Политрипептиды,обладающие энантовой селективностью в реакциях гидролиза @ -нитрофениловых эфиров карбобензокси - @ - и @ -аланина

Политрипептиды,обладающие энантовой селективностью в реакциях гидролиза @ -нитрофениловых эфиров карбобензокси - @ - и @ -аланина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Политрипептиды общей формулы Н-(А-В-С)„ -ОН, тн A.- NH-CH--CO-I -NH-CH-CH-CO:нг ; СНз f-f fl tlH x CH B- - IH-CH-CO- или -HH- CH-COCH CWCHj-CeH OH C-IIH-CH-CO (СИЛ COOH. , c мол1м. 6500-10000, обладающие энантовой селективностью, в реакцияхгидролиза ц -нитрофениловых эфиров карбобензокси- О и L -аланина.:

СО)ОЗ COBETCHHX

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (!9) ()1) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСН0МУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3734282/23-05 (22) 28. 04. 84 : (46) 30.09.85. Бюл. Ф 36 (72) Ш.X. Халиков, М.И. Бердыева, Р.В. Валиев, М.М. Собиров и С.Д. Варфоломеев (71) . Таджикский государственный университет им. В.И. Ленина и МГУ им. М.В. Ломоносова (53) 678:675 (088.8) (56) J.N. Uan der Eijk et aI. Activity and enantioseIectivity in the

hydroIisis of substituted phenyI

esters by opticaIIy active .imidazoIecontainin8 poIy (iminomethyIenes).

JournaI of the RoyaI NetherIand

ChemicaI Society, 1981, 1.00/б. (54) ПОЛИТРИПЕПТИДЫ, ОБЛАДАЮЩИЕ

ЭНАНТОВОИ СЕЛЕКТИВНОСТЬЮ В РЕАКЦИЯХ

ГИДРОЛИЗА П -НИТРОФЕНИЛОВЫХ ЭФИРОВ

КАРБОБЕНЗОКСИ-3- и L -АЛАНИНА. (51)4 С 08 С 69/10 // С 07 С 99/12. (57) Политрипептиды общей формулы

H-(A-8-С)„ -ОН, I

А,--NH- Н-СО- ИПК

Н -NH-CB-P-СO2 — и сн

N МН ъг

CH 1Н CH-C0- . или щ д Сд

СН 0Н СНз- C68 NOH 1Н-СН-CO (сН,), Ьюн с мол.м. 6500-10000, обладающие энантовой селективностью, в реакциях . гидролиза П -нитрофениповых эфиров карбобензокси- 3 и 1. -аланина..

1182

051 г в вакууме досуха. Получают 4, 36 г сырого продукта (I) с выходом 95%, (МЗр + 6,94 (С = 4 ЗА) R

Пример 2. f,Н-т г(ОВ Е1-Ceu(gBze)-OTcp (II)

К раствору 4,3 r продукта (I) в

15 мл CH СО добавляют 2 мл (1,5 экв) Tfa, энергично перемешивают в течение 40 мин при 20 С.

Растворитель упаривают досуха под вакуумом. Избыток Tfa удаляют обработкой бензолом. Остаток обрабатывают абсолютным эфиром.

Получают 4,8 r сырого продукта (II) с выходом 80%, Р 3 в+ 8,67 (С =

=4, ЭА) RIA = 0,64; RB = 0,9, Пример 3.

Во с-Ty r (OBz I) -GIu (y Br I) ОТср (I)

К охлажденному до -10 С раствору о . 2,5 r t-Вос-Tyr(OBzI)-OH и 3,6 r

DCC в 20 мл тетрагидрофурана при перемешивании добавляют 3 r

НСХ GIu(jBrL) OÒñð и 0,66 мл Et N.

При этой температуре смесь перемеши- 50 вают 2 ч, затем оставляют на 16 ч при комнатной температуре, выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме досуха..Остаток растворяют в gtoAC и промывают 5%-ным 55 раствором лимонной кислоты, водой, 0,5%-ным раствором соды, водой.

: Сушат над Na,SO . Фильтрат упаривают

Изобретение относится к химии полимеров, а именно к политрипептидам, обладающим энантовой селективностью в реакциях гидролиза h -нитрофениловых эфиров карбобензокси-ЭиI„ --апанина и используемых в качестве катализаторов для разделения рацемических аминокислот на оптические антиподы.

