Способ разделения мононуклеарных фагоцитов на субпопуляции

Способ разделения мононуклеарных фагоцитов на субпопуляции

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ФАГОЦИТОВ НА СУБПОПУЛЯЦИИ путем фракционирования исходной суспензии клеток, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, клетки последовательно инкубируют в градиенте температуры 4-37°С на полистироловых чашках , предварительно обработанных 0,25%-ной фетальной телячьей сывороткой , и субпопуляции мононуклеарных фагоцитов получают в виде монослоя .

(19) ((>) СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

2 А (51j4 G 01 N 33/48 н у

-.ч

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСН0МУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУД АРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3622962/28- 13 (22) 14.07.83 (46) 15.09.85. Бюл. 1(- 34 (72) С.В.Родионов, В.И.Пантин, И.Г.Макаренко и В.М.Земсков (53) 578.085.23 (088.8) (56) Се1LuLar ImmonoLogy. v. 38, 1978, р. 94-104. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ IIOHOНУКЛЕЛРНЫХ ФЛГОЦИТОВ НА СУБПОПУЛЯЦИИ путем фракционирования исходной суспензии клеток, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью упрощения способа, клет .и последовательно инкубируют в градиенте температуры 4-37 С на полистироловых чашо ках, предварительно обработанных

0,257.-ной фетальной телячьей сывороткой, и субпоиуляции мононуклеарных фагоцитов получают в виде Мо нослоя.

179223

Составитель В.Дроздов

Редактор М.Петрова Техред А.Бабинец Корректор В. Синицкая

Заказ 5666/45 Тираж 897 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

1 1

Изобретение относится к иммунологии и цитологии.

Цель изобретения — упрощение способа.

Пример. Разделение резидентных перитонеальных макрофагов.

Получают суспензию клеток перитонеального эксудата.от 30-35 интактных мышей самцов линии Г, (C8AxCC57B) весов ?0-25 r. На культуральных чашках из полистирола, предварительно пбкрытых 0,25Х-ной. фетальной телячьей сывороткой (ФТС), производят адгеэию полученных клеток в культуральной среде 199 с

0,25_#_-.сой ФТС и 20 мМ НЕРЕ-буфера при рН б,9 прн температуре 4оС в течениv. 1 ч. Затем неприлипшие клетки переносят на другие чашки для о адгеэии при 10 С в течение 1 ч. Далее суснензию клеток, неприлипших о при 10 С, переносят на новые чашки ,и проводят адгезию при 28 С 1 ч.

1 .Ha последнем этапе неприлипшие при о о

28 С клетки инкубируют при 37 С 1 ч, добавляя в среду ФТС до 10Х конечной концентрации. Все полученные в

1 виде монослоев субпопуляции тщательно отмывают для удаления лимфоцитов.

Для определения активности ферментов клетки лизируют дистиллированной

5 водой путем трехкратной процедуры замораживания-оттаивания. Для каждой иэ субпопуляций перитонеальных макрофагов определяют следующие показатели: число клеток, активность лактатдегидрогеназы, одного из ключевых ферментов гликолиза, активность цитохромоксидазы, ключевого фермента окислительного фосфорилирования, активность оргинаэы, ключевого фер15 мента цикла мочевины и одного из основных ферментов катаболиэма аминокислот, а также уровень Гс рецепторов, являющихся ключевыми структурами для осуществления макрофагами фа20 гоцитарного процесса, медиирования неспецифических и специфических иммунологических реакций.

Каждая иэ полученных субпопуляций перитонеальных макрофагов харак"

25 теризуется своими отличительными свойствами, различия между субпопуляциями носят достоверный характер,