Циклические аналоги каллидина и других пахикининов, обладающие пролонгированным гипотензивным действием в сочетании с низкой или полностью отсутствующей миотропной активностью

Циклические аналоги каллидина и других пахикининов, обладающие пролонгированным гипотензивным действием в сочетании с низкой или полностью отсутствующей миотропной активностью

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Циклические аналоги каллидина и других пахикининов общей формулы E-Rj-Pro-Pro-Gly-Phe-R -Pro- Phe-Arg где Р, - водород, лизин, со-аминододекановая кислота; R - аргинин, лизин; Н„ - серин, глицин, обладающие пролонгированным гипотензивным действием в сочетании с низкой или полностью отсутствующей миотропной активностью. ё (Л CD СЛ 00 Время, с

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) А

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

80 врвиц с Риг./

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2699155/23-04 (22) 29.09.78 (46) 23.03.86. Бюл. !1- 11 (71) Ордена Трудового Красного Знамени институт органического синтеза

АН ЛатвССР (72) Г.И. Чипенс, Ф,К. Г(утулис, О.Е. Ландо и Н.В. Г1ышлякова (53) 547,964.4.07(088.8) (56) Дзизинский А.A., Гомзаков О.А.

Кинины в физиологии и патологии сердечно-сосудистой системы; — Новосибирск, 1976, с. 89, MeCarthy D.À., Potter D.Е., Nicolaides Е.D. An in vitro estimation

of the potencies and Halflives of

xynthetic bradykinin and kallidin

J. Pharm. Exp. Ther. 1965, 148, 117.

Handbook of experimental Pharmacology. vol. XXV, Bradykinin, KalliЖп апс1 Kallikrein. — Ed. Е. G. Erdos. Springer-Verlag. Berlin, Heidelberg. New York, 1970, р. 347.

Meienhofer J. Synthese von Gly—

cyclokallidin. — Liebigs Ann. Chem. !

966, 691, 2!8.

Авторское свидетельство СССР

И - 798098, кл. С 07 С )03/52, 1977.

<< Imam (51.)4 С 07 К 7/18, А 61 К 37/02 (54) ЦИКЛИЧЕСКИЕ АНАЛОГИ КАШПЩИНА

И ДРУГИХ ПАХИКИНИНОВ, ОБЛАДАЮЩИЕ

ПРОЛОНГИРОВАННЬГ1 ГИПОТЕНЗИВНЫГ! ДЕЙСТВИЕИ В СОЧЕТАНИИ С НИЗКОЙ ИЛИ ПОЛНОСТЬЮ ОТСУТСТВУЮЩЕЙ МИОТРОПНОЙ АКТИВНОСТЦО, (57) Циклические аналоги каллидина и других пахикининов общей формулы

R-R --Pro-Pro-Gly-Phe-R --Pro Phe-Arg

< г где Р— водород, лизин,ы -аминододекановая кислота;

R, — аргинин, лизин;

R — серин, глицин, обладающие пролонгированным гипотензивным действием в сочетании с низкой или полностью отсутствующей миотропной активностью.

1219587 2

2О

Изобретение относится к новым соединениям — циклическим аналогам кал. лидина и других пахикининов, обладающим биологической активностью, которые могут найти применение в медицине.

Каллидин и другие пахикинины— вещества пептидной структуры, широко распространены в живой природе и выполняют функции биорегуляторов IO сердечно-сосудистой и других систем организма животных и человека. С нарушением анаболизма и метаболизма пахикининов связаны различные заболевания и патологические состояния живого организма (1) .

Однако для лечения подооных нарушений природные пахинины не применимы, Их основные недостатки кратковременность действия (период полураспада их в крови 0,32 мин (2), а также отсутствие селективности (3).

Известен синтетический аналог каллидина — цикло- ((7-глицин)-каллидин), в котором для образования

25 цикла использована п6-аминогруппа лизина (4) .

Однако известное соединение не обладает биологической активностью.

Цель изобретения — получение но- ЗО вых биологически-активных соединений — циклических аналогов каллидина и других пахикининов, обладающих пролонгированным гипотенэивным действием в сочетании с низкой или полностью отсутствующей миотропной активностью, расширение арсенала средств воздействия на живой организм.

Поставленная цель достигается цик- 4р лическими аналогами каллидина и других пахикининов общей формулы !

R-R -Pro-Pro-G1y-Р; е-R -Pro-Phe-Are

1 z где R — лизин, водород, ы -аминододекановая кислота;

R — аргинин, лизин;

Rz — серии или глицин. . В отличие от известного цикло— ((7-глицин)-каллидина) для образования цикла в предлагаемых соединениях использована И-аминогруппа лизина или 43--аминододекановой кислоты.

Способ получения предлагаемых соединений основан на известных методах пептидной химии, например азидном, методе активированных эфиров с использованием блокирования функциональных групп и последующего деблокирования известными приемами (5) .

Для синтеза используют производные аминокислот, поставляемые фирмой Реанал (Венгрия). Упаривания проводят на ротационном испарителе о при 30 С. Все аминокислоты, кроме глицина, имеют L-конфигурацию. Температуры плавления, определенные в открытых капиллярах, приведены без исправления. Индивидуальность полученных соединений определяют по

ТСХ на пластинках Силуфолч или Керк". Приведены хроматографические подвижности R на пластинках

"Силуфол" УФ 254 в следующих системах: А — хлороформ-этанол-этилацетат-уксусная кислота-вода (85:5:8:

:2:0,25); Б — хлороформ-этаноп-н-бутанол-этилацетат-вода (10;6:4:3:1);

 — хлороформ-метанол-вода (50:30;5);

à — бутанол-уксусная кислота-вода (4"1."1); Д вЂ” этилацетат-пиридин-уксусная кислота-вода (5:5:1:3), а также электрофоретическая подвижность по отношению к гистидину на бумаге

FN-16 в н. или 5 н. уксусной кислоте ° Пятна веществ обнаруживают осмотром хроматограмм в ультрафиолетовом свете, а также опрыскиванием нингидрином или при помощи хлора — реагента бензидина. Для всех соединений данные элементного анализа удовлетворительно совпадали с вычисленным содержанием С, Н, И. Для идентификации соединений широко ис— пользуют спектры IIMP при 60 МГц, снятые на приборе Perkin-Elmer R12A.

