Способ определения хлоксила в биологических объектах

Способ определения хлоксила в биологических объектах

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к способам определения хлоксила в биологических объектах. Цель изобретения повышение чувствительности способа. Хомякам вводят хлоксил. Содержание препарата определяют в крови многократно . Производят экстрагирование н-гексаном. В системе, содержащей н-гексан очистку проводят хроматографическим разделением на silufol UV-254. Хроматограмму высушивают 1-2 мин при ЮО с. Положение пятен на хроматограмме определяют при облучении ультрафиолетовым светом. Затем проводят элюцию хлоксила смесЫо вода - 10%-ный раствор н-бутанола в гексане при соотношении 1:4. Верхний слой элюата подвергают спектрофотометрии. Расчет содержания препарата проводят по калибровочному гра фику. Табл. 2.

СОЮЗ СОНЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1,.SU 1254 (51)4 G 01 N 33/15 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ к A ч р

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTWI

Н А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3824765/28- 14 (22) 17. 12.84 (46) 30.08.86. Бюл. № 32 (71) Ордена Трудового Красного Знамени институт медицинской паразитологии и тропической медицины им. Е.И. Марциновского (72) И.Е. Шумакович, Б.В. Лопатин, А.С. Найденова и Д.Г. Баяндина (53) 615 ° 7 (088. 8) (56) Медицинская паразитология и паразитарные болезни. М., 1968, т. 37, № 5, с. 549-554. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХЛОКСИЛА

В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ (57) Изобретение относится к способам определения хлоксила в биологических объектах. Цель изобретения— повышение чувствительности способа.

Хомякам вводят хлоксил. Содержание препарата определяют в крови многократно. Производят экстрагирование н-reKccLHOM. В системе, содержащей н-гексан, очистку проводят хроматографическим разделением на silufol

UV-254. Хроматограмму высушивают

1-2 мин при 100 С. Положение пятен на хроматограмме определяют при облучении ультрафиолетовым светом. 3a" тем проводят элюцию хлоксила смесь1о вода — 107-ный раствор н-бутанола в гексане при соотношении 1:4. Верхний слой .элюата подвергают спектрофотометрии. Расчет содержания препа g

O рата проводят по калибровочному гра . фику. Табл. 2.

I Ф 12543

Изобретение относится к медицине, в частности к способам определения антигельминтика хлоксила в биологи25 ч е ск их тк анях и жидк остях.

Цель изобретения — повышение

5 чувствительности способа за счет использования в качестве растворителя н-гексана, проведения хроматографического разделения на silufol

UV-254 и элюции хлоксила смесью во- 10 да/10%-ный раствор н-бутанола в гексане при определенном соотношении компонентов.

Пример 1.

Хомякам вводят хлоксил или его 15 лекарственную форму перорально в

2%-ном крахмальном клейстере в дозе

0,5 r/êã. Содержание препарата определяют в крови через 1, 2, 4, б, 8, 24 и 48 ч после его введения. Опре- 20 деление проводят не менее чем трех кратно.

1-2 мл крови (точный объем) собирают во флаконы с притертой пробкой, добавляют 0,1 мл 15%-ного раствора лимоннокислого натрия и экстрагируют н-гексаном в соотношении 1:5 в течение 1 мин. Экстракты собирают пипеткой в круглодонные колбы вместимостью 50 мл и выпаривают досуха 30 на роторном испарителе. Остаток смывают с колбы сначала 0,2 мл ацетона, а затем повторно 0,1 мл ацетона.

Полученные растворы постепенно наносят на хроматографическую пластинку в виде одной линии длиной около

1-2 см. Пластинку помещают в камеру, содержащую н-гексан, и хроматографируют восходящим способом„ Когда фронт растворителя пройдет не менее

3/4 пластинки, ее вынимают и сушат на воздухе 10 мин и помещают в сушильный шкаф при 100 С на 1 мин.

Положение пятен на хроматограмме определяют при облучении УФ-светом с 45 длиной волны около 250 нм по тушению флуоресценции пластинки (Rf хлоксила около 0,75). Пятна смачивают с помощью капилляра 50%-ным раствором этанола и аКкуратно соскабливают с пластинки, помещая в пробирку с притертой пробкой вместимостью 10 мл..

Затем добавляют 1 мл дистиллированной. воды и 4 мл 10%-ного раствора н-бутанола в н-гексане. Экстрагируют

81 2 однократно в течение 3 мин. Верхний слой гексана .отделяют после отстаивания в течение 2-3 мин и спектрофотометрируют при длине волны

238+2 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм, относительно

10%-ного раствора н-бутанола в и-гексане предварительно насыщенного водой. Расчет содержания препарата проводят по калибровочному графику.

С целью доказательства полноты экстрагируемости хлоксила из биологического объекта при введении его хомякам перорально, в виде взвеси в крахмальном клейстере, в дозе

0,5 r/êã, проводили его повторную экстракцию н-гексаном. В табл. 1 пр ведены данные, полученные при определении хлоксила через 4 ч после его введения. Предел обнаружения пятен хлоксила на хроматограмме

1 мкг. Чувствительность обнаружения хлоксила в пробе 2,5 мкг по способу прототипу — 15 мкг).

Выбор оптимальных условий обнаружения пятен хлоксила на хроматоррамме показан в табл. 2.

Из данных, приведенных в табл. 2, ! видно, что оптимальные условия детекции хлоксила достигаются при нагревании пластинки 1-2 мин при

100 С.

Формула и з обретения

Способ определения хлоксила в биологических объектах путем экстракции органическим растворителем, очистки экстракта с последующей спектрофотометрией, о т л и ч а юшийся .тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве экстрагента используют н-гексан, очистку проводят хроматографическим разделением на silufol UV-254 в системе, содержащей н-гексан, после чего хроматограмму высушивают

1-2 мин при 100"С, выявляют зону расположения хлоксила с последующими элюцией хлоксила смесью вода—

10%-ный раствор н-бутанола в гексане при соотношении 1:4.и спектрофо; тометрией верхнего слоя элюата.

1254381

Таблица 1

Навеска

Объект

5,5

Не обнаружено

1,8

Хровь

1000

Печень

64,5

620

Почки

10

10

1-2

100

1-2

200

400

Брыжейка

Стенка тонкого кишечника 1000,200

200

Стенка желудка

1-2

15

800

Следы

500

Легкое

Таблица2

Чувствительност обнаружения мкг

Без термической обработки

100

0,5

100

100

0,900

0,550

0,008

100

0,620

0,600

2,5

80

1,00

120

0,850

120

Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Заказ 4714/48

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 мг или объем, мл

Сердце 310

Селезенка 150

Поджелудочная 150 о

Время, мин Температура, С

Содержание хлоксила, мкг

Содержание хлоксила, мкг/г или мкг/мл

Повторная экстракция, мкг

Оптическая плотность элюата при нанесении

100 мкг хлоксила

0,720

0,800

0,920

0,950

Не поглощает