Способ хранения культуры клеток животных и человека

Способ хранения культуры клеток животных и человека

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СПОСОБ ХРАНШИЯ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛОВЕКА в ростовой среде, отличающийся тем, что, с цепью увеличения длительности переживания клеток, клеточщто культуру предварительно выдерживают в питательной среде, содержащей 0,05-0,1% масляного раствора каролшоидов в виде субмикронной змульсии, в течение 1-2 суток.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„,SUÄÄ 119979

A@4 С 12 lN 500

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ(СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3717762/28 — 13 (22) 29.03.84 (46) 23.12.85. Бюл. К 47 (71) Институт биологической физики, АН СССР (72) В. Н. Карнаухов и Б. К. Гаврилюк (53) 578.085.23 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР И 905281 кл. С 12 <® 5/00, 1982.

Анджапаридзе О. Г., Гаврилов В. И„

Семенов Б. Ф., Степанова Л. Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях.—

М.: Медгиэ, 1962, с. 99 — 100. (54)(57) СПОСОБ ХРАНЕНИЯ КУЛЬТУРЫ

КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛОВЕКА в ростовой среде, о т л и ч а ю Q и и с я тем, что, с целью увеличения дпительности переживания клеток, клеточную культурупредварительно выдерживают в питательной среде, содержащей 0,05 — 0,1% масляного раствора каротиноидов в виде субмвкронной эмульсии, в течение 1 — 2 суток.

1199796

Составитель Л. Маныкин

Техред Т.Фанта

Редактор Н. Гунько

Корректор С. Черни

Тираж 524 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 7796/30

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к биологии и может быть использовано в биотехнологии, медицине и ветеринарии для обеспечения переживания и сохранения клеток животных и человека.

Цель изобретения — увеличение длительности переживания клеток.

Пример 1. Хранение культуры кле ток фибробластов ВНК вЂ” 21.

Готовят l o-ную субмикронную эмульсию комерческого масличного раствора витамина

А (содержащего 3,5 о витамина А или

25800 м. ед. в 1 мл) путем экструзии смеси 99 мл среды Игла (ифи Хенкса), 1 мл масляного, раствора„витамина А и 0,1 мл

Ф фосфодипида .,(или.нроксанола), который добавляют для получения устойчивой эмульсии, на дезинтеграторе клеток микроорганизмов (ДКМ вЂ” 1) до получения эмульсии с размером частиц 0,1 — 0,2 мкм.

Полученную субмикронную эмульсию добавляют в количестве 0,1% (т.е. 0,01% исходного масляного раствора витамина А) в питательную среду Игла, содержащую 10% сыворотки крупного рогатого скота, куда затем вносят выращенную культуру клеток фибробластов ВНК вЂ” 21 в количестве 2 10 кл/мл

1 и ныращивают в этой среде в течение 24 ч. при 37 С.

Затем выдержанные в такой среде клетки переносят в обычную для фибробластов ростовую питательную среду Игла с 10% сыворотки крупного рогатого скота и хранят в ней лрп 37 С. без смены питательной среды. В этих условиях клетки сохраняют свою жизнеспособность в течение 50 сут. Жизнеспособность клеток определяют с помощью прижизненной окраски 0,1%-ным раствором акридинового оранжевого и нейтрального красного в течение 1 †2 мин. Количество, живых клеток после хранения предлагаемым способом составляет 50%.

Пример 2. Хранение культуры клеток эпидермоцитов человека.

Готовят 1%-ную субмикронную змульсгпо комерческого масляного раствора смеси витаминов А и Е аналогично примеру I и добавляют ее в количестве 0,5% (т. е, 0,005% исходного масляного раствора) в питательную среду 199, содержащую 20%

5 фетальной сыворотки крупного рогатого скота.

Выращенную культуру клеток кератиноцитов человека вносят в полученную среду в количестве 2 10 кл/мл и выдерживают

5 в ней в течение 48 ч при 37 С. о

Затем выдержанную таким образом культуру переносят в питательную среду 199, содержащую 20% фетальной сыворотки крупного рогатого скота, и хранят в ней при о

15 37 С без смены питательной среды.

В этих условиях клетки сохраняют свою жизнеспособность в течение 160 сут. Количество жизнеспособных клеток после хранения составляет 50%. Жизнеспособность опре2Р деляют аналогично приыру 1.

П р н м е р 3. Хранение культуры клеток почек эмбриона человека, Готовят 1%-ную субмикронную эмульсию комерческого облепихового масла (содержит

25 230-300 мг каротиноидов: Ж, /3, g -каротины, ликопин, зеаксантин, фитофлюин и т. д.) аналогично примеру 1 и добавляют ее в количестве 1% (т.е, 0,01% исходного облепихового масла) в питательную среду 199, содер3р жащую 10% сыворотки крупного рогатого скота, Первичную культуру клеток почечного эпителия эмбриона человека в количестве

2 10 кл/мл помещают в приготовленную среду и выдерживают в ней при 37 С в течение 24 ч. Затем эти клетки переносят для хранения в обычную ростовую питательную среду 199 с 10% сыворотки(крупного рогао того скота и хранят в. ней при 37 С без

4р смены питательной среды.

В этих условиях клетки сохраняют свою: жизнеспособность в течение 90 сут. Жизнеспособность клеток определяют аналогично примеру 1. Количество живых клеток после хранения их в течение 90 дней составляет 50%.