Способ получения плазмина
Патент 1252338
Авторы
Способ получения плазмина
Иллюстрации
Реферат
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИК ()9) (!1) А1
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АBTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
2 10 -10, 10- г «4. 10
10 -9.10
4 10 — 4 10 (56) Патент США Ф 3136703, кл. 195-66, 1964.
4 10 -4 10
С2
Щ
2 10 — 4!О
? l0 — 4 10 2
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3751598/28-14 (22) 01.06.84 (46) 23.08.86.Вюл. Р 31 (71) Белорусский ордена Трудового
Красного Знамени научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии (72) В.Н.Никандров, В.И.Вотяков и Ю.М. Судник (53) 615.45:577.152.344 (088.8) (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЛАЗ1(ИНА путем приготовления раствора плаэминогена, полученного с помощью афинной хроматографии, введения в него активаторов и инкубации при нагревании смеси, отличающийся (51) 4 С 12 и 9/68// С 12 и 9/72 тем, что, с целью повышения чистоты целевого продукта и упрощения способа, в качестве активатора используют следующий состав, моль.
>,)1, )1, Й -Тетраметилэтилендиамин
Рибофлавин либо
Железо эакисное сернокислое
Рибофлавин
Никотинамидадениндинуклеотид восстановленный либо
Феназинметосульфат
Никотинамидадениндинуклеотид восстановленный
1252338 понентов, моль:
Железо закисное
10 -9 10
4 10 — 4 10
2 10 — 4 10
2 10 — 10
10 — 4 10 диамин
Рибофлавин
3 4 5
2 ° 10
2 3 4
Железо закисное серИзобретение .относится к медицине, а именно к прикладной биохимии, и может быть использовано для поиска ингибиторов фибринолиза, определения гемостаэиологических показателей °
Цель изобретения — повышение чистоты целевого продукта и упрощение способа путем введения в растворы плазминогена систем генерации кислородных радикалов и исключения дефицитного белкового активатора плазминогена — стрептокиназы.
Способ осуществляют следующим образом.
Готовят растворы плазминогена, вводят в них активаторы, образующие систему генерации кислородных радикалов и представляющие донор электронов и компонент с оксидазной функцией, при этом в качестве донора электронов используют N, Ч, N, N -тетраметилэтилендиамин, а в качестве компонента с оксидаэной функцией — рибофлавин при следующем созтношении компоненте в, моль:
1 I
N N, Н, Н -тетраметилэтилени проводят инкубацию плазминогена и системы генерации кислородных рао дикалов при 15-37 С в течение 10
30 мин.
М,Н, N, N -Тетраметилэтилендиамин
Рибофлавин
Затем образец 1 инкубируют при
12 С в течение 5 мин, образец 2 о о при 15 С 10 мин, образец 3 — при
25ОС 20 мин, образец 4 — при 37 С
30 мин, образец 5 при 40 С 35 мин, После окончания инкубации по 0,03 мл каждого образца наносят на фибриновую пластину для определения прироста фибринолитической активности плаэмина.
Результаты исследований сведены в табл.1.
Как видно из табл.1, введение в растворы плаэминогена системы генерации кислородных ра-чкалов увеличивает активность плазмина в образцах 2—
5 в сравнении с образцом 1 на 380, 435, 380 и ЗЗОХ соответственно. При этом увеличение содержания компоненКроме того, в качестве системы генерации кислородных радикалов могут быть использованы железо закисное сернокислое, рибофлавин и нико5 тинамидадениндинуклеотид восстановленный при следующем соотношении комсернокислое
1 ибофлавин
Никотинамидадениндинуклеотид восстановленный 4 10 — 4 10 или феназинметосульфат иникотинамидадениндинуклеотид восстановленный при следующем соотношении компоненТоВ ИОль
1 -5
Феназинметосульфат 2 10 10
Никотинамидадениндинуклеотид восстановленный
Пример 1. Готовятся пять одинаковых образцов плазминогена. В образец 1 систему генерации кислородных радикалов не вводят. В образцы
3О 2-5 вводят систему генерации кислородных радикалов, представляющую N
N, Н, N -тетраметилэтилендиамин и рибофлавин при следующем соотношении компонентов, моль:
6 10 10 2 10
7 10 4 10 8 ° 10
I тов системы генерации кислородных ра40 дикалов в образце 5 по сравнению с образцом 4, а также увеличение температуры и времени не приводит к дальнейшему возрастанию активности плаэмина.
