Способ определения активности цитохромоксидазы

Способ определения активности цитохромоксидазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биохимии , а именно к энзимологии. Цель изобретения - сокращение времени определения активности цитохромоксидазы..Определяют активиость сукцинатдегидрогеназы спектрофотометричеСкнм методом по степени восстановления цитохрома С за счет окисления сукцината. Затем рассчитьшают Y активиость цитохромоксидазы по формуле Y « Ч (h)x + f/h)x + 4,(h)x-t-4 (h), где Ч .(Ь)а - -ад-со8 , 1, 2, 3; X - экспериментально полученное значение активности сукцинатдегидрогеназы, ТГ - 3,1 А; h - величина атмосферного давления в мм рт. ст., а, а, а эмпирические коэффициенты функции Ч(Ь). 2 табл. П а, -h

СООЭ СОВЕТСКИХ

К . РЕСПУБЛИК

А1

091 (11) A@4 G 01 N 33/48 С 12 1 00

ВСРП % 1 . g

13,,, Ц.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМ,Ф С8ИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР г10 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPHTHA (21) 3668824/28-14 (22) 01.12.83 (46) 15.08.86. Бюл. У 30 (I1) Горьковский государственный медицинский институт им. С. М, Кирова (72) Е. М. Хватова, В. М. Галкин, А. Н. Мошкова и Т. С, Семенова (53) 577.158(088.8) (56) Hess Н., Pope А.I. Biol. Chem.

1953, ч. 204, В I, р. 295-306. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

ЦИТОХРОМОКСИДАЗЫ (57) Изобретение относится к биохимии, а именно к энзимологии. Цель изобретения - сокращение времени определения активности цитохромоксидазы..Определяют активность сукцинатдегидрогенаэы спектрофотометрическнм методом по степени восстановления цитохрома С за счет окисления сукцината. Затем рассчитывают Y активность 3 цитохромоксидаэы по формуле Y = f (h) x +

V (h) х + К,(h)х+ е,(h), П где М,(h) =а +а - сов

1

i=0 1, 2, 3; х — экспериментально полученное значение активности сукцинатдегидрогеназы, % — 3,14;

h — величина атмосферного давления в мм рт. ст., а,, а<, а — эмпирические коэффициенты функции Ч(Ь). 2 табл.

1250950 активность ЦХО; активность СДГ; величина атмосферного давления, мм рт. ст.; где Y х—

h— о а1 а — коэффициенты линии

2 сии q (h)=a,+a cos регресIT

h a„ Изобретение относится к биохимии, а именно к энзимологии, и может использоваться для определения активности цитохромоксидазы (ЦХО).

Цель изобретения — сокращение вре- 5 .мени определения.

Пример. Исследования проводят иа митохондриальной фракции головного мозга. Определяют активность сукцинатдегидрогеназы (СДГ), спектрофото 10 метрическим методом по степени восстановления цитохрома С за счет окисления сукцината. Для определения активности СДГ составляют инкубаци онную среду, которая содержит: 0,05 мг 15 белка митохондриальной суспензии;

0,1 мл 1,5 11 раствора сукцината натрия, 0,1 мл 0,15 М раствора KCN, 0,05 мл 8 10 M раствора СаСI,, 0,05 мл 8 10 М раствора АIСI ; 20

2,5 мл 1 10 M раствора цитохрома С.

Изменение оптической плотности при восстановлении цитохрома С регистрируют на СФ-4а в течение 3 мин.

Активность фермента выражают в мкмолях цитохрома С на 1 мг белка в мин, Следующим этапом в работе является определение коэфффициентов а„ о,, с по специально составленным табл. 1и 2. Соответствующие значения коэффициентов а.,о „, и величину атмосферного давления (мм рт. ст.), при котором проходил эксперимент, подставляют в формулу (1) для отыскания,(h), М „(h), Р,(h) 35

Ч,(h)

V (h(=a +а cos -- — --. (1.) о а h

Затем определенное в эксперименте значение активности СДГ и найденные значения j(h) (i=0,1,2,3) подставля ют в формулу (2) по которой производят расчет активности ЦХО с(h)x + v (h)x + Y (h)x + 3(h), (2) Рассчитанная аналитически активность ЦХО выражается в микромолях цитохрома С на 1 мг белка за I мин соотнесенно к h.

Формула изобретения

Способ определения активности цитохромоксидазы путем инкубации ткани в реакционной смеси, содержащей цитохром С, и последующего спектрофотометрирования, о т л и— ч а ю шийся тем, что, с целью сокращения времени определения, измеряют активность сукцинатдегидрогеназы в ткани, а активность цитохромоксидазы рассчитывают по формуле у= е (h)x+ v (h)x + v (h)x+q (h), П где 1 (h)=a à cos; — -- (i=O I

1 У О h а У э

2,3); ак тив но с ть цитохромоксидазы цитохрома С на l мг белка в

1 мин, мкмоль; экспериментально полученное значение активности сукцинатдегидрогеназы цитохрома С на 1 мг белка в 1 мин, мкмоль; величина атмосферного давления, мм. рт. ст., 45 а Äa,, о а, — эмпирические коэффициенты функции V (h).

Например, в условиях гипотермии (t=20 С) в сочетания с гипоксией (разрежение атмосферы до 310 мм рт. ст.) находим значения функций (h), y (h), г (h), q (h) по формуле П

Ч (Ь)=а +а -cos

2 о h a

1 где а,, а,, д, берут соответственно из табл. 1 . Значение активности (х)

СДГ при этом составляет 25,8 мкмоль цитохрома С на 1 мг белка в 1 мии, расчетное значение активности(у)ПХО, цитохрома С на 1 мг белка в 1 мин—

72,463668 мкмоль. Зкспериментально установленная активность ЦХО составляет 71 9+5,5. Ошибка формулы 0,787, 1250950

Таблица 1

g (h) Значение коэффициентов функций

y (h) (i=O,1,2,3) при t=20 С (а, <, (h) -0,00004 0,019375 -0,00313

,(h) -0,001399 0,019375 0,28062

Ч (h) 0,081155 0,019375

-5,38519

-0,55573 0,019375 78,431198

Таблица 2

Значение коэффициентов функций

y. (h) (i=O,1,2,3) при t=37 С а„

Q2 а. Ч,(h) Составитель Н. Гуляева

ТехРед И.Гайдош

Корректор Е. Рошко

Редактор М. Келемещ

Тираж 778

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 4403/39

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

-0,.0091

-0,22640

-3,54401

-17,18663

0,00060 0,00752

0,00060 -0,68357

0,00060 4,03097

0,00060 -26,11705