Способ изготовления ферментного электрода

Способ изготовления ферментного электрода

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ .ФЕРМЕНТНОГО ЭЛЕКТРОДА, включающий иммобилизацию фермента на поверхностном слое стеклянного рН-электрода, отличающийся тем, что, с целью снижения времени стационарного ответа и повьшения чувствительности ферментативного исследования, на поверхность стеклянного электрода наносят слой латекса натурального каучука ИР-42 и водный раствор фермента в концентрации 20-80 мг/мл .в соотношении от 1:2,5 до 1:1 сушат на воздухе 20-60 мин, полученный слой фиксируют 0,2.-0,3%-Hbw водным раствором глутарового альдегида при 1-6С , в течение 8-12 мин.

, СОЮЗ СОВЕТСКИХ .

ССФИ Л

PECflVSJNH (31)4 01 Й 33/48

ГССУДФРСТНЕНКИЙ КОМИТЕТ СССР д hlNI

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

® р др леr a A

К АВТОРСКОМУ. СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3628169/28-13 (22) 25. 07. 83

{46) 30. 08. 85. Бюл. Ф 32 (72) Б.И.Курганов, В.В.Сорочинский, P.Ø.Áaëóãÿí и М.М.Янина (53) 616.07 (088.8) (56) Clark 2.С.I., Jyons С. E7ectrole systems for continuens monitoring

in cardiovascular surgery. Ann. N.I.

Acadsci 1862, 192, р.р. 29-45.

Nigsson Н., ИсеИипд А;С., Nosbach К. Determination of glucose, urea and penicillin using enzyme рН-electrodes. - Biochim. Biophys, Acta, 1973, 320, р.р. 529-534.

„„SU„„1176250 A. (54)(57) СПОСОБ ИЗГОТОВШ :НИЯ ФЕРМЕНТ° НОГО ЭЛЕКТРОДА, включающий иммобили. зацию фермента на поверхностном слое стеклянного рН-электрода, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью снижения времени стационарного ответа и повышения чувствительности ферментативного исследования, на поверхность стеклянного электрода наносят слой латекса натурального каучука ИР-42 и водный раствор фермента в -концентрации 20-80 мг/мл в соотношении от 1:2,5 до 1:1 сушат на воздухе 20"60 мин, полученный слой фиксируют 0,2"0,3X-ным водным .раство- 9 ром глутарового.альдегида при 1-6 С, в течение 8-12 мин. ный буфер, содержащий 10 М ЭдТА и 0,9Х хлорида натрия, рН 7,2) .

В качестве измерительного прибора используют рН-метр рН N62, снабженный самописцем "РЕА 260" (" Radiometer", Дания), или рН-340 (СССР), а в качестве рН-электрода используют стеклянные рН-электроды С2040С ("Radiometer", Дания) или ЭСЛ-41Г-04 (СССР) .

Характеристики полученного -.аким способом ферментного рН-электрода: время достижения 99Х-ного уровня от величины стационарного ответа (Г ) составляет 60-80 с, максимальная чувствительность в единицах рН на декаду (5) составляет

0,4, величина максимального изменения рН при насыщающих концентрациях мочевины (а рН ) равна О, 7 единиц рН. Снижение чувствительности электрода после двух месяцев непрерывной работы при комнатной температу- ре составило 10 от исходной.

Пример 2. Ферментный рНэлектрод получают способом, аналогичным примеру 1, с тем отличием, что растворяют 8 мг уреазы в 0,1 мл буфера, сушку проводят в течение

60 мин и электродное покрытие обрабатывают О,ЗХ раствором глутарового альдегида в течение 12 мин. Характеристики ферментного электрода: ь р = 60-80 с, S = 1, 1 ед. рН, рН, = 1,9 ед. рН, снижение чувствительности электрода после двух месяцев непрерывной работы при комнатной температуре составило 8Х от исходной.

Пример 3. Ферментный рН электрод получают способом, аналогичным примеру 1, с тем отличием, что к раствору уреазы добавляют

0,04 мл латекса (соотношение 2,5:1) сушку проводят в течение 60 мин.