Химические сдвиги, форма и интенсивность сигналов соответствуют строению пептидов. Строение веществ подтверждено также аминокисл тным анализом, который выполнен на анализаторе В оса1-200 после гидролиза пепо тида в запаянной ампуле при 110 С в течение 24 ч °

На фиг. 1 даны кривые, характеризующие влияние брадикинина, ЦК и АЦАБ на артериальное давление наркотизированной крысы при дозе

50 мкг/кг; на фиг. 2 — влияние брадикинина в дозе 50 мкг/кг и ЦАДБ в дозе 250 мкг/кг на артериальное давление наркотизированных крыс; на фиг. 3 и 4 — миотронный эффект БК, ЦК и ЦАДБ в опытах in vitro на изолированной матке крыс на фиг. 5—

Э ( схема синтеза цикло-(11 -каллидина);!

2!95

15

25

35

45

55 на фиг. 6 — схема синтеза N-арги.iE нилцикло- ((И -лизин,б-глицин)-брадикинина; на фиг. 7 — схема синтеза цикло-((u-аминододеканоил)брадикинина.

Пример 1. Цикло-fN -каллидин) (1).

П -Нитробензиловый эфир трет -бутоксикарбонил-0-бензилсерилпролилфенилаланина (4).

7,17 г (15 ммоль) гидробромида

П-нитробензилового эфира пролилфенилаланина (3) и 6,61 r (16,5 ммоль) пентафторфенилового эфира трет -бутоксикарбонил — 0-бензилсерина растворяют в 50 мл диметилформамида, Добавляют N-метилморфолин до рН 8 (проба нанесением капли на влажную индикаторную бумажку). Выдерживают

30 мин при комнатной температуре, упаривают, остаток растворяют в

50 мл этилацетата, промывают 50 мл

10%-ного раствора бисульфата калия, затем 50 мл воды, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают до 15 мл, добавляют 100 мл о гексана, выдерживают при 0 С. Осаждается масло, которое высушивают при 50 С .и 1 мм рт.ст. Выход 10,0 r (99X). Б = 0,55 (этилацетат), 0,90 (А) .

Трифторацетат-и-нитробензилового эфира О-бензилсерилпролилфенилаланина (5).

9,5 г (4) (14 ммоль) растворяют в 20 мл трифторуксусной кислоты, выдерживают 20 мин при комнатной темо пературе, упаривают при 20 С, остаток растирают с 100 мл безводного эфира. Образовавшийся осадок отфильт ровывают, промывают эфиром и выдерживают над гидроокисью калия при

2<

1 мм рт.ст. Выход 8,04 г (94%)(с ) р

-25,3 (сl, диметилформамид). Е„. =

0,60 (5н. уксусная кислота), В.!

0,06 (А); 0,46 (Б); 0,76 (В); 0,58 (Г).

I и -Нитробензиловый эфир трет -бутоксикарбонилфенилаланил-0-бензилсерилпролилфенилаланина (6).

6,89 r (5) (10 ммоль) и 4,74 г (ll ммоль) пентафторфенилового эфира т ет -бутоксикарбонилфенилаланина растворяют в 50 мл диметилформамида, добавляют N-метилморфолин до рН 8 и вьдерживают 1 ч при комнатной температуре ° Упаривают, к остатку добавляют 50 мл 10%-ного водного раство87

4 ра бисульфата калия и 20 мл эфира.

Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают водой, затем эфиром.

Сушат над пятиокисью фосфора при

1 мм рт.ст ° Выход 7,19 г (87,5X)„

Я = -32,5 (cl, диметилформамид).

R> = 0,42 (А), 0,92 (Б), 0,93 (В), 0,86 (Г), 0,80 (Д).

Гидразид ðeT -бутоксикарбонилфенилаланил-О-бензилсерилпролилфенилаланина (7).

4 11 г (6) (5 0 ммоль) и 5 мл гидразингидрата в !00 мл метанола перемешивают 3 ч при комнатной температуре, затем выдерживают 20 ч при комнатной температуре. Упаривают до

20 мл, добавляют 100 мл воды и 50 мл эфира. Фильтруют, осадок на фильтре промывают водой, затем эфиром.

Выход 3,33 г (95%).(М) -51,2 (с 1, диметилформамид) . Р = 0,30 (A), 0,81 (Б), 0,90 (В), 0,73 (Г) .

H --Нитрофениловый эфир оС бензилоксикарбонил-à — (T et — бутоксикарбонил-Q-нитроаргинил)лизина (8).

К раствору 12,8 г (34,3 ммоль)

Трет -бутоксикарбонил-И-нитроаргинина и 3,80 мл (34,3 ммоль) N-метилморфолина в !00 мл диметилформамида при †!5 добавляют 4,63 мл (34,3 ммоль) изобутилового эфира хлоругольной кис= лоты, а затем вводят 10,0 г (22,8 ммоль) порошка хлористоводородной соли и -нитрофенилового эфира

g(,-бензилоксикарбониллизина. Перемешио вают 30 мин при -10 С, затем в течение 2 ч по каплям добавляют раствор

2,55 мл (22,8 ммоль) N †метилморфолина в 50 мл диметилформамида. Леремешивают еще 30 мин при — 20 С, затем добавляют 1,33 мл (12,1 ммоль)

P-äèìåòèëàìèíoýòèëàìèHà. Снова перемешивают 30 мин, упаривают, остаток растворяют в смеси 100 мл этилацетата и 100 мл воды. Этилацетатный слой промывают 10%-ным растворами бикарбоната калия и бисульфата калия дважды и водой. Сушат над сульфатом магния, фильтруют, фильт— рат упаривают. Выход 13,5 r (86,5X). (к) в = — 20,9 (с l, диметилформамид) .

R = 0,80 (А), 0,90 (Г). т ет -Бутоксикарбонил-я-нитроаргинилпролин (9).

