Способ определения абсцизовой кислоты в тканях растений

Способ определения абсцизовой кислоты в тканях растений

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение позволяет одновременно определять абсцизовую и индрлил-3-уксусную кислоты путем экстрагирования растительного материала в водном метаноле с упариванием экстракта . После растворения в метаноле сухого остатка его наносят на пластинку (П) со слоем силикагеля на подложке в промежуток между направляющими , размер которых 5-6 см в длину перпендикулярно нижнему краю пластинки с расстоянием между направляющими 8-10 мм. П помещают в содержащую 10- 15%-ный аммиак хроматографическую камеру и хроматографируют до подъема раствора аммиака на высоту 4-5 см с последующим удалением отрезанием нижней части П параллельно ее нижнему краю на расстоянии 1 -2 м выше пигментированной зоны. На второй стадии верхнюю часть П хроматографируют в том же направлении с хлороформуксусной кислотой в качестве растворителя до подъема его на высоту 12- 13 см. После этого П высушивают, поворачивают на 90 и хроматографируют в растворителе второй стадии. Количественную оценку осуществляют методом спектроденситометрии. 2 табл. (Л с со со о ел ьэ

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН! ба 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3743! 88/30-15 (22) 21.05.84 (46) 23.05.86. Бюл. 9 19 (71) Институт физиологии растений

АН УССР (72) С.В.Савинский, И.Ш.Кофман, Е.М.Ильяшук и Д.А.Лихолат (53) 543.8:581.19(088.8) (56) Кефели В.И. и Кислин Е,Н. Газохроматографическое определение абсцизовой и индолил-3-уксусной кислот в растительных тканях. Физиология растений, 1982, 29,2, 407-414.

Railton I.D., Purification of

plant auxin G polyamide thin - lауег

chromatography, J, Chromatography, v. 70, Ф 11, 1972, р. 202-205. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АБСЦИЗОВОЙ

КИСЛОТЫ В ТКАНЯХ РАСТЕНИЙ (57) Изобретение позволяет одновременно определять абсцизовую и индолил-3-уксусную кислоты путем экстрагирования растительного материала в водном метаноле с упариванием экст„„SU„„1233052 А1 ракта. После растворения в метаноле сухого остатка его наносят на пластинку (П) со слоем силикагеля на подложке в промежуток между направляющими, размер которых 5-6 см в длину перпендикулярно нижнему краю пластинки с расстоянием между направляющими

8-10 мм. П помещают в содержащую 10l5X-ный в дный аммиак хроматографическую камеру и хроматографируют до подъема раствора аммиака на высоту

4-5 см с последующим удалением отрезанием нижней части П параллельно ее нижнему краю на расстоянии 1-2 мм выше пигментированной зоны. На второй стадии верхнюю часть II хроматографируют в том же направлении с хлороформуксусной кислотой в качестве растворителя до подъема его на высоту 1213 см. После этого П высушивают, поо ворачивают на 90 и хроматографируют в растворителе второй стадии. Количественную оценку осуществляют методом спектроденситометрии. 2 табл.

1233052

Изобретение относится к аналитической химии, а именна к способам оп. ределения аб сцизово и и индолил- 3 óêсуснай кислот в тканях растений методам хроматографии в тонком слое.

Целью изобретения является повышение эффективности способа и одновременное определение абсцизовой и индолил-3-уксусной кислот.

Способ осуществляется следующим образом.

1 r фиксированного жидким азотом . свежего растительнога материала экстрагируют трижды в течение 1 ч при

5 С по 10 мл 80 †но водного метанола. Объединенный метанальный экстракт фильтруют и упаривают под вакуумом при 35-40 С. Сухой остаток растворяют в 100 мкл метанола и количественно переносят 50 мкл этого раствора на пластинку с тонким слоем силикагеля на алюминиевой или пластиковой подложке в промежуток между двумя направляющими. Размер направляющих 5-6 см в длину перпендикулярно нижнему краю пластинки в левом углу с расстоянием между направляющими 8-10 мм. Жидкость из микрошприца подается равномерно со скоростью, позволяющей раствору самопроизвольно распространяться по площади, ограниченной направляющими. Пластинку помещают в хроматографическую камеру, содержащую 12,5 .-ный водный аммиак, и хроматографируют до подъема фронта растворителя на высоту 4-5 см.

