход- продукта, ного, Х - Х