20 r (53,6 ммоль) т ет -бутоксикарбонил-и-нитроаргинина 3/4 тетрагидрофурана суспендируют в 300 мл безводного этилацетата и при охлаж1219587 денни (О С) добавляют 10,3 г (56 ммоль) пентафторфенола и 11,6 г (56 ммоль) дициклогексилкарбодиимио да. Перемешивают 10 ч при О С; фильо труют, при О С фильтрат встряхивают с 103-ным раствором бикарбоната калия и водой (по 100 мп), затем сушат безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают. Полученное масло, содержащее пентафторфениловый эфир трет -бутоксикарбонил-ьь-нитроаргинина, растворяют в 300 мл диметилформамида, добавляют 9,25 r (80 ммоль) пролина, N-метилформолин до рН 8 и по каплям воду до растворения пролина. Выдерживают 2 ч при комнатной температуре. Упаривают,,остаток растворяют в 100 мл хлороформа, полученный раствор промывают

50 мл 10Х-ного раствора бисульфата калия, 50 мл воды,.а затем 100 мл насьпценного раствора бикарбоната калия. Бикарбонатный экстракт промывают 50 мл эфира и подкисляют бисульфатом калия до рН 2. Полученную смесь экстрагируют 100 мл хлороформа, экстракт промывают 50 мл воды, сушат безводным сульфатом магния. Фильтруют, упаривают, полученное масло эакристаллизовывают растиранием со смесью этилацетат-гек— сан (1:1). Выход 10,3 r (46,17). .(

Трифторацетат Q -нитроаргинилпролина (10).

Получают аналогично (5), исходя из (9). Выход 997.. (<) в = -24,4 (с 1, диметилформамид). Е „ = 0,65 (1н, уксусная кислота). Ry = 0,08 (Б), Ор20 (В)у 0,22 (Г), Ор40 (Д), g. -Бензилоксикарбонил,Я-(т ет-бутоксикарбонил — M-íèòðoàðrèíèë )лизил-Я-нитроаргинилпролин (11).

10,0 г (8) (14 ммоль) и 7,78 r (10) (18,5 ммоль) растворяют в

100 мл диметилформамида и добавляют

Б-метилморфолин до рН 8. Выдерживают 20 ч при комнатной температуре, Упаривают, остаток растворяют в

50 мл хлороформа, затем экстрагируют 50 мл 1ОЕ-ного бисульфата калия (дважды) и 50 мл воды. При упаривании хлороформного раствора образуется кристаллический осадок, который суспендируют в эфире, фильтру5

10 l5

55 ют, на фильтре промывают эфиром, Выход 11,7 г (967).t j в = -23,5 (с 1, диметилформамид). Е = 0,02 (А), 0,50 (В), 0,78 (В), 0,68 (Г).

Трифторацетат -бензилоксикарбонил, Q-нитроаргиниллизил-ь)-нитроаргинилпролина (12).

Синтезируют аналогично (5) исходя из (ll,, за исключением того, что вместо трифторуксусной кислоты используют ее смесь с хлористым метиленом (объемные соотношения I:1).

Выход 963. (ос) „= — 12,0 (с 1, диметилформамид). Е . = 0,52 (lн. уксусная кислота). Н = 0,16 (Б), 0,52 (B)ý 0,54 (Г). -Бензилоксикарбонил, Е -(трет -бутоксикарбонилфенилаланил-О-бенэилсерилпролилфенилаланил-Ы-нитроаргинил)лизил-G)-нитроаргинилпролина (13).

1,42 г (7) (2,03 ммоль) растворяют в 50 .мл диметилформамида и при охлаждении до -30 С добавляют 0,66 мл (6,09 ммоль) свежеприготовленного

9,25 н. раствора безводного хлористого водорода в диоксане в 5 мл диметилформамида и 0,31 мл (2,64 ммоль) трет -бутилнитрита в 3 мл диметилформамида. Перемешивают 30 мин при -10 С, о а затем при -30 С добавляют раствор

0,85 мл (6,09 ммоль) триэтиламина в

10 мл диметилформамида, раствор 1,81 r (13) (2,03 ммоль) и 0,28 мл (2,03 ммоль) триэтиламина в 20 мл дио метилформамида Перемешивают при О С и порциями добавляют раствор 0,28 мл (2,03 ммоль) триэтиламина в 10 мл диметилформамида (по 2 мл каждый час)

Затем реакционную смесь выдерживают

20 ч при О С, выливают в 2 л IЕ-ной уксусной кислоты, снова выдерживают о

20 ч при О С. Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают водой, сушат над пятиокисью фосфора при 1 мм рт.ст. Выход 2,44 г (833).j

12) 9587

20

2,44 г (13) (1,68 ммоль) растворяют в 30 мл диметилформамида, при

0 С добавляют 1,40 r (1,85 ммоль) комплекса дициклогексилкарбодиимида с пентафторфенолом (1:3} (комплекс

)") и 0,77 r (15) (3,36 ммоль). Выдерживают 20 ч при комнатной температуре. Упаривают, затем добавляют

50 мл хлористого метилена, фильтруют, фильтрат упаривают, остаток растирают с эфиром. Полученное вещество наносят на колонку с силикагелем (Зх100 см), через колонку пропускают сначала хроматографическую систему А (1 л) затем систему Б. Фракции, поглощающие при 280 нм ("Увикорд ))") объединяют и снова наносят. на колонперемешивают еще 30 мин при -15 С и добавляют охлажденную суспензию

10,6 г (50 ммоль) фосфита трет -бутилового эфира глицина и 5,6 мл

5 (50 ммоль) N-метилморфолина. Перемешивают 30 мин при -15 С, затем о реакционный сосуд оставляют на 15 ч о при -10 С. Упаривают, остаток растворяют в смеси 100 мл этилацетата и 100 мл воды, этилацетатный слой промывают 107-ным растворами бикарбоната калия, бисульфата калия и водой (по 50 мл), сушат безводным сульфатом магния, фильтруют и упарива- 15 ют. Полученное масло закристаллизовывают обработкой смесью эфира с гексаном (1:1). Выход 9,2 г (63 ).