После высушивания пластинки и удаления аммиачного запаха отрезают нижнюю часть пластинки параллельно ее нижнему краю на расстоянии 1-2 мм выше пигментированной зоны. Верхнюю часть пластинки помещают в хроматографическую камеру и разделяют в системе хлороформ — уксусная кислота (20:3). После подъема растворителя на высоту 12-13 см пластинку высушивают о, Э по во рачив ают на 90; в л евам углу наносят количественно стандартные растворы абсцизовой и индолил-3-ук1 сусной кислот в известной концентрации, проводят хроматографиравание в новом направлении в свежеприготовленной системе хлороформ — уксусная . кислота (20:3) . Количественное опре- деление проводят методом спектроденситометрии при длине волны 280 нм.

Количественный расчет производится методом абсолютной калибровки при использовании в качестве стандартных веществ абсцизоной и индолил-3-уксусной кисло т.

Изменение условий нанесения образца, в частности размеров направляющих и расстояния между ними, а также концентрацИИ водного аммиака, оказывает влияние на конечный результат.

Пример 1. 1 r фиксированного жидким азотом свежего растительного материала, содержащего 5 мкг абсци""oâîé кислоты и 5 мкг индолил-3-уксусной кислоты, экстрагируют трижды в течение 1 ч при 5 С па 10 мл 80 -наго водного метанола. Объединенн и метанольный экстракт фигьтруют и упаа ривают под вакуумом при 35-40 С. Сухой остаток растворяют в 100 мкл метанола и количественно переносят

50 мкл этого раствора на пластинку тонким слоем силикагеля в промежуток между двумя направляющими размером

25 б см в длину перпендикулярно нижнему . краю пластинки в левом углу с расстоянием между направляющими 10 мм. Хроматографирование проводят в 5 -ном . водном аммиаке на высоту подъема

IO фронта растворителя 5 см. Дальнейший ход анализа аналогичен описанию осуществления способа. Процент определения составляет для абсцизовой кислоты 21,4 и для индолил-3-уксусной кис.лоты 29,6.

Пример 2. 1 г фиксированного жидким азотом свежего растительного материала, содержащего 5 мкг абсцизовой кислоты и 5 мкг индолил-3-уксусной кислоты, экстрагируют трижды в течение 1 .ч при 5 С по 10 мл 80 ного водного метанола. Объединенный метанольный экстракт фильтруют и упао ривают под вакуумом при 35-40 С. Сухой остаток растворяют в 100 мкл метанола. и количественно переносят

50 мкл этого раствора на пластинку с тонким слоем силикагеля в промежуток между двумя направляющими размером

6 см в длину герпендикулярна нижнему краю пластинки в левом углу с расстоянием между направляющими 10 мм.

Хроматографиравание проводят в 12,5 нам водном аммиаке. Процент определения составляет для абсцизовой кислоты

73 5 и для индолил-3-уксусной кислоты 85,7.!

233052

Пример 3. 1 г фиксированного жидким азотом свежего растительного материала, содержащего 5 мкг абсцизовой кислоты и 5 мкг индолил-3-уксусной кислоты, экстрагируют трижды в течение 1 ч при 5 С по 10 мл 80 ного водного метанола. Объединенный метанольный экстракт фильтруют и упаривают под вакуумом при 35-40 С. Сухой остаток растворяют в 100 мкл ме- 1О танола и количественно переносят

50 мкл этого раствора на пластинку с тонким слоем силикагеля в промежуток между двумя направляющими размером 6 см в длину перпендикулярно ниж. !5 нему краю пластинки в левом углу с расстоянием между направляющими

10 мм. Хроматографирование проводят

25 -ным водным аммиаком. Процент определения составляет для абсцизовой 20 кислоты 51,2 и для индолил-3-уксусной кислоты 59,4.

