Способ определения минимальной ингибирующей концентрации антибиотиков

Способ определения минимальной ингибирующей концентрации антибиотиков

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ШНКМАЛЬНОЙ ИНГИБИРУЩЕЙ КОНЦЕНТРАЦИИ АНТИБИОТИКОВ , включающий их кратное разведение , стабилизацию, высушивание, добавление культуры микроорганизмов и термостатирование, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, раствор антибиотика стабилизируют смесью, содержащей глюкозу, фенолрот, сахарозу , поливиниловый спирт, буферный раствор, при следующем соотношении компонентов, мас.%: Антиби.отик 0,00000025-0,000016 1,4-1,6 Глюкоза 0,015-0,025 Фенолрот О,14-0,16 Сахароза Поливиниловый 0,9-1,1 спирт Буферный Остальное раствор затем полученную смесь наносят на Ь гидрофобную поверхность бумажного диска, высушивают на воздухе, далее добавляют каплями суспензию микроорганизмов и по изменению цвета инди-каторной бляшки определяют минимальную ингибирующую концентрацию антибиотика . СП tc ел

„„SU„„11 1 A

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (SlI4 С 12 Q 1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTQPGHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ зу, поливиниловый спирт, буферный раствор, при следующем соотношении компонентов, мас.7:

Антибиотик 0,00000025-0,0000 16

1,4-1,6

0,015-0,025

О, 14-0, 16

0,9 — 1,1

Буферный раствор

Остальное затем полученную смесь наносят на гидрофобную поверхность бумажного диска, высушивают на воздухе, далее добавляют каплями суспензию микроорганизмов и по изменению цвета инди-каторной бляшки определяют минимальную ингибирующую концентрацию антибиотика.

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3679329/28-13 (22) 27. 12. 83 (46) 07.08.85. Бюл. М 29 (72) В.M. Никитин и С.И. Замфир (71) Кишиневский государственный медицинский институт (53) 576.8(088.8) (56) Патент СПА Н 3957583, кл. С 12 q 1/04, 1976.

Патент США N 4153512, кл. 195-103.5, 1976 (прототип). (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИНИМАЛЕН>НОЙ ИНГИБИРУЮЩЕЙ КОНЦЕНТРАЦИИ АНТИБИОТИКОВ, включающий их кратное разведение, стабилизацию, высушивание, добавление культуры микроорганизмов . и термостатирование, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, раствор антибиотика стабилизируют смесью, содержащей глюкозу, фенолрот, сахароГлюкоза

Фенолрот

Сахароза

Поливиниловый спирт

1171525

Составитель Л. Покрышкина

Редактор Н. Гунько Техред М.Гергель Корректор С. Шекмар

Заказ 4820/28 Тираж 525 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к микробиологии и предназначено для ускоренного определения минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика в отношении исследуемых культур микроорганизмов.

Цель изобретения — ускорение и упрощение способа.

Способ осуществляется следующим образом. 1О

Из бумаги, покрытой полимерной пленкой, вырезают диск диаметром

10 см и на его гидрофобной поверх— ности наносят 22 квадратных зоны площадью 1,5õ1,5 см, как указано на 15 чертеже. В фарфоровую ступку берут навеску следующих порошков, r: глюкоза 1,5; сахароза 0,15; фенолрот

0,02; поливиниловый спирт 1, растирают до получения мелкодисперсной щ пудры красного цвета, которую растворяют в 98 мл фосфатного буферного раствора рН 8,0 на водяной бане при подогревании до 100 С. о

Отобранные антибиотики в стандарт-2 ных флаконах разводят стерильной дистиллированной водой с таким расчетом, чтобы после добавления 0,1 мл раствора антибиотика в 0,9 мл приготовленного ранее субстратно-индикаторноклеющего раствора со стабилизатором в 1 мл полученной смеси содержалось соответственно ?00, 100, 50, 25 и 12,5 ЕД. В центр каждой зоны микропипеткой наносят по 0,02 мл смеси с антибиотиком согласно обозначениям

35 на диске, за исключением контрольных зон КК и КФ, где размещают только субстратно-индикаторно-клеющий раствор со стабилизатором (0,02 мл). Подо, сушивают при 20 С до полного высыхания микрокапель, затем готовые тест-системы складывают в картонную коробку и хранят в холодильнике при

4-8 С.

В крышку чашки Петри укладывают готовую тест-систему и на каждую бляшку наносят по одной капле испытуемой микробной культуры. Применяют

18-часовую агаровую микробную кульз туру концентрацией 2 10 м. т. в 1 мл.

В контрольную зону КФ наносят каплю стерильного физиологического раствора. Чашку с пробами закрывают, предварительно размещая внутри по окружности смоченную водопроводной водой полоску фильтровальной бумаги, ино кубируют в термостате при 37 С 5 ч.

Учет результатов проводят визуально.

Изменение цвета капли из красного в желтый указывает на устойчивость испытуемой микробной культуры к соответствующим концентрациям данного антибиотика, а сохранение первоначального красного цвета — на ингибицию ферментативной активности и размножения микробной культуры соответствующей дозой антибиотика. Минимальную ингибирующую концентрацию антибиотика в отношении исследуемой микробной культуры определяют по величине ингибирующей дозы. Например, в каплях с концентрацией пенициллина от 0,25 до 1 ЕД окраска стала желтой, а с 2 ЕД и выше-красной, следовательно МИК пенициллина равняется 2 ЕД.