Способ приготовления плотной питательной среды для выращивания микроорганизмов

Способ приготовления плотной питательной среды для выращивания микроорганизмов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ООЮЭ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (!Е (И1 gy С 12 N 1/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ASTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

760 ;..

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3655786/28-13 (22) 25.10.83 (46) 23.02.86. Бюл. Р 7 (71) Институт микробиологии АН СССР и Ордена Ленина институт элементоорганических соединений им. А.Н.Несмеянова (72) В.И.Дуда, В.В.Кривенко, С.В.Рогожин, В.И.Лозинский, E.Ñ. Вайнерман, А.М.Мамцис, Л.В.Домотенко, И.И.Штильман и С.А.Иванова (53) 663.143(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР

Ф 659619, кл. С 12 N 1/20, 1977.

2. Авторское свидетельство СССР

В 514893, кл. С 12 М 1/00,. 1975. !, (54) (57) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПЛОТНОЙ ПИТАТЕЛЬНОЙ СРЕДЫ ДЛЯ ВЫРАЩИ/

ВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ, предусматривающий внесение в жидкий питательный субстрат, содержащий источники углерода, азота, фосфора, минеральные соли и микроэлементы, в качестве уплотнителя поливинилового спирта с последующей стерилизацией полученной среды, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью улучшения роста микроорганизмов за счет повышения степени доступности воды в питательной среде и удешевления процесса, после стерилизации полученную питательную среду замораживают при температуре от (-5) до (-196tC в течение 0,5-24 ч,. а перед выращиванием микроорганизмов проводят ее оттаивание, при этом поливиниловый спирт используют в количестве 4-15Ж.

1213069

Изобретение относится к обшей, технической и медицинской микробиологии, касается получения плотных питательных сред для выращивания микроорганизмов различных систематических и физиологических групп и может быть использовано как в практике научно-исследовательских микробиологических лабораторий, так и в про изводственных условиях.

Цель изобретения — улучшение роста микроорганизмов за счет повышения степени доступности воды в питательной.среде.

В качестве уплотнителя среды используют гидрогель поливинилового спирта, образующийся путем замораживания исходного раствора при температуре (-5) - (-196) С в о течение 0,5-?4 ч и последующего от. таивания при соотношении компонентов в исходном растворе,Х:

Питательный

Ф субстрат (источники углербда, азота,минеральные соли, микроэлементы) 0,5-6

Поливиниловый спирт (ПВС) 4-15

Вода Остальное

При замораживании водных растворов ПВС происходит процесс криоструктурирования с образованием трехмерного каркаса гидрогеля, роль сшивок в котором выполняют участки с повышенной концентрацией водородных связей. Замораживание необходимо для ускорения процесса гелеобразования, поскольку водные растворы ПВС самопроизвольно при обычных условиях желируют крайне медленно (до. 1 мес.) .

Выбор параметров криоструктурирования при получении предлагаемых плотных питательных сред обусловлен следующим.

Концентрация ПВС ниже 4Х приводит к образованию гелей с низкими физико-механическими характеристиками и синерезису влаги, а .концентрация .выше 15Х нецелесообразна из-за большого расхода ПВС и высокой вязкости исходных растворов, затрудняющей операции перемешивания и разлива жидкой питательной среды.

Концентрация питательных субстратов — органических и минеральных веществ, находится в пределах, используемых для приготовления плотных питательных сред, на которых культивируются микроорганизмы.

При температуре криоструктурироо вания вьш(е -5 С часто наблюдаются эффекты переохлаждения растворов, а это не приводит к гелеобразованию," использование температур ниже -196 С (жидкий азот) нецелесообразно по экономическим соображениям.

Время криоструктурирования определяется как концентрацией компонентов исходного раствора, так и температурой замораживания.Для формирования плотных питательнык сред согласно предлагаемому способу требуются промежутки времени от 0,5 до 24 ч.

Плотные питательные среды для выращивания микроорганизмов готовят и используют следующим образом.

Растворяют в воде питательнуй субстрат и уплотнитель (нетоксичный ПВС), полученный раствор (если необходимо) фильтруют через пористый фильтр и стерилизуют актоклавированием в стандартных условиях, затем разливают s посуду для культивирования микроорганизмов (чашки

Петри, пробирки, колбы, микроскопические камеры и др.) н замораживают в течение определенного времени.

После оттаивания (обычно при комнатной температуре) полученные плотные питательные среды засевают известным способом (шпателем, иглой, пипеткой, в потоке зараженного воэдуха н др.) и инкубируют требуемое время в условиях, необходимых для культивирования конкретных микроорганизмов.