II р и м е р 4. 1 г фиксированного жидким азотом свежего расти- 25 тельного материала, содержащего

5 мкг абсцизовой кислоты и 5 мкг индолил-3-уксусной кислоты, экстрагио руют трижды в течение 1 ч при 5 С по

1О мл 80 -ного водного метанола. 30

Объединенный метанольный экстракт фильтруют и упаривают под вакуумом о при 35-40 С. Сухой остаток растворяют в 100 мкл метанола и количественно переносят 50 мкл этого раствора на пластинку с тонким слоем силикагеля в промежуток между двумя направляющими размером 3 см в длину перпендикулярно нижнему краю пластинки в левом углу с расстоянием между направ- 40 ляющими 10 мм. Ход анализа аналогичен описанному в примере 2. Процент определения составляет для абсцизовой кислоты 10,2 и индолил-3-уксусной кислоты 13,7. 45

Пример 5. 1 г фиксированного жидким азотом свежего растительного материала, содержащего 5 мкг абсцизовой кислоты и 5 мкг индолил-3-ук. сусной кислоты, экстрагируют трижды 50 в течение 1 ч при 5 С по 10 мл 80 ного водного метанола. Объединенный метанольный экстракт фильтруют и о упаривают под вакуумом при 35-40 С.

Сухой остаток растворяют в )00 мкл 55 метанола и количественно переносят .50 мкл этого раствора на пластинку с тонким слоем силикагеля в промежчток между двумя направляющими размером 8 см н длину перпендикулярно нижнему краю пластинки в левом углу с расстоянием между направляющими

10 мм. Дальнейший ход анализа аналогичен описанному в примере 2. Процент определения составляет для абсцизовой кислоты 59,6 и индолил-3-уксусной кислоты 68,3.

II р и м е р б. 1 r фиксированного жидким азотом свежего растительного материала, содержащего 5 мкг абсцизовой кислоты и 5 мкг.индолил-3-уксусной кислоты, экстрагируют трижды в течение 1 ч при 5 С по 10 мл

80Х-ного водного метанола. Объединенный метанольный экстракт фильтруют H о упаривают под вакуумом при 45-40 С.

Сухой остаток растворяют в 100 мкл метанола и количественно переносят

50 мкл этого раствора на пластинку с тонким слоем силикагеля в промежуток между двумя направляющими размером 6 см в длину перпендикулярно нижнему краю пластинки в левом углу с расстоянием между направляющими

5 мм. Дальнейший ход анализа аналогичен описанному в примере 2. Процент определения составляет для абсцизовой кислоты 7,3 и для индолил-3-уксусной кислоты 13,2.

Пример 7. 1 г фиксированного жидким азотом свежего растительного материала, содержащего 5 мкг абсцизовой кислоты и 5 мкг индолил-3-уксусной кислоты, экстрагируют трижды о в течение 1 ч при 5 С по 10 мл 80 .— го водного метанола. Объединенный метанольный экстракт фильтруют и упарио вают под вакуумом при 35-40 С. Сухой остаток растворяют в 100 мкл метанола и количественно переносят 50 мкл этого раствора на пластинку с тонким слоем силикагеля в промежутокмежду двумя направляющими размером 6 см в длину перпендикулярно нижнему краю wracтинки в левом углу с расстоянием между направляющими 15 мм. Дальнейший ход анализа аналогичен описанному в примере 2. Процент определения составляет для абсцизовой кислоты 35,9 и для индолил-3-уксусной кислоты48,, 1 .

В табл.) приведено влияние изменения условий нанесения образца и концентрации водного аммиака на полноту определения абсцизовой и индолил-3-уксусной кислот в растительном образце (на примере 5 мкг кислот .

