Способ диагностики аллергии

Способ диагностики аллергии

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ДИАПЮСТИКИ АЛЛЕРГИИ путем инкубации лимфоцитов крови. пациентов в присутствии специфического аллергена с последующим подсчетом стимулированных клеток, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью повышения точности способа, аллерген используют в концентрации 0,01-0,05 мкг/мл, а лимфоциты обрабатывают 0,0005-0,0б1%-ным раствором хлортетрациклина до и после инкубации и при, увеличении количества флуоресцирующих клеток на 828% диагностируют специфическую аллергию.

С0О3 ССВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

151)4 Абl В 1000

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21). 3611709/28-14 (22) 27.06.83 (46) 15 ° 12 ° 85..Бюл. Р 46 (71) 2-й Московский ордена Ленина государственный медицинский институт им. Н. И. Пирогова (72) А. Г. Чучалин, Ю. "К. Новиков, Н. А. Бражникова, Л..Г. Коркина и В. К. Трескунов (53) 619.375(088.8) (56) Halpern В, Ку N.Т, Amache N. J.

of Allergy, 40, с. 168.

„„Я0„„1197640 A (54)(57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ АЛЛЕРГИИ путем инкубации лимфоцитов крови. пациентов в присутствии специфического аллергена с последующим подсчетом стимулированных клеток, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью повьппения точности способа, аллерген используют в концентрации

0,01-0,05 мкг/мл, а лимфоциты обрабатывают 0,0005-0,00IX-ным раствором хлортетрациклина до и после инкубации и при, увеличении количества флуоресцирующих клеток на 828% диагностируют специфическую аллергию.

1197640 пособ

Ф.И.О, галяонный ст.

Котиков С.В.

17 лет

ДП 111 .108 (дом. пыль) .Бронхиальная

-астма атоп,ф.

23 +++

Тимофеевка

Саркисян .Знатнов

68 +++

28

Бронх. астма Тимофеевка, Береза

54

Отрицательный

Способ относится к медицине и может быть применен при диагностике и лечении бронхиальиой астмы.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Способ осуществляется следующим образом.

Обычным образом берут у больного

2-3 мл венозной крови. Забор производят н присутствии 40 ед/мл гепарина. Разводят кровь в 3 раза фосфатным буфером и в градиенте плотности фиккола-верографина выделяют суспензию чистых лиимфоцитов. Доводят концентрацию клеток в суспензии до 5 10 мл "(среда 199 является средой цпя хранения исследования кпето1::) . В лунки стандартного иммунологическогд плато разливают по

0,05 мл суспензии лимфоцитов. Добавляют туда 5 мкл исследуемых аллергенов. В Одну лунку контрольную1 вносят 5 мкл физиологического растнора. Помещают плато в термостат и инкубируют при 37 С в течение о

60 мин. Затем содержимое лунок пастеровской пипеткой переносят в центрифужные пробирки, добавляют в каждую пробирку по 5 мл среды !99 и центрифугируют при 180gx10 мин.

Таким образом .отмывают избыток аллергена, не связавшегося с лимфоцитами, Осадок, который содержит клетки, связавшие аллерген, ресус1. пендируют н 0,05 мл бесцветной сре« ды Хенкса. Добавляют в каждую пробирку по 0,01 мл раствора хлортетрациклина в модифицированной среде

Хенкса„ содержашей 0,6 мИ СаС1 .

Концентрация раствора зонда 5 «

«10 моль/л. В такой концентрации хлортетрациклин не обладает цитотоксическим действием на лимфоциты.

Через 5-10 мин каплю окрашенной суспензии лимфоцитов наносят на предметное стекло,.накрывают покровным стеклом и исследуют в люминесцентном микроскопе, Длина волны щ возбуждающего света 360 нм, света флуоресценции 540 нм. В образовавшемся препарате живых окрашенных лимфоцитов часть клеток ярко флуоресцирует зеленым светом, часть остается неокрашенной. Подсчитывают число флуоресцирующих лимфоцитов на каждые 100 клеток в суспензии.

