Способ получения иммуносорбента

Способ получения иммуносорбента

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОСОРВЕКТА путем аминирования силохрома К-аминопропилтриэтоксисиланом с последующей обработкой аминосклохрома глутаровым альдегидом и коналентным присоединением белков, о тличающийся тем, что, с целью увеличения специфической емкости сорбента и упрощения -способа, используют силохром с диаметром пор от 100 до 200 нм и реакцию аминирования проводят в водной среде. 2.Способ по п. 1, отличающий с я тем, что в качестве белков используют белки сыворотки крови. 3.Способ по п. 1, отличающий с и тем, что в качестве белков используют белки жидкости ларвоиист эхинококка. / 4.Способ по п. 1, о.т личаi ющийся тем, что в качестве бел (Л ков используют белки экстракта ларвоцист апьвеококка.

СОЮЗ С08ЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (11) 5 А ц1) А 6) К 47 00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (2I) 3498278/28-13 (22) 10.10.82 (46) 15.12.85. Бюл. У 46 (71) Ордена Трудового Красного Знамени институт медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Иарциновского (72) И.E. Баллад и И.К. Бебрис (53) 615.373(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 651814, кл. А 61 К 47/00, 1981. (54)(57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИИИУНОСОРБЕНТА путем аминирования силохрома f-àìèíîïðoïèëYðèýòîêñèñèëàíoì с последующей обработкой аминосилохрома глутаровым альдегидом и ковалентным присоединением белков, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью увеличения специфической емкости сорбента и упрощения способа, используют силохром с диаметром пор от

100 до 200 нм и реакцию аминирования проводят в водной среде.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а— ю шийся тем, что в качестве белков используют белки сыворотки крови.

3. Способ по п. 1, о т л и ч а— ю шийся тем, что в качестве белков используют белки жидкости ларвоиист эхинококка.

4. Способ по п. 1, о,т л и ч ею шийся тем, что в качестве белков используют белки экстракта лар. воцист альвеококка.

1163505

И юбретение относится к области медицины, преимущественно к иммунологии, и может быть использовано для приготовления иммунологических .препаратов в паразитологии.

Целью изобретения является увеличение специфической емкости сорбепта и упрощение способа.

Пример !. .Очистка сыворотки кролика, иммунизированного цельной

ыщкостью ларвоцист эхинококка, от антител к белкам хозяина (барана) .

К 4 г силохрома с 200 нм приливают 48 мл 5Е-ного раствора "-аминопропилтриэтоксисилана в воде. Смесь о нагревают при 90 С в течение 4 ч.

К промытому водой и ьысушенпому при о

70 С аминосилохрому добавляют 60 мп

2,5Х -ного раствора глутарового альд гида D воде и обрабатывают при комнатной температуре в течение 3 ч.

После промывки сорбент инкубируют с 30 мч норма.тьной бараньей сыворотки с концентрацией белка 75 мг/мл при 4 С в течение 17 ч. ,о

По окончании обработки сьворотку сливают, сорбент тщательно промывают забуференным 0,1 !! фосфатным буфером физиологическим раствором рН 7,4, содержащим 0,02 твина-20. К иммуносорбенту добавляют 150 мл сыворотки кролика, иммунизированного цельной жидкостью ларвоцист эхинококка барана. Смесь инкубируют при комнатной температуре в течение 3 ч при постоянном перемешивании. Истощенную антисыворотку сливают и проводят иммуно-. химнческий анализ на полноту истощения антител к белкам хозяина. Иммуносорбент промывают забуференным фи" зиологическим раствором и элюируют антитела 10 мл 0,1 М раствора глицин-НС1 буфера р!! 2,2. Элюцию проводят три раза по 3 мин.

Выход антител с сорбента составил

350 мг. Лнтисыворотка, истощенная от антител к хозяину паразита, была использована для характеристики антиге ных препаратов паразита (эхинококка) и для оценки пригодности зрит" роцитарного диагностикума, I

Пример 2. Выделение специфических антител к антигенам пара.— зита из кроличьей антисыворотки про- тив жидкости ларвоцист эхинококка.