Т.пл. 71-72 С (ос),= -49,0 (с 1, диметилформамид). R = 0,55 (А}, 0,64 (Б), 0,68 (В), Трет — Бутиловый эфир пролилглици— на (15), 5,0 г (14) гидрируют в растворе

50 мл этанола в присутствии паллади- 25 евой черни 5 ч. Затем отфильтровывают катализатор, фильтрат упаривают, остаток растворяют в смеси сухого эфира с гексаном (1:2 } и снова упаривают. При этом происходит кристал- 30 лизация и после полного упаривания получают бесцветное кристаллическое вещество. Быход 2,8 г (893). Т.пл.

56-57 С. ) сс) в = -38,6 (с 1, диметилформамид) . E <. = О, 83 (1н. уксусная кислота). трет -Бутиловый эфир ос-бензилоксикарбонил, E — фенилаланил-0-бензилсерилпролилфенилаланил-Я-нитроаргинил)лизил-Ц-нитроаргинилпролил- 10 пролилглицина (16). ку с силикагелем (Зх250 см), элюируют системой Б. Фракции, содержащие чистый декапептид (контроль по ТСХ), объединяют, упаривают, растирают с эфиром. Выход 1,95 г (70K),ja) =

-48,0 (с l, диметилформамид).R

0,08 (А), 0,82 (Б), 0,9! (В), 0,80 (Г).

Гидрохлорид ос,-бензилоксикарбонил

E- he sraxrav s -0-бензилсерилпролилфенилаланил-и-нитроаргинил) лизил-со-нитроаргинилпролилпролилглицина (17).

1,0 r (16) (0,60 ммоль) растворяют в 10 мл безводного хлористого меа тилена и при 0 С добавляют 10 мл

8 н. раствора сухого хлористого водорода в диоксане. Выдерживают 15 мин при комнатной температуре, упаривают о при 20 С. Остаток растирают с безводньос эфиром. Выход 0,90 г (97K). (о .) „ = -46,5 (с 1, диметилформамид).

Е„. = 0,43 (5н, уксусная кислота).

R = 0,21 (Б), 0,76 (В), 0,58 (Г).

Цикло-(ос -бензилоксикарбонил, Я— †(фенилаланил-О-бензилсерилпролилфенилаланил-Ы-нитроаргиниллизил)—

-со-нитроаргинилпролилпролилглицил (18).

0,33 г (17) (0,214 ммоль) и

0,030 мл (0,216 ммоль) триэтиламина растворяют в 800 мл диметилформамида (диметилформамид сушат над окисью бария и перегоняют, а затем ректифицируют над нпнгидрином в атмосфере аргона при 1 мм рт.ст.), охлаждают о, до -б С, добавляют 49,4 мг N-оксисукцинимида (0,428 ммоль) и при перемешивании (атмосфера аргона) в течение 10 ч добавляют раствор 66,4 мг дициклогексилкарбодиимида в 100 мл диметилформамида. При этом поддерживают температуру -6 С. Затем смесь о выдерживают 20 ч при -5оС и 36 ч при комнатной температуре. Упаривают, остаток растирают с эфиром, затем промывают водой. Полученное вещество наносят на колонку с силикагелем (2х100 см), элюируют 0,5 мл хроматографической системы А, затем системой Б. Объединяют фракции, содержащие предполагаемый циклопептид (наиболее хроматографически подвижный компонент смеси циклизации пептидной природы, поглощает при 280 нм).

Упаривают, растирают с эфиром. Выход 25 мг (7,9X).(î j, = -71,2 (с 0,5, 1219587 метанол). Rg = 0,03 (А), 0,69 (Б), 0,84 (В), О 62 (r).

Цикло- (И -каллидин) (1).

20 мг (18) (0,0135 ммоль) растворяют в 1 мл метанола, добавляют 1 каплю уксусной кислоты и 0,2 мл воды.

Гидрируют при атмосферном давлении

70 ч в присутствии свежеприготовленной палладиевой черни. Фильтруют, упаривают, трижды лиофилизуют из воды. Выход 17 мг (93Х), Полученное вещество оказывается хроматографически и электрофоретически совершенно чистым. При инкубации с трипсином происходит расщепление с образованием каллидина, в свою очередь, распадающегося на лизин и. брадикинин (электрофорез и хроматография продуктов расщепления со свидетелями), что является доказательством цикличности структуры. Е1„ = 0,85 (,lн, уксусная кислота). BI = 0,60 (метанол-вода-ацетат аммония) 9,5 мл:

0,5 мл; 0,15 г, силанизированная пластинка "Мерк ) .

Пример 2. N-Аргинилцикло)Š— p(N -лизин, 6-глицин)брадикинийа (2). тpr- ò -Бутоксикарбонилфенилаланилглицин (19).

G,4 г (16,6 ммоль) и -нитрофенилового эфира трет -бутоксикарбонилфенилаланина, 1,13 r (15 ммоль) глицина и 1,67 мл (15 ммоль) N-метилморфолина растворяют в смеси 200 мл диметилформамида и 20 мл воды. Полученный раствор выдерживают 20 ч при комнатной температуре, упаривают и оставшееся масло растворяют в смеси

80 мл 10Х-ного водного раствора бикарбоната калия и 50 мл этилацетата. Этилацетатный слой отделяют, а водный слой экстрагируют эфиром (50 мл) и нейтрализуют избытком IОХного водного раствора бисульфата калия (до рН 2). Полученный раствор экстрагируют этилацетатом (2x50 мл), экстракт промывают водой (50 мл), сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают досуха.

Получают бесцветное кристаллическое вещество. Выход 4,0 г (82,7X). Для аналитических целей кристаллизуют из этилацетата. Т.пл. 165 С (с разл.) . fa)> =- -9,0 (с 1, диметилформамид) °

R< = 0,85 (А), 0,90 (Б), 0,88 (В).

5 !