При обследовании предлагаемым способом контрольной группы здоровых добровольцев (7 человек) оказалось, что количество флуоресцирующих лимфоцитов без инкубации их с аллергенами колеблется от 2 до 12Х, Предварительная инкубация клеток с ал аллергенами домашней пыли и растительного происхождения не приводила к достоверному изменению числа cseтящихся лимфоцитов. У больных с бронхиальной астмой (атопическая форма) наблюдалась выраженная динамика, которая заключалась в увеличении качества флуоресцирующих лимфоцитов после инкубации их специфическим аллергеном.

В табл. 1 приведены результаты .обследования больных бронхиальной астмой предлагаемым способ и ранее известными методами постановки кожных и ингаляционных проб.

Таблица 1

1197640

Продолжение табл.!

Стародубо34

27

ДПФ98

Шерсть кошки Отрицательный—

Отрица- Положительный тельный

Малоушкина

Шерсть кошки, 4

Береза 4

Шапошников

ДП В 112 12

Шерсть кошки 12

+++

Отрицательный—

13 Отрица- Отрицательный

8 тельный—

Домагин

ДП У 125 7

Тимофеевка, 7

Шерсть кошки 7

+++ Положительный

Болкунов

ДП 9 108 4

Михайлова

ДПУ 95, Тимофеевка

Отрица, тельный

24

+++

+++

Шатуновская

Положительный

+++

12 +

30 ++

ДП 1Ф 108

Положительный

18 ++

Кацман

ДП 111 112

))) Резко28

Федоров

ДП 9 112

Дроздова

Здоровая Инкубация с аллергенами без динамики

Бражникова

То же

Новиков

Ефремов

Иавраев

Иасуев

Гервазиев

Сулефманов

Сибиров

Шалигинов

Шалимова

ДН У 101

ДП У 108

ДП 111 101 ДП Ф 101

СлабопоЭтожительный

Отрицательный положи тельный

Положительный

1 197640

Т а б л и ц а 2

Известный способ

Предлагаемый способ

Аллерген

Диагноз

Ф,И.О свет. клеток

Кожная проба

Ингаляционный до инкубации после тест инкубации

24 ++++

Риносинусопатия Тимофеевка

Зарайский

Рогачева 12 ++

Береза, ольха

28 ++++

Тимофеевка

ДП 11t 130

Эритромицин

Горбунов

Разоренов

Дерматит

14

Филатов

12

Новачков

Пенициллин

Олеандомицин 2

Евстратова

Поляков

Анафилакт, 26

Пенициллин шок

Зтаэол

Койлов

Шульман

Пенициллин

Hs табл, I видно, что .совпадение результатов ингаляционнога и кожного тестов наблюдаются лишь в 60Х случаев (6 иэ 10). Использование предлагаемого способа показывает, что увеличение количества флуоресцирующих клеток после инкубации с соответствующим аллергеном на 8 и более процентов в 90Х случаев (9 из )О) совпадает с положительной реакцией ингаляционной пробы. Незначительные изменения числа светящихся клеток (в сторону увеличения или уменьше- ,ния) соответствуют отрицательному результату в ингаляционном тесте.

В случае одновременной постановки

:каждой пробы и предлагаемого способа увеличение количества свеТаким образом, инкубация лимфоцитов с аллергеном, к которому они сенсибилизированы, приводит в 100Х тящихся клеток íà 8Х и более соответствует положительной реакции в 11 случаях из 17 (64 ). Здесь расхождение возникает, возможно, иэ-эа ложно положительных кожных проб. Незначительные изменения в числе флуоресцирующих лимфоцитов в 1ОО случаев совпадает с отрицательной кожной пробой, В табл. 2 приведены результаты использования предлагаемого способа у больных риносинусопатией, лекарственной аллергией, дерматитами, Видно, что инкубация лимфоцитов со специфическим аллергеном приводит к увеличению количества флуоресцирующих клеток более чем на 8, случаев к изменению количества светящихся клеток в суспенэии на 8 и более процентов. Инкубация лимфо1197640

Составитель П. Бонарцев

Редактор Т. Иитейко Техред Ж.Кастелевич Корректор. 1 демчик

Заказ 7645/4 . Тираж 721 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР . по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4, цитов с неспецифическими аллергена-

1 ми не приводит к столь значительным изменениям числа флуоресцирующих клеток. Лимфоциты крови здоровых доноров не реагируют на инкубацию со всеми исследованными аллергенами изменением количества флуоресцирующих клеток.