К 4 г силохрома с d 200 нм, обработанного 1 -аминопропилтриэтоксисиланом и глутаровым альдегидом так, 10

1S

45 как в примере 1, приливают 30 мл раз-1 веденного лиофилизата эхинококковой жидкости (от барана) с концентрацией белка 10 мг/мл. Смесь инкубируют о при 4 С в течение 17 ч, По окончании обработки надосадочный белковый раст" вор сливают, сорбент промывают также, как в примере 1 ° К иммуносорбенту добавляют 30 мл кроличьей аптисыворотки против жидкости ларвоцист эхинококка, очищенной от антител к хозяину паразита, и инкубируют .при комнатной температуре в течение 4 ч при перемешивании. Истощенную антисыворотку сливают, промывку иммуносорбента и элюцию антител проводят также, как в примере 1.

Иммунохимический анализ истощен- . ной аптисыворотки показал отсутствие в ней антител к аптигенам паразита. Выход антител с. сорбента соста" ьил 45 мг. Выделенные антитела были использованы для иммунохимического анализа антигенных препаратов и для получения эрптроцитарного антительного диагностикума.

Пример 3. Очистка сыворотки кролика, иммунизированного цельным экстрактом ларвоцист альвеококка, от антител к белкам хозяина (хлопковой крысы). К 4 r силохрома с d 100 нм, обработанногоIt --аминопропилтриэтоксисиланои и глутаровым альдегидом так, как в примере i, приливают 40 мл нормальной сыворотки хлопковой крысы с концентрацией о белка 70 мг/мл и инкубируют при 4 С в течение 17 ч. К отмчтому также, как в примере 1, иммуносорбенту приливают 80 мл сыворотки кролика, иммунизированного цельным экстрактом ларвоцист альвеококка. Смесь ипкубируют при комнатной температуре в течение 3,5 ч при постоянном перемешивании. Истощенную сыворотку сливают и проводят иммунохимический анализ на полноту истощения антител, Промывку иммуносорбента и элюцию антител проводят так, как в примере 1.

Выход антител с сорбента составил

1Об мг. Иммунохимический анализ истощенной антисыворотки показал, что в ней присутствуют антитела к белкам хозяина паразита. После повторной очистки антисыворотки па иммуносорбенте она была использована для характеристики аптпгенных препаратов паразита (альвеококка).

Составитель П. Бондарцев

Редактор П. Горькова Техред И.Гергель Корректор С. Черни

Заказ 8128/2 Тлрад 721 11одпдсное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ДПП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 l)635

Пример 4. Выделение специфических антител к антигенам паразита из кроличьей антисыворотки против экстракта ларвоцист альвеококка.

К 4 г силохрома с d. 190 нм, обработанного -аминопропплтриэтоксисиланом и глутаровым альдегидом так, как в примере 1, приливают 54 мл экстракта ларвоцист альвеококка с концентрацией белка 20 мг/мп. Смесь ин- 10 кубируют при 4 С в течение 17 ч. К отмытому так, как в примере 1, иммуносорбенту приливают 48 мл очищенной от антител к хозяину паразита антисыворотки против экстракта ларвоцист 15 альвеококка и инкубируют при комнатной температуре в течение 4 ч при перемешивании. Истощенную антисыворотку сливают, промывку иммуносорбента и элюцию антител проводят также, 2п как в примере 1.

Выход антител с сорбеита составип

42 мг. Иммунохимпческпй анализ истощенной антисыворотки показал отсутствие в ней антител к антнгепам нара- 25 зита. Выделенные антитела были исполь" !

3oI3апы для получения эритроцитарного антнтельпого диагностикума.

Применение силохрома со средним диаметром пор от 100 до 200 нм в качестве основы обеспечивает большую емкость иммуносорбента в конкретных иммунологических системах. Использование воды вместо толуола на стадии аминирования силохрома )"-аминопропилтриэтокснсиланом упрощает способ и делает его неогнеопасным.

Полученный иммуносорбент может быть эффективно использован для выделения специфических антител к антигенам паразита и для препаративной очистки антисыворотки. Выделенные антитела могут быть применены для

1 приготовления антительных эритроцитарных диагностикумов и в иммунохимических исследованиях. Очищенные от антител к белкам хозяина антисыворотки могут быть использованы для характеристики антигенных препаратов и для оценки пригодности эрнтроцптарных диагностикумов,