О !

h --Цитробензиловый эфир трет -бутоксикарбонилфенилаланилглицилпролилфенилаланина (20), 2,,80 г (19) (.8,7 ммоль) растворяют в 50 мл сухого диметилформамида, добавляют 1,84 г (10 ммоль) пентао фторфенола, охлаждают до -20 С и вводят 1,90 r (9,2 ммоль) дициклогексилкарбодиим:rpa, встряхивают до растворения последнего и выдерживают 30 мин при О С. Затем добавляют 4,15 г (3) (8,7 ммоль) и N-метилморфолин до рН 8. Выдерживают 3 ч при комнатной температуре, упаривают, к остатку добавляют 100 мл хлористого метилена, фильтруют, фильтрат экстрагируют I ОХ-ными растворами бикарбоната калия, бисульфата калия и водой (по

100 мл) . Сушат нед безводным сульфатом магния, фильтруют и фильтрат упаривают. Обраузется масло, которое закристаллизовывают растиранием с безводным эфиром. Выход 5,4 г (88,4Х), Т.пл. 125-155 С.!о ) =-45,6 (с 1, диметилформамид). B = 0,88 (А), 0,91 (Б), 0,91 (Г).

Гидразид трет -бутоксикарбонилфенилаланилглицилпролилфенилалани30 на (21).

3,0 r (20) (4,26 ммоль) и 1,0 мл гидразингидрата нагревают 1 ч. в

30 мл этанола при 70 С ° Затем фильто руют, к фильтрату добавляют 50 мл о

З5 воды и выдерживают 20 ч при. — 10 С, отфильтровывают и кристаллы на фильтре промывают 30 мл 50Х-ного водного этанола, затем водой до нейтральной реакции фильтрата. Сушат в эксикаторе над пятиокисью фосфора. Выход

2,30 r (92,8Х). Т.пл. 140-160 С. а) =: — 59,8 (с 1, диметилформамид).

R =: 0,93 (А), 0,92 (Б), 0,91 (Г). й. -Бензилоксикарбонил, E †(трет—

4g -бутоксикарбонил-ц-нитроаргинил)лизилпролин (22).

10,0 r (8) (14,2 ммоль) растворяют в 100 мл диметилформамида, вводят

2,46 r (21,4 ммоль) мелкорастертого

50 пролина, 1,66 мл (14,9 ммоль) N-метилморфолина и перемешивают на магнитной мешалке 20 ч. Затем упаривают, остаток растворяют в смеси

100 мл этилацетата и 100 мл IОХу ного раствора бисульфата калия, водный слой отделяют, а этилацетатный слой экстрагируют IОХ-ным раствором бисульфата калия, а затем IOX-ным

)2!9587

20 раствором бикарбоната калия (по

100 мл). Водно-бикарбонатный слой отделяют, нейтрализуют избытком 10 ного раствора бисульфата калия до рН 2 и экстрагируют этилацетатом (2 х 100 мл). Экстракт сушат безводным сульфатом магния, фильтруют, упаривают. Получают бесцветное аморфное вещество. Выход 7,9 r (82Е).

)О га а (м),= -23,1 (с 1, диметилформамид).

Rg = 0,54 (А), 0,81 (Г).

Трифторацетат сь -бензилоксикарбонил, F — ы -нитроаргинил)-лизилпролина (23).

f5

Синтезируют аналогично (10), исходя из (22). Выход 90 . L „, = 0,49 (5н. уксусная кислота).(a) д = — 11,1 (с 1, диметилформамид). Б = 0,57 (В), 0,70 (Д), аС --Бензилоксикарбонил, E --(т ет

-бутоксикарбонилфенилаланилглицилпролилифенилаланил-ra-нитроаргинил) лизилпролин (24).

2,1 r (21) (3,62 ммоль) растворя- 25 ют в 50 мл диметилформамида, охлажа дают до -30 С и, перемешивая, добавляют охлажденную (-70 С) смесь в 3,5 мл (15,7 ммоль) 4,5 н. раствора сухого хлористого водорода в тет- ЗО рагидрофуране и 20 мл этилацетата. а

Затем при -30 С по каплям добавляют охлажденный раствор 0,45 мл (3,87 ммоль) «Pt « -бутилнитрита в

10 мл этилацетата. Выдерживают 30 мин при -35 0, затем добавляют 1,76 мл (15,8 ммоль) N-метилморфолина, после чего добавляют еще раствор 2,86 r (23) (3,87 ммоль) и 0,44 мл N-метилморфолина в 50 мл диметилформамида. 4б

Выдерживают 3 сут при — 10 С, упаривают, остаток растворяют в смеси

100 мл хлористого метилена и 100 мл . воды. Слой хлористого метилена отделяют, промывают последовательно 45

10 -ными растворами бикарбоната калия, бисульфата калия и водой (по

100 мл), сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют и упаривают.

Получают масло, которое закристаллизовывают при растирании со смесью эфира с этилацетатом (1:1). Выход

3,50 r (85,8X), т.пл. 140-177 C. го а

f )в = -44,1 (с 1, диметилформамид).

R(= 0,53 (A), 0,37 (Б), 0,87 (r). трет -Бутиловый эфир аь-бензилоксикарбонил, Е -(трет -бутоксикарбонилфенилаланилглицилпролилфенилаланил-И-нитроаргинил)лизилпролилиролилглицина (25).

2,70 г (24) (2,40 ммоль) растворяют в 40 мл диметилформамида, охлаждают до О С и добавляют 2,19 r (2,89 ммоль) комплекса F и ),1 г ()5) (4,8 ммоль). Затем выдерживают 20 ч при комнатной температуре, упаривают, остаток растворяют в 50 мл хлористого метилена, фильтруют, фильтрат промывают 50 мл 10 .-ного раствора бисульфата калия и 50 мл воды.

Сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют, упаривают. Остаток дважды растворяют в минимальном объеме хлористого метилена и осаждают эфиром. Выход 2,8 г (87,2%), т.пл.

150-193 С, с разл. j<) = -60,3 (с 1, диметилформамид). R > = 0,57 (А), 0,80 (Б), 0,60 (Г).

Гидрохлорид а -бензилоксикарбонил, с -(фенилаланилглицилпролилфенилаланил-я-нитроаргинил)лизилпролилпролилглицина (26).