Целью изобретения является повы- 10 шение энантовой селективности полипептидов.

Изобретение иллюстрируется примерами, в которых использованы следующие сокращения: 15

t-Boc — третбутилоксикарбонил, о-NPS — ортонитрофенилсульфенил;

ОТср — 2,4,5-трихлорфениловый эфир, BzI — бензил, DNF — диметилформамид;

DCC — дициклогексилкарбодиимид;

Et3 N — триэтиламин; р NFA — паранитрофенилацетат, EtoAC — этилацетат 25

Z -карбобензокси, AIa-L — аламин, Ser-L — серии;

His-L — гистидин;

Туг-?, — тирозин; 30

GIn-L — глутаминовая кислота, ONP — ларанитрофениловый эфир;

С вЂ” концентрация;

S — - концентрация субстрата;

Š— концентрация политрипептида, 35

Tfa — трифторуксусная кислота;

К вЂ” константа первого порядка скорости расщепления субстрата;

К1, — условная константа второго . порядка скорости расщепления субстра-40 та.

Пример 1.

4-Вос-Àeà -Т г(OBze) -Qeu (у В Е)-OTcp III)

Синтезируют аналогично продукту (I), исходя из 1 г t-Вос-А?а-ОН, 1,8 г DCC, 4,1 r продукта (II), 0,673 мл Et3N. Получают 4,07 г продукта (III) -с выходом 90%.

Г ) — 11,1 (С = 2,5 3A),R(A = 0,95, R B = 0,67.

Пример 4.

Т1а,Н-Иа-Т г(Ooze)qeu(y Bze)-ОТсрIV)

Продукт (ХЧ) получают аналогично продукт (II), исходя иэ 3,4 г продукта (1?Х), растворенного в смеси (2:1) хлористого метилена и Tfa npu перемешивании в течение 4 ч. После соответствующей обработки получают

2,4 r продукта (IV) с выходом 78%.

R A = 0,56, RgB = 0,51.

Пример 5.

p îÞö Н-Ма-Тцг(OBzf)-Ми (y Bze)„-ОН (V)

i,7 г продукта (IV) растворяют в

1 7 r DMF, добавляют 1 г экв Et N.

Хорошо перемешивая, смесь оставляют о .при 20 С на 8 сут. Продукт выделяют обработкой смесью метанол-эфир (1:3). Выделенный продукт очищают диализом против смеси вода — диоксан (1:1) и лиофильно высушивают.

Получают 0,89 г полимера (V) с мол.м. 8280.

Пример 6.

Вос-Нiз(в Bze)-5er- Ки(бпла)-ОТср (VI)

Синтезируют аналогично продукт (I), исходя из 1,5 г t-Boc-.His (im BzI)-Бег, 0,94 r DCC, 2,5 r

3 118

HCI СЕи()ВкЕ)-ОТср и 0,64 мл Et3N

Получают 2,58 г продукта (ЧЕ) с выходом 89,27. Н»А = 0,36, R В =

= 0,72.

Пример 7. 5

HCQ HiS(jm8ze)-бег-СРи(& В)-OTcP(VII)

К раствору 4 r продукта (VI) в

20 мл абсолютного ЕСоАС добавляют

3,33 мл 3 н. НСЕ/EtoAC. Через 1 ч продукт осаждают сухим эфиром. Осадок неоднократно промывают эфиром. и высушивают под вакуумом. Получают 2,5 r продукта (VII) с выходом 64,17, т.пл. = 150 С,R»A = 0,13.

0,5 г продукта (V) растворяют в

12 мл смеси диоксан-метанол-концентрированная НС8 (1:1:0,25) и гидрируют над Pd чернью в течение 2 сут при 20 k 2 С. После выделения, о продукт (IX) диализуют против воды в течение 4 ч и лиофилизуют. Получают 0,28 г продукта. Этот продукт далее очищают гель-фильтрацией на 35 колонке (60 2,0 см), заполненной сефадаксом G -= - 25, элюант вода. Фракционирование проводят с помощью коллектора фракции LKB со скоростью

