Способ определения активности аллергена

Способ определения активности аллергена

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

В ЛФМ

РЕСПУБЛИН (1% (И)

А 61 К 39/00 5ц4 А 61 В 10/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ HOMHTET СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТ19

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3664337/28-14 (22} 10, 11. 83 (46) 07.03. 86. Бюл. М - 9 (71) Центральный научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова (72} Я.А.Соколов, Т.А.Серова, М.В.Гликман, В,М.Бержец, Петра Павель (00) и Н.С.Петрова (53) Ь 616-07 (088.8) (56) Фрадкин В.А. Аллергодиагностика ин-витро. М.: Медицина, 1975, с. 104-110. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ АЛЛЕРГЕНА, включающий инкубацию аллергена с чувствительным к нему биообъектом, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения точности способа, аллерген инкубируют с субстратом — донором реакционноактивных тирозиновых остатков в присутствии реагента, способного специфически взаимодействовать с тирозиновыми остатками, при молярном отношении реагента к тирозиновым остаткам субстрата более единицы и. по степени вытеснения реагента из комплекса с субстратом возрастающими концентрациями аллергена определяют активность аллергена.

1215669

Составитель Т. Козлова

Техред О.Неце Корректор В. Бутяга

Редактор А.И1аидор

Заказ 821/2 Тираж 659 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1 13035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул., Проектная, 4

Изобретение относится к медицине, в частности иммунологии, и может быть использовано для оценки активности промышленно выпускаемых аллергенов.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Пример. Оценка активности аллергена из говядины с помощью специфического лиганда — йода-125.

Реагенты: а) субстрат-донор реакционно активных остатков тироэина (бычий альбумин в 0,05 М фосфатном буфере рН 7,5 в концентрации 50 мкгlмл); б) лиганд (1 мкКи йода-125 без носителя в 20 мкл 0,5 М фосфатного буфера рН 7,5, производство Венгрия

1-РВ-3), . в) активатор лиганда (хлорамин

Т 1 мг/мл в 0,05 М фосфатном буфере рН 7, 5}, г) Ь -тирозина гидрохлорид (производство Венгрия). Реанал в диапазоне реакционных разведений 5-500 мкгл!мп в 0,05 М фосфатном буфере рН 7,5, д} аллерген из говядины сер. 2-1.82 в диапазоне разведений

1: 1-1:5000 s 0,05 М фосфатном буфере р" 7в5Определение выполняют следующим образом.

Нумеруют серию реакционных пробирок из полистирола по три для каждого разведения аллергена и

12 пробирок для разведений тирозина.

Во все пробирки вносят: цо 0,1 мл реагента а, по 0,01 мп реагента о по 0,025 мл реагента z u g в соответствующие реакционные пробирки, включая контрольные пробы с буфером вместо или Ь

5 по 0,05 мл реагента и

Пробирки инкубируют не менее

15 с при комнатной температуре и подвергают радиометрии, регистрируют радиактивность каждой пробы (Т).

10 В пробирки вносят по 1 мл 107-ной

ТХУ (трихлоруксусная кислота) и центрифугируют их 20 мин при

2000 об/мин. Супернатант отсасывают отбрасывая этим лиганд, связанный

15 с тирозином. Повторно вносят в пробирки по 1 мл 10%-ной ТХУ, центрифугируют и отсасывают супернатант.

Пробирки с отмытым преципитатом содержат лиганд, связанный с субстра20. том-донором. Их подвергают радиометрии (В). Для каждой пробирки рассчитывают величину (В/M)X и для триплетов аналогичных проб рассчитывают среднее значение этого параметра.

25 Точка 503 подавления реактивности тироэиновых остатков субстрата соответствует для аллергена его разведению: 1/570, а для тирозина— его концентрации 14 мкг/мл.

З0 Таким образом, активность аллергена соответствует величине произведения: (С,„ „„ эквивалентное разв.аллергена) = 8000 мкг-тирозина разведение.

Таким образом, изобретение повышает точность способа в 5 раз и уменьшает трудоемкость в 10 раэ (50 аллергенов в день) по сравнению с известным (4-6 аллергенов в день).