Способ идентификации самоопыленных линий кукурузы по компонентному составу зеина

Способ идентификации самоопыленных линий кукурузы по компонентному составу зеина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ САМООПЫЛЕННЫХ ЛИНИЙ КУКУРУЗЫ ПО КОМПОНЕНТНОМУ СОСТАВУ ЗЕРНА, включающий размол зериа, экстракцию из него белка , электрофорез экстракта в полиакриламвдном геле в трубках, отличающийся тем, что, с целью повышения точности при подборе пар для получения гибридов кукурузы , экстракцию белков ведут спиртовым раствором мочевины, электрофорез экстракта осуществляют в полиакриламидном геле, содержащем 6-7 М мочевину в уксуснокислой среде в трубках длиной 8-10 см, в течение 80-100 мин, причем идентификацию компонентов проводят по электрофоретической подвижности относительно компонента С 40. g (Л с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

ВИ %Ю

РЕСПУБ ЛИК

33 A (19) (11)

1 11 4 A 01 Н 1/06

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫПФ

OllHCAHNE HSOBPETEHHR

К АВТОРСКОМУ СВИДЕГЕЛЬСТВУ (2! ) 3676325/30-15 (22) 11.11.83 (46) 30.11 ° 85. Бюл. Ф 44 (71) Казахский научно-исследовательский институт земледелия им. В.P.Âèëüямса (72) 10.В. Перуанский и В.Н. Савин (53). 581.19(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

В 545306, кл. А 01 Н 1/06, опублик °

1972.(54) (57) СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ САМО

ОПЫЛЕННЫХ ЛИНИЙ КУКУРУЗЫ ПО KOMIIOНЕНТНОИУ СОСТАВУ ЗЕРНА, включающий размол зерна, экстракцию из него бел" ка, электрофорез экстракта в полиакриламидном геле в трубках, о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности при подборе пар для получения гибридов кукурузы, экстракцию белков ведут спиртовым раствором мочевины, электрофорез экстракта осуществляют в полиакриламидном геле, содержащем 6-7 M мочевину в уксуснокислой среде в трубках длиной 8-10 см, в течение

80-!00 мин, причем идентификацию компонентов проводят по электрофоретической подвижности относительно компонента С 40.

1194333

Таблица !

Концентрация мочевины, моль

Показатели

3,0 4,0

0 0 25 0 5 1,0 2,0

Характер раствора после упаривания при

60-65 С

Проз- Проэрач- Проз- Проз- Прозрач- ный рачный рачный рачный ный

Опалес- Кристал» цирую- лизация щий мочевины

8 Увеличение числа ком- Стабильно воспроиэводипонентов до 12-15 мое число компонентов

Число компо" нентов зеина

4

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к се,лекции растений.

Цель изобретения - повышение точности при подборе пар для получения гибридов кукурузы.

Самоопыленные линии кукурузы Казахского НИИ земледелия НО 14 (6-е поколение), НО 16 (10-е поколение), Н0 134 (6-е поколение), Н0 139 (10-е поколение), НО 145 (8-е поколение) использовались в опыте. 10 зерен каждой линии индивидуально освобождают от зародыша, эндосперм растирают в ступке, взвешивают и заливают

10-кратным количеством 2 М раствора мочевины в 70Х этаноле, экстракцию проводят в центрифужных пробирках при постоянном перемешивании в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем пробирки помещают в водяную баню при 60-65 С на 1 ч. Содержимое пробирок центрифугируют при

5000 g 15 мин. Супернатант переносят в бюкс и выпаривают до появления на верхнем обрезе бюкса пояска из кристаллической мочевины. В бюкс добавляют 50 мг сахарозы и при помешивании ее растворяют. Экстракт зеина наносят на гель в количестве 0,040,06 мл в двух повторностях.