Рост микроорганизмов различных систематических групп на плотных питательных средах, приготовленных согласно предлагаемому способу, дан в табл. 1, тот же показатель в сравнении с базовым (агаровые среды) и известным (пленки ПВС) способами приведен в табл. 2.

Таким образом, предлагаемый способ по сравнению с известным позволяет улучшить рост микроорганизмов на плотной питательной среде (табл. 2) и расширить спектр применения среды (воэможность выращивания термофильтных микроорганизмов).

1213069

Таблица

ПитательХарактер роста и морфология колоний

Микроорганизмы

ТемпеКонратура замоцентрация

ПВС в ная среда по сравнению с агаризованными средами р ажи вания растворе, Х сред, ОС

Ф

Bacillus polymyxa

Идентичны

4,0 -5 24

10,0 -10 18

28

А

12,0 -15 18

А

Streptomyces streptomycini

8,0 -20 3

10,0 -15 18

Комплекс аэробных почвенных микроорганизмов

Б В 10 0 - 15 18

Комплекс анаэробных микроорганизмов иэ ила

Aspergillus niger

° 1

А, Г 10,0 -15 18

П р и м е ч а н и е. Среда А,X: NH401 0,033, ИнС1 2Н О 0,033

«033, КС1 0,033, пептон 0,5, микроэлементы — по Пфеннигу (11).. pH 7,2. Среда Б::Среда А с добавлением восстановителя (Na 3 9Н 0 0,057) и резазурина (0,001X).

Среда В: Среда Пфеннига (11) для сульфатвосстанавливающих бактерий. Среда Г> Сусло йо известному способу (1) .

Таблица 2

ТемпеВремя замораживаПита- Культура микроорганизмов ратура замотельный субстрат

Название

Таксономическая группа раживаНИЯ 1

С ния, ч на крио- на пленгеле ПВС ке ПВС

Спорообразую- Идентичен Нет росщая Гр(+)-бакта терия

Bacillus

polymyxa

10

: Концен трация, HBC в исходном

f растворе, Х

Время структурирования, ч

15,0 -196 0,5 Bacillus cereus

Температура инкубацни посевов, ОС

Характер роста и морфология колоний по сравнению с агариэованными средами

12130Ь9.с

Продолжение табл.2

Характер роста и морфология колоний по сравнению с агаризованными средами

Культура микроорганизмов

Время замораживаПитаТемпетель

HblA субстрат

Название

Таксономическая группа ния, ч на крио- на пленгеле ПВС ке ПВС

Еди ничные ко-196

0,5 А,Д Bacillus Спорообразуюcereus щая Гр(+)-бактерия лонии

P-формы

-15

А,Д

Нет роста

Streptomy- Актнномицет

ces streptomycini

-20

-15 18

Единич.ные колонии

10.

-15 18

Б,В Комплекс анаэробных микроорга--"низмов из ила

Единичные колонии

А,Г Aspergillus Плесневый Идентичен Слабый

niger гриб рост

-15 18

-30

Единичные колонии

Р-формы

1,5 Е

-78

Нет роста

-20 24

S taphi lococcus

aureus

Гр (+) -бактерия

-20

Saccharomyces

cereviДрожжи

Количество колоний

seae

Концентрация

ПВС s исходном растворе, X. ратура замораживаиия, С

А,Д Комплекс почвенных аэробных микроорганизмов

Escherichia Гр(-)-энтероcoli бактерия

Shigella Гр(-)-энтероflexneri бактерия идентично,размер уменьшен

1213069

Нродолжение табл.2

Культура микроорганизмов

Время заморакиваТаксономическая группа

Название ния, ч на крио- на пленгеле ПВС ке ПВС

Нет роста

Bacillus

polymyxa

Среда полужидкая,колонии

-10

А тонут

Уменьшенные размеры колоний

Гелеобраэование не происходит

12

П р и м е ч а н и е. Среда Д: мясо - пептонный бульон по известному спо- собу (1J . Среда Е: состав питательного субстрата

В и минеральных солей как для среды Хоттинира.

Составитель В. Голимбет

Редактор Н. Яцола Техред Т.Тулик

Корректор Т. Колб

Заказ 752/37 Тираж 490

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, R-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Концентрация

ПВС в исходном раст- . воре, Х

Температура заморакивания, С

Питатель ный субстрат

Карактер роста и морфология колоний по сравнению с агаризованными средами