Характеристики ферментного электрода: Тд99 30-40 с, S= 0,7 ед. рН, дрН сю = 1,1 ед. рН. Снижение чувствительности электрода после двух месяцев непрерывной работы при комнатной температуре составило 11Х от исходной.

Пример 4. Для изготовления глюкозооксидазного рН-электрода навеску глюкозооксидазы (10 мг) (препарат фирмы "Boehvinger", ФРГ, с удельной активностью 100 Е/мг), содержащую 1000 Е, растворяют в

1 1176250

Изобретение относится к измерительной технике, в частности к способам изготовления ферментных рНэлектродов для определения концентрации субстратов ферментативных реакций, сопровождающихся связыванием или освобождением ионов водорода, и может найти применение в здравоохранении и медицине при проведении клинических анализов, при контроле проницаемости ультрафильтрационных устройств, например, во время, сеанса гемодиализа.

Целью изобретения является снижение времени стационарного ответа и повышение чувствительности ферментативного исследования.

Способ осуществляют следующим образом.

На чувствительную поверхность ?0 стеклянного рН-электрода при комнатной температуре наносят слой эмульсии, содержащей водный раствор фермента в концентрации 20-80 мг/мл и . латекс натурального каучука ИР-42 (в соотношении от 1:1 до 1:2 5 и сушат на воздухе в течение 20-60 мин, затем поверхность электрода обрабатывают водным раствором глутарового альдегида в концентрации 30

0,2-0,3Х в течение 8-12 мин при о

1-6 С. После удаления следов глутарового альдегида ферментный рН-электрод готов к использованию.

Пример 1. Для изготовления уреазного рН-электрода навеску уреазы 2 мг (препарат фирмы "Nerck", с удельной активностью 200 Е/мг), соответствующую 400 Е, растворяют в

О, 1 мл 0,2 М трис НСВ буфера, содер- 40 жащего 10 Ì ЭДТА, рН 7,4 при 6 С в течение 12 ч, а затем добавляют

0,1 мл латекса натурального каучука

ИР-42 (соотношение 1:1). Полученную эмульсию тонким слоем наносят 45 на чувствительную поверхность стеклянного рН-электрода и сушат на воздухе в течение 20 мин при комнатной температуре. Затем электродное покрытие обрабатывают 0,2Х-ным водным S0 раствором глутарового альдегида (препарат фирмы "Merck") в течение о

8 мин при 6 С. Электрод отмывают

50 мл дистиллированной воды в течение 10 мин, а затем 50 мл буферного у раствора (в течение 15 мин) который-используют при аналитическом

-3 определении мочевины (10 M фосфат1176250

Составитель В.Чистяков

Редактор M.Håäîëóæåíêo Техред С.Мигунова Корректор E.Ñèðoõìàí

Заказ 5353/44 Тираж 897 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-З, Раушская наб., д. 4/5

Филиал IIIIII "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

0,2 мл 0,1 M фосфатного буфера, содержащего 10- M ЭДТА, рН 7,0 при о

4 С в течение 12 ч, затем добавляют

0,15 мл латекса ИР-42 (соотношение

1,3:1). Далее ферментный рН-элект- 5 род получают способом, аналогичным примеру 1, с тем отличием, что сушку на воздухе проводят в течение

40 мин, обработку глутаровым альдегидом проводят при 1 С.

Характеристики полученного таким способом глюкозооксидазного рН-электрода: "099 60-80 с, 5 = -0,9 ед. pHg (dpH oo = -1,6 ед. рН. Снижение чувствительности электрода после 1 меся-1 ца непрерывной работы при комнатной температуре составило ЗОЖ от исходной.

Изобретение позволяет упростить технологию изготовления ферментного рН-электрода за счет уменьшения количества операций и количества исходных ингредиентов, а также за счет снижения температуры изготовления ферментного рН-электрода до комнат-. ной, снизить время развития стационарного ответа и повысить чувствительность ферментативного исследования.