Способ культивирования шизотрипанум круци

Способ культивирования шизотрипанум круци

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Класс ЗОЬ, 11

Ж 118588

- СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTQPCKGMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Г. В. Романов

СПОСОБ КУЛЬТИВИРОВАИИЯ 1ЦИЗОТРИПАНУМ КРУЦИ

Заявлено 26 июля 1958 г. за М 604799/31 в Комитет но делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Изобретением является способ культивирования трипанозом шизотрипапум круци путем выращивания их на среде следующего состава:

Д.Д. пептона 200 мл

Мясной воды (0 5 кг мяса на 1 л воды) 200 мл

Дистиллированной воды 600 мл

Сухих кровяных зерен 20 г

Na HPO< 12Н20 Зг

КН PO 0,5 г

Глюкозы 10 г

Тиамина (витамина В,) 0,05 г

Готовится среда следу|ощим образом.

1) Приготовление Д.Д, пептона. Свежие cBHHbic AcPJI JIIH очища|от от жира и пленок и пропускают через мясорубку. На 1 кг фарша берут

0,5 л молодых IIHBHblx дрожжей, Ое5 л дист |ллированHOH воды H 40 мл химически чистой соляной кислоты уд. -. 1,19. Протеолиз проводят в бутылях.

Бутыли встряхивают для равномерного перемешивания смеси, ставят в водяную баню; смесь нагревают до 50" и держат при этой температуре до конца протеолиза белков. Через 1 час., а затем через 3 час. (от начала протеолиза белков при 50 ) в каждую бутыль прибавляют по

10 мл концентрированной соляной кислоты для поддержания оптимальной концентрации водородных ионов, которая постепенно падает по мере связывания кислоты. В конце протеолиза белков, который продолжается при 50 от 5 до 7 час., остатки нерасщепленных белков превращаются . в однородную порошковидную массу, а гидролизат теряет тягучесть и легко стекает со стеклянной палочки. Полная потеря гидролизатом тягучестч служит показателем для прекращения протеолиза. Гидролизат отстаивают 2 — 3 дня. фильтруют через ле-,кий ватпый фильтр, закрывают ватно-марлевсй пробкои и оставляют при 18 — 20 для отстаивания и дальнейшего протеоли.:- высокомолекулярных белковых продуктов ферментами, перешедшими в фильтра|. № 118588

В конпе второй фа:ы протеоли а остатки нерасщепленных продуктов белка оседают на дно, а гидролизат становится прозрачным и ПрИбрвтает темную окраску. Гидролизат декантируют, подщелачивают 40%-ным раствором едкого натра до рН-4,5, разливают в бутыли, инактивируют при 80 10 мин. После охлаждения гид1 олпзат фильтруют, консервируют приоавлением 1Яо хлороформа, плотно закрывают рез шовой пробкой и хранят в сухом, прохладном месте.

2) Приготовление мясной ьоды. Парную телятину, отделенную от костей и очищенную от жира и сухожилий, пропускают через мясорубку.

Мясной фарш настаивают на двойном количестве дистиллированной воды в течение 18 — 20 час. Смесь кипятят 30 мин., фильтруют, разливают в бутыли и стерилизуют при 115 в течение 30 мин .

3) Приготовление кровяных зерен. Свежие сгустки донорской крови (производственные отходы при получении противокоревой сыворотки) промывают холодной водопроводной водой, заливают двойным количеством дистиллированной воды, кипятят при постоянном перемешивании в течение 20 мин. Воду после кипячения сгустков быстро сливают, а сгустки крошат на мелкие кусочки, раскладывают в противни, покрытые фильтровальной бумагой и высушивают при 38 — 40 в течение 24—

36 час.

4) Приготовление среды. Накануне приготовления среды развешивают кровяные зерна: в пробирки по 0,1 г и в матрацные колбы по 4 г (пробирки и матрацные колбы должны быть из нейтрального стекла).

В пробирки прибавляют по 1 лл, а в колбы †40 ил дистиллированной воды, подщелоченной раствором едкого патра до рН = 8,3 — 8,4 и автоклавируют при 127 (1,5 атм) в течение 1 час.

По приведенной прописи смешивают Д.Д. пептон, мясную и дистиллированную воду. К смеси прибавляют фосфатные соли, предварительно растворенные при нагревании в небольшом количестве дистиллированной воды. Смесь энергично перемешивают и постепенно нагревают приблизительно до 80, подщелачивают 10% раствором едкого натра до рН = 8,0 — 8,2 (по индикаторной бумажке с креозоловым красным) и кипятят 10 — 12 мин.

Бульон отстаивают и фильтруют при температуре около 60 через полотно или плотный ватно-марлевый фильтр. К фильтрату прибавляют глюкозу, устанавливают рН = 7,6, кипятят 1 — 2 мин., затем прибавляют тиамин, фильтруют через двойной бумажный фильтр, разливают в сосуд со стерильными кровяными зернами и стерилизуют при 100 45 мин.

Предмет изобретения

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Редактор А. К. Лейкина Гр. 139

Поди. к печ. 19.111-59 г.

Тираж 660 Цена 25 коп.

Информационно-издательский отдел.

Объем 0,17 и. л. Зак. 1397

Типография Комитета по делам изобретений н открытий при Совете Министров СССР

Москва, Петровка, 14.

Способ культивирования шизотрипанум круци, отличающийся тем, что, с целью удешевления и увеличения производства, шизотрипанум круци выращивают на питательной среде, состоящей из кровяных зерен, полученных из сгустков донорской крови и добавленного к ним витаминизированного тиамином фосфато-буферного бульона, изготовленного из Д.Д. пептона (продукта двухфазного ферментативного расщепления свиных желудков и молодых пивных дрожжей в присутствии соляной кислоты) и мясной воды.