Пример 2, Готовят пять одинаковых образцов плазминогена. В образец 1 систему генерации кислородных радикалов не вводят. В образцы
2 — 5 вводят систему генерации кислородных радикалов, представляющую железо эакисное сернокислое, рибофлавин и никотинамидадениндинуклеотид восстановленный при следующем соотношении компонентов, моль:
1252338 4
-а -э -2 щую феназинметосульфат и никотинамид5 IO 9 10 5.10,адениндннуклеотид i сстановленный при следующем соотношении компонен4 10 4 ° 10 IO тов, моль: нокис10 лое
Рибофла4 IO" вин
Нико3 4 5
Фенаэинтинамидадениндинуклеотид восметосульфат
Никотин2 ° IO 3 ° IO 4 10 10
10 становленный амидаде4 10 9 10 4 10 10 ниндинуклеотид восстановленный
2 10 3 ° 10 4 10 10
Таблица ) Параметры
Образец
1 / 2
Концентрация, моль: й, И, и, N òåòðàметиленэтилен0 - 2 ° 10 6 IO 10
2 10
8 10 диамин
7 "10 4 10 рибофлавнн о
Температура, С
25 37
12
20
10
Время инкубацин, мин
Фибрииолитическая активность, усл. ед. 18,5 90,0
80,0
99,0 90,0
Дальнейшую обработку проводят аналогично примеру 1. Результаты исследований сведены в табл.2.
Из табл.2 видно, что введение в !
5 растворы плаэминогена системы генерации кислородных радикалов увеличивает активность плазмина в образцах
2-5 в сравнении с образцом ) на 25, 64, 64 и 41Х соответственно. При этом увеличение содержания компонентов системы генерации кислородных радикалов в образце 5 в сравнении с образцом 4, а также увеличение температу25 ры и времени не приводит к дальнейшему возрастанию активности плаэмина.
Пример 3. Готовят пять одинаковьм образцов плазминогена.
В образец 1 систему генерации кислородных радикалов не вводят. В об- 30 разцы 2-5 вводят систему генерации кислородных радикалов, представляюДальнейшую обработку проводят аналогично примеру 1. Результаты исследований сведены в табл.3.
Как видно иэ табл.З, введение в растворы плазминогена системы генерации кислородных радикалов увеличивает активность плазмина в образцах
2-5 в сравнении с образцом на 18, 77, 59 и 18Х соответственно. Прн этом увеличение содержания компонентов системы генерации кислородных радикалов в образце 5 по сравнению с образцом 4, а также увеличение температуры и времени не приводит к дальнейшему возрастанию активности плазмина.
1252338
Т а б л и ц а 2
Образец
Параметры
4 5
5 10
9 10 5 - 10
10-
4 10 4 10 4 10 10 рибофлавин никотинамид4 10 9 ° 10 4 ° 10 10
l5
20
5 о
Фибринолитическая активность, усл.ед.
58,4 50,0
35,4
43,9 58,4
Таблица 3
Образец
Пар аме тры
О 2 ° 10 3 10 4 10 10
О 2 10 3 10 4 10 10
Температура, С
13 15
37
Время инкубации, мин 5
20
35
Фибринолитическая активность, усл.ед.
39
35
Составитель М.Позняк
Техред Л. Сердюкова
Редактор А.Шишкина
Корректор Т. Колб
Заказ 4588/27 Тираж 490
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5
Подписное
Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4
Концентрация, моль: железо закисное сернокислое адениндинуклеотид восстановленный о
Температура, С
Время инкубации,мин
Концентрация, моль: феназинметосульфат никотинамидадениндинуклеотид восстановленный! 3 t 4
37 40
30 35