Способ получения биомассы с днк-лигазной активностью

Способ получения биомассы с днк-лигазной активностью

Реферат

 

(19)SU(11)1179659(13)A1(51)  МПК ⁵    _C12N9/00(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯк авторскому свидетельствуСтатус: по данным на 17.01.2013 - прекратил действиеПошлина:

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ С ДНК-ЛИГАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ

Изобретение относится к способам получения биомассы с активностью ДНК-лигазы (полинуклеотидлигазы, КФ.6.5.1.1). Целью изобретения является увеличение биосинтеза ДНК-лигазы за счет предотвращения эмминации гибридной плазмиды у дочерних клеток. Приготовление посевного материала. Исходную культуру E. coli ВКМ В-1449Д пересеивают в чашку Петри с селективным фактором (ампициллин 30 мкг/мл) и выращивают при 30^оС в течение 18 ч. Культуру из чашки Петри пересеивают в пробирку с 10 мл мясо-пептонного бульона и выращивают на качалке при 30^оС в течение 4 ч. Полученной культурой засеивают колбы, содержащие 350 мл среды следующего состава, г/л: Дрожжевой автолизат, мл/л 10 Глюкоза 5,0 MgCl₂ 5,0 KH₂PO₄ 4,5 Na₂HPO₄ 23,0 (NH₄)₂ SO₄ 8,0 Пептон 20,0 р-р микроэлементов, мл/л 10 рН среды 6,7-6,9. Выращивание инокулята проводят в колбах на качалке 180-200 об/мин при 30^оС в течение 12 ч. Ферментация культуры производится после добавления инокулята из расчета 20 мл инокулята на 1 л питательной среды следующего состава, г/л: Дрожжевой автолизат, мл/л 3,0 Глюкоза 1,0 MgCl₂ 1,0 KH₂PO₄ 3,0 Na₂HPO₄ 16,0 (NH₄)₂SO₄ 3,0 Пептон 10,0 р-р микроэлементов, мл/л 5,0 Ферментацию проводят при 40^оС при перемешивании и аэрации, обеспечивающей концентрацию растворенного кислорода в среде рО₂ 30-40% в течение начальных 2 ч и рО₂ 50-60% до окончания ферментации, рН поддерживают в пределах 6,9-7,1 10% -ным раствором NaOH. Процесс заканчивают в конце экспоненциальной фазы роста. Выход биомассы 4 г/л, активность ДНК-лигазы 50000 ед/г биомассы 2 10⁵ ед/л культуральной жидкости.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ БИОМАССЫ С ДНК-ЛИГАЗНОЙ АКТИВНОСТЬЮ путем культивирования клеток штамма E.coli с гибридной плазмидой, содержащей ген ДНК-лигазы в условиях аэрации, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода ДНК-лигазы, питательная среда содержит однозамещенный фосфорнокислый калий в концентрации 3 - 4,5 г/л и двузамещенный фосфорнокислый натрий в концентрации 16 - 23 г/л при рН 6,9 - 7,1, а концентрацию растворенного кислорода при аэрации создают 20 - 40% от насыщения воздухом в начальный период культивирования и 40 - 60% в конечной стадии культивирования.