Способ определения мочевой кислоты

Способ определения мочевой кислоты

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к электрохимическим методам анализа физиологически активных соединений в присутствии ферментов. Цель изобретенияповьшение точности способа за счет проведения электролиза в раствор.е ферроцианида калия. Каталитическую мембрану изготавливают путем растворения 10 мг альбумина и 5 мг пероксидазы в 0,1 мл раствора уриказы в 0,1 М боратном буфере рН 9,0. Смесь обрабатывают 0,01 мл 25%-ного гпутарового альдегида и выпивают на диализную мембрану. Высушенную мембрану накладывают на стеклоуглеродный электрод и закрепляют. В качестве рабочего электрода используют стеклоуглерод, в качестве медиатора - ферроцианид калия. Электролиз проводится при нулевом потенщ1але в интервале рН 8,8 - 9,2. Концентрация мочевой кислоты определяется по данным графика. Из графика видно, что зависимость величины стационарного тока от концентрации мочевой кислоты линейна до 6 мл %. 1 ил, 2 табл. с S (Л 4 У, М С//см 2 ffв мочебая кислота, мг%

„,SU„„1236

Ai (gg4с01N

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

7,Х

6 8 (мочебая кислота), юг %

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA

Н ASTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3722832/28-14 (22) 10.04,84 (46) 07.06.86. Бюл. В 21 .(72) Ю.Ю.Кулис, М.В.Песлякене, В.-С.А.Лауринавичюс, А.Л.Симонян, С.Ш.Татикяи, Г.Э.Хачатрян и Ц.М.Авакян (53) 612.461. 25(088 ° 8) (56) Nanjo .М. and Guilbaut С.G. enzyme Electrode Sensing Îxygen for

Юг с Acid in Serum und Urine — Anal. . Chemistry, 1974, vol 46, М 12, р. 1769-1772. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МОЧЕВОЙ

КИСЛОТЫ (57) Изобретение относится к электрохимическим методам анализа физиологически активных соединений в присутствии ферментов. Цель изобретенияповышение точности способа эа счет

-проведения электролиза в растворе ферроцианида калия. Каталитическую мембрану изготавливают путем растворения 10 мг альбумина и 5 мг пероксидазы в О, 1 мл раствора уриказы в

О, 1 М боратном буфере рН 9,0. Смесь обрабатывают 0,01 мп 25Х-ного глутарового альдегида и выливают на диализную мембрану. Высушенную мембрану накладывают на стеклоуглеродный электрод и закрепляют. В качестве рабочего электрода используют стеклоуглерод, в качестве медиатора — ферроцианид калия. Электролиз проводится при нулевом потенциале в интервале рН 8,8 — 9,2. Концентрация мочевой кислоты определяется по данным графика. Иэ графика видно, что зависимость величины стационарного тока от концентрации мочевой кислоты линейна до б мл X. 1 ил, 2 табл.

Х вЂ” О 5 мкА/см

Таблица 1

Концентрация мочевой кислоТок, нА/см ты в сыворотке, мг %

86

129

177

260

12363

Изобретение относится к медицине, в частности к электрохимическим методам анализа физиологически активных соединений в присутствии ферментов. 5

Цель изобретения — повышение точности способа эа счет проведения электролиза в растворе ферроцианида калия.

Способ осуществляется следующим 10 образом.

Предварительно изготавливают каталитическую мембрану путем растворения 10 мг альбумина и 5 мг пероксидазы в О, 1 мл раствора уриказы 15 (2,4 мг/мл) в О, 1 М боратном буфере рН 9,0. Смесь обрабатывают 0,01 мл

25Х-ного глутарового альдегида и выпивают на диализную мембрану площадью 3 см . Высушенную мембрану тол- 20 щиной 0,05 мм накладывают на стеклоуглеродный электрод и прикрепляют резиновым кольцом.

В предлагаемом способе в качестве рабочего электрода используется 25 стеклоуглерод, в качестве медиатора — ферроцианид калия.Электролиз проводится при нулевом потенциале относительно насыщенного Ag/AgCl электрода сравнения в О, 1 М боратном буфер- 50 ном растворе в интервале рН 8,8-9,2.

