Состав для определения циклического аденозин-3,5- монофосфата

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (51) 4 G 01 N 33/48

1 л

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ;Ы,К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Оэ 9х10

1, 2х10

Циклическая аде1 нозин-3,5 -монофосфатзависимая протеинкиназа

Вода

0,010-0,015

Остальное

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3545404/28-14 (22) 10.12.82 (46) 23.04.86. Бюл. ¹ 15 (71) ЛГУ им.А .А.Жданова (72) В.Ю.Васильев, Ю.А.Лазебник, В.А.Мищенко, Е.С.Северин и В.И.Мишин (53) 577.15.08 (088.8) (56) Clinica Chimica Acta, 1974, vol.56, № 3, р.221-234. .(54)(57) СОСТАВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИКЛИЧЕСКОГО АДБНОЗИН вЂ” 3,5-МОНОФОСФАТА, содержащий буфер, ингибитор э фосфодиэстеразы:, 8 . — Н-циклический

I I аденоэин-3,5 -монофосфат и цикличес-! кую аденоэин-3,5 -монофосфатэависимую протеинкиназу, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повышения точности определения, в качестве ингибитора фосфодиэстеразы используют теофиютлин,а в качестве буфера—

0,02-0,05 М цитратный буфер рН 4,44,8 при следующем соотношении компонентов, мас.X:

0,02-0,05 М цитратный буфер рН

4,4-4,8 0,42-1 05

Теофиллин О, 10-1, 39

8- Н-Циклический ! I аденозин-3,5 монофосфат

1226311

О., 42-1, 05

О, 10-1,39

0 9х10-

-7

1, 2х10

Составитель E.Æèòíèêîíà

Техред Л.Олейник Корректор M.Äåì÷èê

Редактор А.Шишкина

Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д.4/5

Заказ 2123/4 1

Производственно-полиграфическое предприятие„г. Ужгород, ул.Проектная, 4

Изобретение относится к молекулярной биологии и медицинской биохимии, в частности. к способам анализа биологически активных соединений, регулирующих ответ клеток на внешнее ноэдействие на уровне фосфорилирования белков цитоплазмы и генетического аппарата, и может быть яспользовано для определения содержания циклического аденозин-3 5 -монофосфата (цАМФ) в клетках и в тканях организма, а также в биопсийном материале, сыворотке, форменных элементах крови, ликворе и моче животных и человека.

Определение уровня цАМФ имеет диагностическое значение при болезнях эндокринной, сердечно-сосудистой, нервной систем, при аллергических, инфекционных заболеваниях и злокачественных новообразованиях.

Цель изобретения — повышение точности определения.

Способ при использовании предлагаемого состава осуществляют следующим образом.

В серию пробирок вносят 100 мкл состава, содержащего мас.Е:

0,02-0,05 М цитратный буфер рН

4,4-4,8

Теофиллин

8- Н цАИФ цАМФ-зависимая протеинкиназа 0,010-0,015

Вода Остальное

В часть пробирок нносят 50 мкл анализируемого образца. Содержимое всех пробирок перемешивают и инкубируют в течение 2 ч при 2-4 С.

После проведения реакции для осаждения нуклеотид-белкового комплекса во все пробирки добавляют по 500 мкл насыщенного раствора сульфата аммония, охлажденного до 2 С, тщательно

0 перемешивают и через 10-15 мин центо рифугируют в течение 10 мин при 4 С.

Осадок растворяют. в 500 мкл воды. Иэ каждой пробирки отбирают по 400 мкл раствора для измерения радиоактивности нуклеотид-белконого комплекса.

Среднее значение радиоактивности н контрольных пробах беэ анализируемого образца (пробы 1-2) принимают за фоновую величину, которую вычитают из величины радиоактивности всех остальных проб. Среднее значение радиоактивности проб 3-4 обозначают как Со — это количество 8- H цАМФ, 3 связанное в отсутствии намеченного цАМФ. Значение радиоактивности в пробах 5-14 обозначают как С„. Рассчитывают отношение С /С» для каждой пробы. Строят калибровочную кривую, представляющую зависймость С /С» от количества цАМФ в анализируемых пробах,по ней находят количество цАМФ н анализируемых пробах.