Способ получения полипептидов

Способ получения полипептидов

Реферат

 

(19)SU(11)1218521(13)A1(51)  МПК ⁵    _A61K37/24(12) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯк авторскому свидетельствуСтатус: по данным на 17.01.2013 - прекратил действиеПошлина: учтена за 20 год с 17.06.1999 по 16.06.2000

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЕПТИДОВ

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается получения физиологически активных препаратов для лечения иммунодефицитных состояний. Известен способ получения полипептидов путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса, центрифугирования, удаления осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном с последующей фильтрацией. Однако указанный способ является трудоемким, имеет сложную многостадийную технологию производства и не позволяет получать ряд биологически активных веществ, содержащихся в тимусе. Целью изобретения является упрощение способа и выделение полипетидов основной природы. Цель достигается тем, что при осуществлении способа получения полипептидов путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса, центрифугирования, удаления осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном с последующей фильтрацией, ткань тимуса после гомогенизации экстрагируют разбавленной уксусной кислотой в присутствии хлорида цинка в течение 48-72 ч, далее экстракт центрифугируют и дополнительно обрабатывают ацетоном. Способ поясняется следующим примером. П р и м е р 1. Исходное количество тимуса 500 г. Ткань тимуса очищают от сосудов, сгустков крови, жировой клетчатки, промывают водой, затем ацетоном и помещают в ацетон в соотношении 1:4 при 4-10^оС. Через 24 ч ацетон сливают, а ткань тимуса взвешивают и гомогенизируют. Гомогенат помещают в 3%-ный раствор уксусной кислоты из расчета 1 ч. гомогената на 6 ч. раствора кислоты (pH 3,5-4,0). К раствору кислоты добавляют ZnCl₂ из расчета 1 г ZnCl₂ на 1 л 3%-ного раствора кислоты. Экстракцию проводят в течение 72 ч. По окончании экстракции субстрат центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. К супернатанту добавляют ацетон в соотношении 1:5 (1 ч. супернатанта и 5 ч. ацетона). Осадок промывают ацетоном и высушивают на фильтре. Получают 5,0-5,5 г белого порошка, содержащего физиологически активные вещества тимуса. Для получения лекарственной формы препарата тимуса (тималина) полученный порошок растворяют в 550 мл 5%-ной уксусной кислоты. Раствор препарата стерилизуют фильтрацией и разливают в стерильные флаконы по 1 мл, затем лиофилизируют и закрывают стерильными резиновыми пробками. В результате в одном флаконе содержится 10 мг веществ, выделяемых из тимуса. П р и м е р 2. Исходное количество тимуса 10 кг. Ткань тимуса очищают от сосудов, сгустков крови, жировой ткани, промывают водой, затем ацетоном и помещают в ацетон в соотношении 1:4 при 4-10^оС. Перед экстракцией ацетон сливают, а ткань тимуса взвешивают и гомогенизируют. Гомогенат ткани тимуса помещают в 3%-ный раствор уксусной кислоты из расчета 1 ч. гомогената на 6 ч. раствора кислоты (pH 3,5-4,0). К раствору кислоты добавляют ZnCl₂ из расчета 1 г ZnCl₂ на 1 л 3%-ного раствора кислоты. Экстракцию проводят в течение 72 ч в емкости с мешалкой для периодического перемешивания субстрата. По окончании экстракции субстрат центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. К супернатанту добавляют ацетон в соотношении 1:5. Осадок промывают ацетоном и высушивают на фильтре. Получают 100-110 г белого порошка, содержащего физиологически активные вещества тимуса. Для получения лекарственной формы препарата тимуса (тималина) полученный порошок растворяют в 11 и 5% -ной кислоте. Раствор препарата стерилизуют фильтрацией и разливают в стерильные флаконы по 1 мл, затем лиофилизируют и закрывают стерильными резиновыми пробками. Один флакон препарата содержит 10 мг веществ, выделенных из тимуса. Полученный тималин представляет собой комплекс вещества (нуклеопептидов и полипептидов) со следующими характеристиками (таблица). При изучении в эксперименте установлена высокая биологическая активность препарата (стимуляция уклеточного иммунитета, процессов регенерации и гомопоэза). В терапевтических дозах препарат не обладает токсическими свойствами и не вызывает аллергических реакций. Результаты экспериментального и клинического изучения показали, что препарат обладает выраженной биологической активностью, которая выражается в усилении иммунологической реактивности (увеличение количества лимфоцитов, Т-лимфоцитов, антителообразующих клеток в селезенке в ответ на введение тимусзавимого антигена) и сможет найти широкое применение в медицинской практике для лечения и предупреждения ряда заболеваний человека. Способ получения тималина позволяет выделять нуклеопротеиды и пептиды основной природы, отличается простотой, содержит меньшее количество операций (6 стадий). (56) Hooper T.A. et al. The purification and properties of bovine thywosin. Ann N. I. Acad Sei 1975, 249, 125-144.

Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИПЕПТИДОВ путем гомогенизации измельченной ткани железы тимуса, центрифугирования, удаления осадка, обработки надосадочной жидкости ацетоном с последующей фильтрацией, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа и выпадения полипептидов основной природы, ткань тимуса после гомогенизации экстрагируют разбавленной уксусной кислотой в присутствии хлорида цинка в течение 48 - 72 ч, далее экстракт центрифугируют и дополнительно обрабатывают ацетоном.

PC4A - Регистрация договора об уступке патента Российской Федерации на изобретение

Номер и год публикации бюллетеня: 27-1999

(73) Патентообладатель:ООО "Клиника Института биорегуляции и геронтологии"

Договор № 8611 зарегистрирован 28.04.1999

Извещение опубликовано: 27.09.1999