Изменение рН буферного раствора в этом интервале практически не влияет на ток электрода. Способ применим и в менее щелочной области, однако при переходе к менее щелочной среде уменьшается каталитическая активность уриказы. Так, если при рН 8,8 и

0,145 мМ (2,4 мг Х) мочевой кислоты ток ячейки равен 3,07 мкА/см » при 40 рН 9,0 — 3, 14 мкА/см2, рН 9,25—

3, 17 мкА/см, то при рН 8,0. он равен

2,71 мкА/см, рН 7,0 — 0,78 мкА/см .

Таким образом, интервал рН 8,8 — 9,2 является оптимальным для действия 4 системы.

78 2 центрации введенной мочевой кислоты линейна до 6 мг Х.

П р и и е р 1. При концентрации в ячейке мочевой кислоты 1 мг Х (в 19„8 мл буфера вводится 0,2 мл

100 мг Х мочевой кислоты) величина стационарного тока равна 1,25 мкА/см . а при введении в буфер 0,2 мл исследуемого раствора (например, мочи)—

0,5 мкА/см . Высчитывается концентрация мочевой кислоты в ячейке.

1 мг Х вЂ” 1,25 мкА/см

Х = 0,4 мг Х

Концентрация мочевой кислоты в исследуемом растворе будет равна

0,4 мг Х х 100 (степень разбавления)= — 40 мг X.

Пример 2. Определение мочевой кислоты в сыворотке крови проводят с помощью стеклоуглеродного электрода, 0,0 В, при концентрации

К„(Ге(СИ) ) 1 мМ, 0,1 M боратный буфер, рН 9,2, п = 5. Степень раз-! бавления сыворотки 50 раз.

В табл. 1 дана зависимость величины тока от концентрации мочевой кислоты

347

Концентрация мочевой кислоты в исследуемых растворах определяется по данным калибровочного графика (см. чертеж), построенного на использовании известных концентраций мочевой кислоты, поскольку при нулевом потенциале остаточный ток электрода практически отсутствует (как в чистых». так и в сложных биологических растворах).

Из графика видно, что зависимость величины стационарного тока от кон. Как следует из табл. 1 зависимость величины тока от концентрации мочевой кислоты описывается корреляционной прямой i = (21,74+0,44)х +

+ (-0,22+4,12) с коэффициентом корреляции 0,9999. Следовательно, предложенный способ обладает высокой точностью — коэффициент вариации

1236378

Таблица 2

Известный способ

Предлагаемый способ

Объект исследо5 Вания

Не определено

Буферный раствор,7

2,5

S ° 100

Ч

1О

Моча, Ж

2,4

Сыворотка крови,Х

2,5

Цельная кровь, X

Не пригоден

2,9

vормула из обретения

Коэффициент вариации рассчитывают при n = 5 (см. табл. 2). Сопоставление полученных результатов с известными, которые приведены в табл.2, показывает, что точность определения мочевой кислоты предложенным способом почти в 2-4 раза превышает точность определения известным способом (соответственно величины коэффициентов вариации 2,4 и 47. или 2 ° 5 и 9X)

Кроме того, известный способ не пригоден для определения мочевой кис-. лоты в цельной крови.

Составитель Л. Шилина

Редактор С. Патрушева Техред Г,Гербер Корректор А. Обручар

Заказ 3084/47 Тираж 778 Подпис но е

ВНИИПИ Государственного. комитета СССР. по делам изобретений н открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие,r.Óèãîðîä,óë.Ïðîåêòíàÿ, 4 при пятикратном определении мочевой кислоты не превышает 2,5X..

Для определения положительного эффекта используют коэффициен г вариации, отражающий воспроизводимость и точность результатов: где V — коэффициент вариации, S — - среднее квадратическое отклонение; среднее, полученное при параллельном и-кратном измерении.

Чем меньше коэффициент вариации Ч, тем точнее метод определения.

Способ определения мочевой кислоты путем электролиза в щелочном растворе, содержащем исследуемое вещество, с помощью уриказной мембраны с .последукицим полярографическим измерением концентрации мочевой кислоты, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, 30 электролиз проводят в растворе ферроцианида калия в концентрации не менее 1 мМ, а в уриказную мембрану дополнительно вводят пероксидазу.