12 мл/ч. Для определения мол. веса, 40 продукт пропускают через откалибро,ванную маркерными белками колонку (60 2,0 см) с сефадексом G-50, со скоростью элюиции 12 мл/ч, Мол.M. равна 10000. 45

Пример 8. роРи Н- His (irn ВкС)-Ger-C Bu(g Bzl)-OH(VIII)

Синтезируют аналогично продукту (Ч), исходя из 2 г HCI His(imBzI)Ser-GIu(jBzI)-ОТср, 2 мл DMF, 0,36 мл Et N. Получают 1,7 r полимера, Пример 9.

poeи Н-(Ио-т г-/Ъ смеси метанол — DMF (1:10) в течение

2051 4 3 сут. Выход диализованного продукта против воды в течение 4 ч составляет 0,25 г. Мол.м. определенная гель-фильтрацией на сефадексе

G-50, равна 6500.

Пример 11. Кислотный гидролиз соединений (IX) и (Х) .

По 2 мг очищенных политрипептидов растворяют в разных ампулах со стократным избытком 6 í. HCg. Запаянные в токе азота ампулы выдеро живают при 105 С в течение 18 ч.

Затем ампулы вскрывают, содержимое сушат в вакуум-эксикаторе ° Остатки растворяют в дистиллированной воде и хроматографируют на бумаге в присутствии соответствующих свидетелей. Получают следующие результаты: К»АЕа — 0,31, Tyr — 0,41, 2б GIu — 0,27, R»His — 0,08, Ser

0, 18, GIu — 0,26. В качестве свидетеля для сравнения величин Rg на полоске хроматографической бумаги рядом с гидролиэатом наносят сод ответствующие стандартные аминокислоты, в результате получены следующие величины Н»: АЕа — 0,30, Tyr — 0,41, GIu — 0,26, His 0,09, Ser — О, 18.

Пример 12. В кювету с объемом 0,6 мл вносят 0,36 мл

0,1 M фосфатного буфера, рН 8,0, 0,2 мл водного раствора политрипептида с концентрацией О, 1 М (на мономерную единицу) и по 0,04 мл раствора субстратов с концентрациями 5 ° t0 1 ° 10 2"10 4 ° 10

6 ° 10 2, 8 ° 10 2, 10 ° 10 2 М. Кювету вносят в спектрофотометр и измеряют изменение оптической плотности раствора как функцию времени. При холостом опыте раствор политрипептида не вносят. Полученные значения констант приведены в табл. 1 (РН 8,0, t = 30 С).

В табл.2 приведена зависимость энантовой селективности от мол.м. политрипептидов.

Таким образом, изобретение iiossoляет повысить энантову селектийность политрипептидов.

1 4 82051

Таблиц1 1

Н-(His-Ser-GIu)„-ОН

Н-(AIa-Tyr-GIu)„ -ОН

Субстрат

-1

К, мин

KD/KL

К ц у моль /мин

Кт ° мин

К(оль/мин 1

2, 1 ° 10 3, 50" 10-

4 ° 10

6,67-10

1,30

12,3 10 24,6 ° 10-

1,17 11,5 ° 10 23 ° 10

1О 5 ° 10 2 1 ° 10-

8,8 10 17,7 10

П р и и е ч а и и я: В случае р-NFA концентрация полипептида равна

5 10 -" М (на мономерную единицу), а в случае

Z-L-АХа-ONP, Z-Р-AIa-ONP - 6 ° 10 М, язв < -%Иа -ЮН-CH-CO- I у - КК- Щ-(.()СН3 " СИз 6Н ОН

Таблица 2

H(His-Бег-СХц)„ОН

H(AIa-Tyr-GIu) ОН и

Мол и KD/KL

° °

Мол.м. КО/KL

10000

1,17 10000 1,30

Составитель Л. Валуев

Редактор Н. Швьщкая Техред Л.Микеш КорректорС. Черни.

Заказ 6066/24 р NFA

Z-D AIa-ONP

Z-L-АТа-Ойр, бег -КК-СН-..СО-, С3и -МН- Н-.СОl (,К2 — (Щ:: (2Ъ

O0B

6000 1, 12 6000 1,05

8000 .. 1, 17 7000 1,20

9000 1, 17 8000 1,25

Л р и м е ч а н и е:Для прототипа зна чения RDIKL =0,99.. Тираж 474 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,4