1,8 г (25) (1,35 ммоль) при 0 С растворяют в 20 мл смеси трифторуксусной кислоты с хлористым метиленом (1:1), выдерживают 20 мин при комнатной температуре и упаривают при

О С. Остаток закристаллизовывают расо тиранием с 50 мл сухого эфира, растворяют в 10 мл безводного диметилформамида, добавляют 0,33 мл (1,5 ммоль) 4,5н. раствора безводного хлористого водорода в тетрагидрофуране и осаждают 100 мл эфира.

Выход l 55 г (95%)(к) = -77,8

Т.пл. 140-192 С. Rg = 0,73 (В), 0,74 (Д).

Цикло-fW -бензилоксикарбонил, E-(фенилаланилглицилпролилфенилаланил-ь)-нитроаргинил)лизилпролилпролилглицил) (27).

1,1 г (26) (0,91 ммоль) растворяют в 2 л диметилформамида (сушат над окисью бария и перегоняют над нингидрином непосредственно перед употреблением) и, перемешивая в атмосфере сухого аргона, при О С доо бавляют 1,5 r (1,98 ммоль) комплекса F. Затем при комнатной температуре в течение 6 ч добавляют раствор

0,19 мл (1,38 ммоль) триэтиламина в 300 мл диметилформамида. Полученную смесь выдерживают при комнатной температуре 2 сут и у.

Остаток закристаллизовывают расти14

13

1219587 ранием с безводным эфиром, фильтруют, осадок на фильтре промывают эфиром, затем водой. Полученный продукт исследуют по ТСХ в системе Б.

Предполагают, что вещество с R>=0,4 является нужным циклопептидом (один из главных продуктов циклизации, хроматографически подвижен обнаруживается осмотром в УФ-свете и реа- 10 гентом бензидина), Смесь циклизации предварительно очищают на колонке с силикагелем (2xl00 см), используя в качестве элюента систему хлороформ-этанол-н-бутанол-этилацетат 15 (10:6:4:3) ° Фракции, содержащие предполагаемый циклопептид, очищают сно ва на колонке с силикагелем (Зх х250 см), используя систему Б в качестве элюента. Фракции, содержащие чистый циклопептид, объединяют, упаривают, остаток растирают с эфиром.

Получают 102 мг (9,7%) кристаллического вещества. Т,пл, 163-165 С. Мол. масса: найдено 1024 (определено крио- 25 скопически, используя расплав мочевины; вычислено по формуле 1163,31). (ос), = -64,1 (с 0,5, диметипфориамид). R = 0,37 (А), 0,43 (Б), 0,89 (В), 0,96 (Д), 0,37 (Г). 30

Цикло-jE -(фенилаланилглицилпролилфенилаланил-и-нитроаргинил)-лизилпролилпролилглицил)1гидробромид (28).

26 мг (27) (0,0223 ммоль) растворяют в 0,5 мл ледяной уксусной кис- 35 лоты, затем добавляют 0,2 мл свежеприготовленного насыщенного раствора сухого бромпстого водорода в уксусной кислоте. Выдерживают 1 ч при комнатной температуре, затем 40 добавляют 5 мл безводного эфира.

Образовавшийся осадок 10 раз суспендируют в 5 мл безводного эфира и декантируют. Затем выдерживают в эксикаторе над гидроокисью калия при 45

1 мм рт.ст. Выход 23,4 мг (94,7%).

Ен; 0,38 (5н. уксусная кислота).

)<)" = -48,0 (с 0,5, диметилформамид).

N-Трибензилоксикарбониларгинил- 50 цикло-(Е-(фeнилaланилглицилпpoлилфенилаланил-ы-нитроаргинил)лизилпролилглицил) (29).

20 мг (28) (0,018 ммоль) растворяют в 0,5 мл диметилформамида, добавляют 36,7 мг (0,036 ммоль) пента- фторфенилового эфира трибензилоксикарбониларгинина и раствор И-метилI морфолина в диметилформамиде до рН 8. Выдерживают 1 ч при комнатной температуре, упаривают, остаток рас.тирают с 3 мл безводного этилацетата, образовавшийся осадок 3 раза суспендируют в безводном этилацетате и декантируют. Затем остаток высушивают струей сжатого воздуха, 3 раза суспендируют в 3 мл воды и декантируют, Сушат при 1 мм рт,ст, над гидроокисью калия и пятиокисью фосфора. Выход 26,0 мг (91%). Rg =

- "0,67 (Б). f J z = 61,2 (с 0,5, уксусная кислота).

tE

N-Аргинилцикло f(N -лизин, 6-глицин) брадикинин).

23 мг (29) (0,014 ммоль) гидрируют при атмосферном давлении в присутствии палладиевбй черни в смеси

0,4 мл уксусной кислоты, 0,2 мл метанола и 0,04 мл воды в течение 20 ч.

Упаривают, лиофилизуют из воды. Получают пушистый порошок. Продукт электрофоретически и хроматографически однородный. Выход 17,7 мг (96%). Е ; = 0,80 (lн. уксусная кислота).joe)g= †.0,62 (с 0,5, вода), Пример 3. Цикло†(Я-аминододеканоил) брадикинин, .

t) -Нитробензиловый эфир трет -бутоксикарбонилфенилаланил-0-бензилсерилпролина (33).

10,3 г (22,3 ммоль) пентафторфенилового эфира трт -бутоксикарбонил- 0-бенэилсерина и 6,7 .г (23,4 ммоль) гидрохлорида и -нитробенэилового эфира пролина растворяют в 200 мл диметилформамида и добавляют триэтиламин до рН 8. Перемешивают 2 ч при комнатной температуре, упаривают, остаток растворяют в смеси 100 мл эфира и 100 мл воды.