Как видноиз данныхтабл. 1,стабильный спектр по числу компонентов зеина достигается приизвлечении зеинового комплекса из зерен 2-3М раствором моче вины в 703-ном этаноле. Оптимальной является концентрация мочевины 2N.

Электрофореэ зеина осуществляют по известной методике н стандартном приборе "Реанал" (BHP). Отличие состоит в том, что в гель вносят 6-7 М мочевину, используют столбики геля длиной 8-10 см, электродный буфер ,представляет собою 0,018 М уксусную кислоту, а время эпектрофореза 80100 мин.

1© Выявление компонентов зеина проводят в 77.-ной трихлоруксусной кислоте. Через 1-2 ч компоненты проявляются. пятью обособленными группами с относительными электрофоретическими

tS подвижностями (ОЭП) : 0-27 (группа

А), 28-35 (группа В), 36-40 (группа С), 4 1-59 (группа D), 60-100 (группа Е).

Расчет ОЭП проводят по наиболее

2О подвижному, постоянно присутствую щему во всех линиях зеиновому компоненту группы С-40.

Предварительные и определенные значения режима экстракции:и элект25 рофоретического деления зеина на составляющие его компоненты приведены в табл. 1-3. В табл. I показано влияние концентрации мочевины в 707-ном этаноле на полноту извлечения ком3р понентов зеина из эндосперма зерна (линия НО 139).

В табл, 2 показано влияние концентрации мочевины.в полиакриламидном геле на четкость выявления компонентов эеина после электрофореза (линия НО I39).

l l 94333

Таблица 2

Показат

Четкость компонентов

Четкое.Четкое

Диффузия компонентов

Диффузия

1-2 компонентов

Ю

Данные табл. 2 свидетельствуют об оптимальной концентрации мочевилы в полиакриламидном-гале, равной

6 М.

В табл. 3 показано влияние длины столбика полиакриламидного геля на проявление полного спектра зеина (линия НО 139).

Таблица 3, Компоненты зоны Е выСтепень полноты спектра

Проявляются компоненты всех зон спектра ходят из геля

Как видно из данных табл. 3, оп разделение компонентов внутри групп тимальной, гарантирующей воспроиз- 30 зеинового спектра, а свыше 100 мин . водство компонентного состава зеи- наиболее подвижные компоненты групнового спектра, является длина стол- пы Е выходят иэ геля. бика в 9 см.

Электрофорез проводят в течение На основании электрофоретических

80-100 мин Оптимальное время

35 спектров зеина по 10 зернам состави

90 мин. При времени электрофореза ли зеиновые формулы самоопыленных менее 80 мин наблюдается нечеткое линий.

НО 14 А (2)) 23 24 25 26 27 В 30 3237 С 38 40 Д 44 47 48 52

58 Е (74) 89 100

НО 16 А 22 23 25 26 27 В 30 32 34 С 39 40 Д 44 45 47 53 59

E 73 85 88 100

НО 134 А 25 27 В 30 32 36 С 39 40 Д 42 46 51 Е 67 81 94

НО 139 А 20 21 24 25 27 В 31 34 35 С 38 40 Д 44 46 50 53 58

Е (70) 73 (80) 87 90 100

НО 145 А 25 25 27 В 30 33 35 (38) С 40 Д 42 (47) 48 51

E (63) 85 99

Линии НО 16, HO 134 являются гомозиготными. Остальные линии различной степени гетерозиготны по компонентному составу зеина.

Самоопыленные линии различаются по числу компонентов в каждой группе, ОЭП компонентов в каждой группе, наличием вариабельных компонентов (эаключенных в скобки), т.е. компонентов, характерных для электрофоретических спектров зеина только у отдельных зерен внутри линии.

Выявленные различия у линий позволяют сделать два основных заключения. Зеиновые формулы, присущи каждой самоопыленной линии и дают sosvomsocvs по этим формулам идентифи

50 цировать линии. Наличие вариабелькых компонентов в зеиновом спектре внутри линии свидетельствует о неполной степени их гомозиготности.