Состав для определения циклического аденозин-3,5- монофосфата
Иллюстрации
Показать всеРеферат
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (19) (11) (51) 4 G 01 N 33/48
1 л
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ;Ы,К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Оэ 9х10
1, 2х10
Циклическая аде1 нозин-3,5 -монофосфатзависимая протеинкиназа
Вода
0,010-0,015
Остальное
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3545404/28-14 (22) 10.12.82 (46) 23.04.86. Бюл. ¹ 15 (71) ЛГУ им.А .А.Жданова (72) В.Ю.Васильев, Ю.А.Лазебник, В.А.Мищенко, Е.С.Северин и В.И.Мишин (53) 577.15.08 (088.8) (56) Clinica Chimica Acta, 1974, vol.56, № 3, р.221-234. .(54)(57) СОСТАВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИКЛИЧЕСКОГО АДБНОЗИН вЂ” 3,5-МОНОФОСФАТА, содержащий буфер, ингибитор э фосфодиэстеразы:, 8 . — Н-циклический
I I аденоэин-3,5 -монофосфат и цикличес-! кую аденоэин-3,5 -монофосфатэависимую протеинкиназу, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения точности определения, в качестве ингибитора фосфодиэстеразы используют теофиютлин,а в качестве буфера—
0,02-0,05 М цитратный буфер рН 4,44,8 при следующем соотношении компонентов, мас.X:
0,02-0,05 М цитратный буфер рН
4,4-4,8 0,42-1 05
Теофиллин О, 10-1, 39
8- Н-Циклический ! I аденозин-3,5 монофосфат
1226311
О., 42-1, 05
О, 10-1,39
0 9х10-
-7
1, 2х10
Составитель E.Æèòíèêîíà
Техред Л.Олейник Корректор M.Äåì÷èê
Редактор А.Шишкина
Тираж 778 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д.4/5
Заказ 2123/4 1
Производственно-полиграфическое предприятие„г. Ужгород, ул.Проектная, 4
Изобретение относится к молекулярной биологии и медицинской биохимии, в частности. к способам анализа биологически активных соединений, регулирующих ответ клеток на внешнее ноэдействие на уровне фосфорилирования белков цитоплазмы и генетического аппарата, и может быть яспользовано для определения содержания циклического аденозин-3 5 -монофосфата (цАМФ) в клетках и в тканях организма, а также в биопсийном материале, сыворотке, форменных элементах крови, ликворе и моче животных и человека.
Определение уровня цАМФ имеет диагностическое значение при болезнях эндокринной, сердечно-сосудистой, нервной систем, при аллергических, инфекционных заболеваниях и злокачественных новообразованиях.
Цель изобретения — повышение точности определения.
Способ при использовании предлагаемого состава осуществляют следующим образом.
В серию пробирок вносят 100 мкл состава, содержащего мас.Е:
0,02-0,05 М цитратный буфер рН
4,4-4,8
Теофиллин
8- Н цАИФ цАМФ-зависимая протеинкиназа 0,010-0,015
Вода Остальное
В часть пробирок нносят 50 мкл анализируемого образца. Содержимое всех пробирок перемешивают и инкубируют в течение 2 ч при 2-4 С.
После проведения реакции для осаждения нуклеотид-белкового комплекса во все пробирки добавляют по 500 мкл насыщенного раствора сульфата аммония, охлажденного до 2 С, тщательно
0 перемешивают и через 10-15 мин центо рифугируют в течение 10 мин при 4 С.
Осадок растворяют. в 500 мкл воды. Иэ каждой пробирки отбирают по 400 мкл раствора для измерения радиоактивности нуклеотид-белконого комплекса.
Среднее значение радиоактивности н контрольных пробах беэ анализируемого образца (пробы 1-2) принимают за фоновую величину, которую вычитают из величины радиоактивности всех остальных проб. Среднее значение радиоактивности проб 3-4 обозначают как Со — это количество 8- H цАМФ, 3 связанное в отсутствии намеченного цАМФ. Значение радиоактивности в пробах 5-14 обозначают как С„. Рассчитывают отношение С /С» для каждой пробы. Строят калибровочную кривую, представляющую зависймость С /С» от количества цАМФ в анализируемых пробах,по ней находят количество цАМФ н анализируемых пробах.