Способ определения антиокислительной активности веществ

Способ определения антиокислительной активности веществ

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биологической и медицинской химии. Цель изобретения - ускорение и упрощение способа за счет уменьшения числа операций. В кювете спектрофотометра в присутствии ионов Mg; производят непрерьшное измерение оптической плотности при ( 232 или 270 нм. Выделяют микросомальную фракцию печени и помещают ее в опытную кювету спектрофотометра, в которую добавляют FeSO , MgSOj , трис-HCl буфер, NaCl, НАДФН. Измеряют оптическую плотность при А 232 нм или / 270 нм против кюветы сравнения, содержащей, те же компоненты , что и опытная кювета, за исключением НАДФН. То же количество НАДФН, которое добавляли в опытную кювету, одновременно добавляют в кювету с дистиллированной водой. По снижению оптической плотности в присутствии испытуемого вещества .определяют его антиокислительную активность. 2 фиг. 1 табл. (Л 10 со о сд со ел

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

g p „ -, лцзр

)1,", Ц

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Ь

R4 ййГяМй

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3724524/ 28-14 (22). 10.04.84 (46) 23.06.86.Бюл. У 23 (71) Научно-исследовательский институт по биологическим испытаниям химических соединений (72) П.Г.Комаров, В.Е.Каган и М.В.Биленко (53) 616.07 (088.8) (56) Владимиров Ю,А., Арчаков. А.И.

Перекисное окисленйе ..липидов в биологических мембранах. — М.:

Наука, с.246.

Елуашвили И.А. и др. Влияние аминазина на ферментативное перекисное окисление липидов. — Бюл. экспер.бнол.мед, 1977, 9 9,,с.323-326. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИОКИСЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ВЕЩЕСТВ (57) Изобретение .относится к биологической и медицинской химии. Цель

„„SU„„1239595 А 1

J изобретения — ускорение и упрощение способа за счет уменьшения числа операций. В кювете спектрофотометра в присутствии ионов М производят непрерывное измерение оптической плотности при = 232 или

270 нм. Выделяют мнкросомальную фракцию печени и помещают ее в опытную кювету спектрофотометра, в которую добавляют РеЯО„, MgSO» трис-НС1 буфер, NaC1 НАДФН. Изме-. ряют оптическую плотность при 1 = — 232 нм или 3 = 270 нм против кюветы сравнения, содержащей те же компоненты, что и опытная кювета, sa исключением НАЦФН. То же количество

НАДФН, которое добавляли в опытную кювету, одновременно добавляют в кювету с дистиллированной водой.

По снижению оптической плотности в присутствии испытуемого вещества .определяют его антиокислительную активность, 2 фиг. 1 табл, 4 12

Изобретение относится к области медицины, а именно к биологической и медицинской химии, к способам определения антиокислительной активности различных фармакологических препаратов.

Целью изобретения является ускорение и упрощение способа за счет уменьшения числа операций.

Способ осуществляется следующим образом.

Исследование ведут в присутствии ионов Mg непосредственно в кювет+ те спектрофотометра путем непрерывного измерения оптической плотности при Л 232 или Л = 270 нм.

Выделяют фракцию мембран эндоплаэматического ретикулума (микросо-: мальную фракцию) печени: печень крысы перфузируют охлажденным раствором KCl (1,15X; 0-4 С), гомогенизируют в том же растворе в соотношении печень: раствор КС1 1:3 (по весу), центрифугируют гомогенат при

10000 g 30 мин, полученный супернатант центрифугируют при 105000 g

60 мин. В опытную кювету регистрирующего спектрофотометра объемом 2,5 мл, содержащую полученную микросомальную

"фракцию (0,1 мг/мл микросомального белка), FeSO (2-3 мкМ), MgS04 (5 мМ), Трис-НС! буфер (50 мМ; рН 7,4 при 25 С) и NaC1 100 мМ .добавляют НАДФН до конечной концентКонцентрация химического соединения, при которой наблюдается 50Х-ное ингибирование скорости липопереокислеиия, М

Аминазин

Динразин

Димедрол

2-Этил-6-метил-3-оксипиридин

5 10

1О 4

5 10э

6 10

Химическое соединение

Ионол (2,6-ди-трет-бутил4-металфенол) Предлагаемым способом исследованы и другие химические соединения: лекарственные средства, производные ,оксипиридина.

39595 2 рации 50 мкМ. Производят измерение оптической плотности при 1 = 232 или при A=- 270 нм. против кюветы сравнения, содержащей те же компоненты, что и опытная кювета, за исключением НАДФН. То же количество НАДФН, которое добавляли в опытную кювету, одновременно добавляют в кювету с дистиллированной водой, 1р стоящую "цугом" за кюветой сравнения.

Па снижению оптической плотности в присутствии испытуемого вещества определяют его антиокислительную активность.

Пример 1. На фиг. 1 показан график регистрации кинетики ферментативного НАДФН вЂ” зависимого перекисного окисления в микросомальной фракции печени предлагаемым способом, р(! где — оптическая плотность при = 232 нм; 2 — оптическая плот ность при ) = 270 нм; на .фиг.2 — то же, с помощью способа с тиобарбитуровой кислотой, где оптическая плот25 ность при A 535 нм (стрелками отмечен момент добавки НАДФН) .

Пример 2, Изучают влияние химических соединений, приведенных в таблице, на скорость ферментативного НАЛфН-зависимого перекисного окисления. липидов в микросомальной фракции печени с помощью предложенного способа. Формула изобретения

Способ определения антиокислительной активности веществ путем прове»

1239595

0,}

0 5 Ю 15

ВРемя восле начала реакции,мин

Фиг.f

0 $ ф 15

Время после начала реакции,мим

4©иг.2

Составитель Ч.Позняк

Редактор Л,Гратилло Техред H.ðîêêä о

КоРРектоР Е.Рошко

Заказ 3389/43 : Тираж 778

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам"изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, r.Óæãîðîä, ул.Проектная,4 з дения реакции перекисного окисления липидов в микросомах ткани и определения оптической плотности инкубационной смеси в присутствии и без добавления испытуемого вещества, отличающийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способг за счет уменьшения числа операций, реакцию перекисного окисления липи.дов проводят в присутствии ионов магния, измеряют оптическую плотность при 232 или 270 нм и по снижению оптической плотности в присутствии испытуемого вещества определяют его антиокислительную активность.