1233052

Таблица 1

Концентpация Вод

Полнота опреДлина на- РасстояПример деления кислот, % ние межправляющих, см ду направ- ного аммиляюшими,мм ака, % абсцизовой индолил-3 — уксусной

21,4 29,6

73,5 85,7

51,2 59,4

1I0,2 !3,7

12,5

25

12,5

10

7,3 !3,2

12,5

35,9 48,1

12,5

Результаты показывают, что опти- мальными условиями нанесения образца являются длина направляющих 6 см, расстояние между направляющими 10 мм,з5 а оптимальной концентрацией для хроматографирования в первой системе является 12,5%-ный водный аммиак.

В данных условиях очистки растительного экстракта количественно определяются абсцизовая и индолил-3-уксусная кислоты в различных растительных образцах.

Пример 8. 1 г фиксированной жидким азотом колеоптилей пшеницы, . 45 содержащий 5 мкг абсцизовой кислоты и 5 мкг индолил-3-уксусной кислоты, экстрагируют трижды в течение 1 ч при 5 С по 10 мл 80%-ного водного г0 метанола. Дальнейший ход анализа ана5G логичен описанному в примере 2. Полнота определения составляет для абсцизовой кислоты 72,5 и для индолил-3-уксусной кислоты 83,3.

Пример 9. 1 r фиксированных 55 жидким азотом проростков кукурузы, 12,5 59,6 68,3 содержащий 5 мкг абсцизовой кислоты и 5 мкг индолил-3-уксусной кислоты, экстрагируют трижды в течение 1 ч при 5 С по 10 мл 80%-ного водного метанола. Дальнейший ход анализа аналогичен описанному в примере 2. Полнота определения составляет для абсцизовой кислоты 8?,5 и для индолил-3-уксусной кислоты 88,0.

Il p и м е р 10. 1 r фиксированных жидким азотом листьев подсолнечника, содержащий 5 мкг абсцизовой кислоты и 5 мкг индолил-3-уксусной кислоты„ экстрагируют трижды в течение 1 ч при 5 С по 10 мл 80%-ного водного метанола. Дальнейший ход анализа аналогичен описанному в примере 2„ Полнота определения составляет для абсцизовой кислоты 53,1 и для индолил-3-уксусной кислоты 68,8.

Из табл.2 следует, что полнота определения кислот предлагаемым способом в 1,5-2 раза вышее, чем известным.

1233052

Т а б л и ц а 2

Полнота определения, 7

Кислота

Преплагаемый

Известный способ

Пророст- Листья ки куку- подсолКолеоптили пшенирузы нечника цы

Абсцизовая

32,2

72,5

87,5

53,1

Индолил-3-уксусная

68,8

83,3

88,0

39,8

Составитель И.Тареева

Техред 0.Сопка Корректор М. Самборская

Редактор P.Цицика

Заказ 2763/46 : Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35; Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r.Óæãoðoä, ул.Проектная, 4

Из приведенных примеров видно, что предлагаемый способ повышает полноту определения абсцизовой и индолил-3-уксусной кислот в тканях рас- тений.

Формула изобретения

Способ определения абсцизовой кислоты в тканях растений путем экстракции из растительной ткани органическим растворителем, удаления твердой фазы, концентрирования жидкой фазы с последующей очисткой кислоты из концентрата двукратной хроматографией„ в тонком слое сорбента на пластине, отличающийся тем, что, с целью повышения эффективности способа и одновременного определения нндолил-3-уксусной кислоты, перед на- 45 несением концентрата на сорбент при: первой стадии хроматографирования на сорбенте наносят направляющие в виде двух параллельных борозд путем удаления сорбента, при этом длина борозды 5-6 см, а расстояние между ними, 8-10 мм, на первой стадии используют систему растворителей в виде 10-157ного водноro раствора аммиака до т подъема его на высоту 4-5 .см с последующим удалением коэкстрактивных веществ с пластины, на второй стадии хроматографии полученное пятно кислот хроматографируют в том же направлении, при этом в качестве системы . растворителей используют хлороформ— уксусную кислоту до подъема растворителя на высоту 12-!3 см, причем пятно, полученное после второй стадии, дополнительно хроматографируют в системе растворителя, используемого на второй стадии,приповороте пластинына о

90, а количественное определение осуществляют методомспектроденситометрии.