Способ диагностики гипоксии мозга у новорожденных

Способ диагностики гипоксии мозга у новорожденных

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПОКСИИ МОЗГА У НОВОРОЖДЕННЫХ путем биохимического исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют содержание гомокарнозина и при его появлении диагностируют гипоксию мозга.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU„„1175442 А (1)4 А 61 В 10/00 G 01 N 33 48

OllHCAHHE ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3611833/28-13 (22) 24.06.83 (46) 30.08.85. Бюл. № 32 (72) С. Б. Бережа нская, Н. Б. Андреева, М. Г. Маклецова, А. А. Кричевская и Т. И. Бондаренко (71) Ростовский-на-Дону научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии и Ростовский-на-Дону ордена Трудового

Красного Знамени государственный университет им. М. А. Суслова (53) 616.07 (088.8) (56) Чиковани М. И. Значение цитохимических исследований в ранней диагностике и определении прогноза гипоксических повреждений мозга у новорожденных. — Педиатрия

1981, № 2, с. 27 — 31. (54) (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ГИПОКСИИ МОЗГА У НОВОРОЖДЕННЫХ путем биохимического исследования крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют содержание гомокарнозина и при его появлении диагностируют гипоксию мозга.

1175442

Первые

7 дней жизни 73,5 + 8,9

От следов до 142,3

55

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для ранней и достоверной диагностики гипоксии мозга у новорожденных.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Пример 1. У ребенка берут 1 мл крови.

Прибавляют 10 мл 12О/р-ной трихлоруксусной кислоты (ТХУ) для осаждения белка.

Центрифугируют в течение 20 мин при

6000 об/мин. Центрифугат пропускают через ионнообменную колонку (размер 3,5Х0,5 см) со смолой Дауэкс 50wX 8 (200 — 400 меш.) в натриевой форме, уравновешенную 0,1 М натрий-ацетатным буфером рН 4,6, после чего колонку промывают 1 мл 0,1 н, 7 мл 1 н, 2 мл 1,5н, 1 мл 3 н соляной кислоты. Гомокарнозин выходит во фракции 3 н НС1. Последний элюат выпаривают досуха на водяной бане. Сухой остаток растворяют в

0,1 мл воды. 0,08 мл раствора наносят на хроматографическую бумагу (ленинградская марки «С»). Разделение проводят в системе бутанол-уксусная кислота — вода (50:12:50) в течение 18 ч методом нисходящей хроматографии (применяют бутиловый спирт нормальный, ледяную уксусную кислоту). Местоположение гомокарнозина определяют реакцией Паули. С неокрашенной хроматограммы участок, соответствующий гомокарнозину, вырезают, измельчают и элюируют 2 раза в 5 мл 6 н соляной кислоты.

Объединенный элюат гидролизуют 18 ч.

Гидролизат выпаривают досуха. Остаток отмывают от соляной кислоты, растворяют в

0,1 мл воды и по 0,05 мл раствора наносят на полоски хроматографической бумаги размером 2 Х 28 см. Линия старта отстоит от катода на 14 см.

Электрофорез осуществляют в натрийацетатном буфере рН 4,6 при напряжении тока 250 †3 В (аппарат низковольтного электрофореза) в течение 21/2 ч при комнатной температуре. Фореграммы сушат и окрашивают 0,5О/о-ным раствором нингидрина в ацетоне. Область фореграммы, соответствующую положению ГАМК, вырезают, элюируют 3 мл 10 /о-ного ацетона и через

30 мин колориметрируют на ФЭК-М при длине 570 нМ.

Содержание гомокарнозина вычисляют по количеству освободившейся при гидролизе гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК) и выражают в микромолях на

1000 мл (1 л) крови.

Определение содержания ГАМК проводят с помощью колибровочных кривых.

Предлагаемым способом обследованы

76 новорожденных. Сопоставлены данные о содержании гомокарнозина в крови здоровых новорожденных и перенесших перинатальную гипоксию. Установлено повышение

45 уровня гомокарнозина в крови последних при рождении и, в первые дни жизни (р 0,001) . При исследовании содержания гомокарнозина в возрасте 3 мес — 5 лет у детей, перенесших тяжелую гипоксическую энцефалопатию (17), в 3-х случаях определены его следы, в остальных содержание колебалось от 26,2 до 279,8 мкмоль/л.

Одновременно проведено исследование в крови новорожден ных содержа ни я кса нт и нагуанина. Выявлено, что уровень ксантинагуанина повышается у всех новорожденных при любой степени тяжести перинатальной гипоксии. Гомокарнозин отмечен в крови детей, перенесших перинатальную гипоксию тяжелой степени, в 76 /О случаев и лишь в 34О/О у новорожденных с легкой степенью перинатальной гипоксии. У родившихся в состоянии легкой асфиксии повышение уровня гомокарнозина отмечено в тех случаях, когда плод испытывал длительно состояние внутриутробной гипоксии вследствие хронических заболеваний матери и патологического течения беременности.

Гомокарнозин строго нейроспецифичен и ни в каких других тканях и биологических жидкостях в норме не определяется.

Появление его в крови новорожденных, перенесших перинатальную гипоксию, свидетельствует о нарушении гематоэнцефалического барьера вследствие глубоких метаболических и структурных изменений мозга, которые на последующих этапах развития ребенка могут проявится нарушениями развития центральной нервной системы.

Динамическое наблюдение за детьми, имевшими высокий уровень гомокарнозина в крови при рождении, выявило появление у них нарушений функционального состояния центральной нервной системы в виде отставания в умственном развитии, приступов эпилепсии, детского церебрального паралича. Тщательное клиническое обследование исключало возможность других, кроме перинатальной гипоксии, причем выявленной патологии (наследственной патологии центральной нервной системы, внутриутробной и постнатальной бактериальной и паразитарной энцефалопатиии).

Возраст M + Пределы колебаний

3 мес— От следов

5 лет 123,8+ 29,8 до 279,8