Органический слой отделяют, экстрагируют 100 мл 10%-ного раствора бикарбоната калия, затем 100 мл 10%ного раствора бисульфата калия, сушат над безводным сульфатом магния, фильтруют, упаривают. Получают масло, содержащее и-нитробензиловый эфир трет -бутоксикарбонил-О-бензилсерилпролина (31; R) 0,95 (А); 0,77 (Б), 0,95 (В), 0,76 (Г)) и пентафторфенол. Его растворяют в трифторуксусной кислоте, выдерживают 20 мин при комнатной температуре, упаривают. Остаток, содержащий трифторацетат я -нитробензилового эфира 0-бен15

16

1219587 зилсерилпролина (32), нейтрализуют триэтиламином до рН 8, добавляют

10 r (23,2 ммоль) пентафторфенилового эфира трет -бутоксикарбонилфенилаланина. Выдерживают 1 ч при комнатной температуре, затем добавляют

1 мл 8-диметиламиноэтиламина. Спустя 10 мин смесь нейтрализуют уксусной кислотой до рН 6, упаривают, ос- 10 таток растворяют в смеси 100 мл эфира и 100 мл воды, эфирный слой отделяют, промывают 100 мл 10Х-ного раствора бикарбоната калия, 100 мл 107.— ного бисульфата калия, затем 100 мл воды. Добавляют 50 мл бензола, упаривают полученное темно-коричневое масло, очищают хроматографически (700 r силикагеля, элюируют сначала смесью гептан-этилацетат (5:1), за- 20 тем хроматографической системой (А)

После упаривания элюата получают светло-коричневое масло. Выход 9,7 г (64,5Z). Для аналитических целей небольшую часть (33) закристаллизовы- 25 л вают растиранием с гексаном.(к)

= -29,1 (с 1, диметилформамид),RI — 0,94 (А), 0,77 (Б), 0,96 (В), 0,81 (Г) .

Трифторацетат-И-нитробензилового 30 эфира фенилаланил-0-бензилсерилпролина (34).

9,0 г (33) (13,3 ммоль) растворяют в 30 мл трифторуксусной кислоты и выдерживают 20 мин при комнатной температуре. Упаривают, остаток обрабатывают безводным эфиром. Получают масло, выход 8,9 г (977.). Для аналитических целей небольшую часть масла закристаллизовывают растира- 40 нием с гексаном.(ace = -16,3 (с 1, диметилформамид); Е ц, О, 61 (l н уксусная кислота); Ry 0,12 (A) 0,66 (Б)» 0,88 (В), 0,62 (Г).

И -Нитробензиловый эфир т ет -бутоксикарбонилпролилглицилфенилаланил-0-бензилсерилпролина (37).

Синтезируют аналогично (33), используя (34) вместо (32) и пентафторфениловый эфир T(e7 -бутоксикарбонилглицина. Получают-масло, содержащее и-нитробензиловый эфир трет-бутоксикарбонилглицилфенилаланил-0-бензилсерилпролина (35), Ry 0,71 (А), 0,76 (Б), 0,95 (B), 0,80 (Г) и пентафторфенол, которое без очистки обрабатывают трифторуксусной кислотой аналогично (31) с образованием трифторацетата и -тробензилового эфира глицилфенилаланил-0-бензилсерилпролина (36), Е „, = 0,58 (Iн, уксусная кислота); R 0,02 (А), 0,2 (Б), 0,67 (В),0,62 (Г). Масло, содержащее (36), нейтрализуют и используют для реакции с пентафторфениловым эфиром Т ет -бутоксикарбонилпролина аналогично получению (33). Полученное масло очищают хроматографически (700 r силикагеля, элюируют сначала хлороформом, затем смесью хроматографическая система (А) — изопропанол (4:1)) . После упаривания элюата получают светло-коричневое масло, которое закристаллизовывают растиранием смесью эфира с гексаном (1:1). Выход 627.. () „ = о — -43, 0 (с 1, диметилформамид), R = 0,58 (А), 0,72 (Б), 0,94 (В), 0,78 (Г).

Трифторацетат П -нитробензилового эфира пролилглицилфенилаланил-0-бензилсерилпролина (38).

2,5 r (37) (3,0 ммоль) растворяют в 20 мл хлористого метилена, затем добавляют 4 мл трифторуксусной кислоты. Выдерживают 2 ч при комнатной температуре, упаривают, остаток закристаллк.зовывают растиранием с безводным эфиром. Выход 2,47 r (987).

fe) = -27,8 (с 1, дж етилформамид) .

Ен; 0 0,57 (Iн, уксусная кислота);

R% = 0 .(А), 0,13 (Б); 0,81 (В), 0,26 (Г), и -Нитробензиловый эфир трет бутоксикарбонил-4)-íèòðoàðrèíèëïðîëèëпролилглицилфенилаланил-0-бензилсерилпролина (39).

1,36 г (9) (3,27 ммоль) 0,60 г (3,27 ммоль) пентафторфенола и 0,67 г (3,27 ммоль) дициклогексилкарбодиимида при 0 С растворяют в 50 мл безводного хлористого метилена, выдерживают 1 ч, фильтруют. В фильтрате растворяют 2,36 г (38) (2,8ммоль) добавляют триэтиламин до рН 8. Выдерживают 20 ч при комнатной температуре. Смесь экстрагируют 50 мл

102-ного бикарбоната калия, затем

50 мл 10Х-ного бисульфата калия и

50 мл воды, упаривают, остаток очищают хроматографически (200 r силн- ° кагеля) элюент — хроматографическая система (А) — изопропанол (4:1). Выход 1,9 г (607.).(sg = -50,0 (с 1, 18

17 !

219587 трет -Бутоксикарбонил-е)-нитроаргинил — u-аминододексаиовая кислота (41).

5 г (13,4 ммоль) трет †бутоксикарбонил-GI-нитроаргинина превращают в пентафторфениловый эфир. Масло, содержащее пентафторфен J! O!3b!I эфир

«рет -бутоксикарбонил-и-нитроаргинил, растворяют в 75 мл метилформамида, добавляют 4,3 г (20 ммоль) ь3 -аминододекановой кислоты, 1!-метилморфолин до pII 8 и 20 мл воды. Интенсивно перемешивают при комнатной температуре в течение 20 ч, фильтруют, фильтрат упаривают, остаток очищают хроматографически (1 кг силикагеля)9 элюируют сначала хроматографической системой А, затем смесью хроматографическая система A---изопропанол (4".I). Остаток после упаривания элюата закристаллизопывают растиранием с гексаном. Выход 1,5 r (22%). (<) в = -4,1 (с !9 циметилф ормамид ); Н g = О, 1 9 (А) 9

0,70 (Б), 0,87 (В), 0,75 (Г).

Трифторацетат ь3-нитроаргинил->

-Ы-аминододекановой кислоты (42).

9I (!

Получают аналогично (34) из (41).

Выход 96%e Е!! = 0,58 (1 н. уксус.ная кислота); В л- = 0 (A) 0,33 (Б);

0,48 (В); 0,55 (Г). диметилформамид ), Н О, 08 (A ), О, 61 (Б), 0,96 (В), 0,56 (Г) . трет -Бутоксикарбонил-43-нитроаргинилпролилпролилглицилфенилаланил-О— бензилсерилпролин (40).

1,45 г (39) (1,29 ммоль) растворя-, ют в 18 мл ацетона, добавляют 7 мл воды, 1 мг тимолфталеина и при перемешивании 1,3 MJI 1 н. гидроокиси нат- 19 рия (порциями по 0,3 мл) в течение

7 ч. Очередную порцию щелочи добавляют после исчезновения синей окраски, Нейтрализуют 10%-ным раствором бисульфата калия до pli 6, упаривают до 15 исчезновения запаха ацетона. )1обав-ляют 30 мл хлористого метилена, органический слой промывают 30 мл 1%ного раствора бисульфата калия и водой (трижды по 30 мл). Упаривают, 20 остаток закристаллизовывают растиранием с безводнь и эфиром, Bbrxo 1, 1 I(86%).1>9 ) 3, = -56,5 (с ), диметилфоРмамид); и 0904 (А), 0,56 (Б), 0,90 (В), 0,54 (Г), Зре3 -Бутоксикарбонилфенилаланил-ы-I«rтроаргинил-и-аминододекановая кислота (43).

1,3 г (42) (2,45 ммоль) растворяют в 30 мл диметилформамида, добавляют 11-метилморфолин до pll 8, затем 2,0 г (4,6 ммоль) пентафторфенилового эфира FPGT -бутоксикарбонилфенилаланина. Выдерживают 1 ч при комнатной температуре, упаривают, остаток растворяют в 50 мл хлористого метилена и промывают

50 мл 10%-ного бисульфата калия и

50 мл воды (дваждь3). Упаривают, осc!òoê очищают хроматографически (200 г силикагеля элюируют хроматография"cкой системой А). Остаток после упаривания элюата закристаллизовывают растиранием с гексаном.

Br)!xo>r, 0,5 г (31%) . (o ) р = -13,5 (с О, 2 9 диматилформамид) . Н О, 19 (,À), 0976 (Б), 0,91,В), 0,80 (Г).

Гидрохлорид фенилалаиил-C)†- нитроapaинил-,;3-аминододекановой кислоты (>

0,45 r (43) <0,68 ммоль) раство-!

3F !G г 3 I О мл ледяной уксусной кис

IoTr>I H добавляют 1 мл насьш1еино "o раствора безводного хлористого водо",.Gb-,а I3 диоксане. Выдерживают

30:rFI!. при комнатной температуре. .::арин:. ют ос-à,— îê закристаллизог;b!>3arG". раст..rpаиием с безводным эфио:! 9- >шат -3 эксикаторе над гидро— к !I-ю калия. Выход 0,4 г (98%) .

С ! р -.3, — +3,8 (с 1, диметилформамид), 0,44 (1 н. укс.усная кислота);

> (>!9 — 0 A), 0979 (В), 0,5, },, DG — --Бутиксикар бонил-ь3-нитроаргинилпропилпролилглицилфенилаланил--О-бен 3 илсерилпр олилфепилаланил-GJ-нитроаргинип--ш-аминододекановая ( кисло та, 4 э .

0 76 "= (40),О,) I ммоль) и 0,53 г

-комплекса I (0,70 ммоль) растворяют в 20 мл безводного диметилформа >яда. Вь3держ,лвают 12 ч при комнат31ой температуре, затем добавляют

0,4 r (44) (0,67 ммоль) и диизопропилэтиламин до рН 8. Выдерживают

?0 - при комнатной температуре, затем упаривают, остаток растирают с безвод33ь331 эфиром . Очищают хроматографически (1 кг силикагеля) пятикратной рециркуляцией, используя .::роматографическую систему Б K23: .3люенг. Остаток после упаривания

19

1219587 элюата закристаллизовывают растиранием с безводным эфиром. Выход

0,56 г (547).(ccJ = -47,5 (с 1, диметилформамид); В = 0 (А); 0,89 (В), 0,64 (Г).

Пентафторфениловый эфир трет -бутоксикарбонил-Я-нитроаргинилпролилпролилглицилфенилаланил-О-бензилсерилпролилфенилаланил-Ю-нитроарги- 10 нил-<д-аминододекановой кислоты (46).

100 мг (45) (0,065 ммоль) и

67,3 мг {0,089 ммоль) комплекса F растворяют в 20 мл безводного хлористого метилена. Выдерживают 20 ч 15 при комнатной температуре, упаривают, остаток закристаллизовывают растиранием с безводным эфиром. 3атем его снова растворяют в 2 мл хохлористого метилена, фильтруют, 20 фильтрат упаривают, остаток растирают с безводным эфиром. Выход

105 мг (95K).

Гидрохлорид пентафторфенилового эфираы -нитроаргинилпролилглицил- 25 фенилаланил-0-бензилсерилпролилфенилаланил-ц-нитроаргинил-ю-аминододекановой кислоты (47).

100 мг. (46) (0,059 ммоль) растворяют в 2 мл безводного хлористого З0 метилена, затем добавляют 0,1 мл насыщенного раствора безводного хлористого водорода в диоксане. Выдерживают 30 мин при комнатной температуре затем добавляют 20 мл безводного эфира. Образовавшийся осадок фильтруют, промывают безводным эфиром, выдерживают в вакуумном экси. каторе над гидроок