Способ получения 5-фосфорибозилпирофосфат-синтазы

Способ получения 5-фосфорибозилпирофосфат-синтазы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 С 12 N 9/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К A BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3847892/30-13 (22) 28.01.85 (46) 07.09.86, Бюл. 11 33 (71) Белорусский ордена Трудового

Красного Знамени государственный университет им. В. И. Ленина (72) И, Н. Олехнович, Н. П. Максимова и Ю. К, Фомичев (53) 577.15.07(088.8) (56)ISwitzer R, L..,,— J. Biol. Chem., 1969, v. 244, 2854.

Methods in Enzymo)ogy, 1963, ч. VI 158, „„SU„„1255639 А 1 (54) (57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ 5-ФОСФОРИБОЗИЛПИРОФОСФАТ-СИНТАЗЫ, предусматривающий экстракцию фермента из печени животных с последующим выделением его иэ экстракта, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью упрощения и ускорения процесса, экстракцию проводят иэ гомогената сырой печени натрий-фосфатным буфером при рН 7-8, а фермент выделяют из экстракта путем прогревания при 50о

60 С в течение 3-7 мин, фракционирования сульфатом аммония, взятым в количестве 180-240 г/л, и подкисления ферментосодержащего раствора ук- а сусной кислотой до рН 4-5.

Предлагаемый способ получения

ФРПФ"синтазы из печени животных устраняет необходимость получения ацетонового порошка Лри этом значительно снижается трудоемкость процесса, сокращается число стадий, исключается необходимость использовать горючие и взрывоопасные вещества (ацетон), исключается необходимость проводить процесс при низких температурах (-10 С), кроме того, продолжительность процесса сокращается с 7,5 до 3,5 ч, Составитель О. Скородумова

Техред JI,Îëeéíêê Корректор И, Эрдейи

Редактор Н. Гунько

Заказ 4787/29 Тираж 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035,Москва., Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно"полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

1 12556

Изобретение относится к ферментной промьппленности, а именно к способу получения 5-фосфорибозилпирофосфат-синтазы (ФРПФ-синтазы), и может быть использовано при производстве ФРПФ-синтаэы и 5-фосфорибозилпирофосфата (ФРПФ), Целью изобретения является упрощение и ускорение способа получения

ФРПФ-синтазы. 1О

Способ заключается в том, что в результате исключения ряда операций фермент вьделяют из экстракта, приготовленного из сырой печени путем гомогениэирования ее в натрий-фос- 15 фатном буфере, с последующим прогреванием экстракта и поэтапным фракционированием сульфатом аммония и уксусной кислотой. Все операции по получению ФРПФ-синтазы проводят при 20

1-4 С.

Пример. 250 r свиной печени гомогенизируют в 500 мл 0,1 M натрий-фосфатного буфера (рН 7,4) с

3 мМ восстановленного глутатиона 25 (буфер А) при 1-4 С, Гомогенат центрифугируют 20 мин при 23000 g. Надосадочную жидкость (экстракт печени) помещают в колбу и прогревают при

55 С в течение 5 ьян, после чего Зп раствор быстро охлаждают до 4 С и снова центрифугируют 15 мин при

7000 g, Все последующие операции

39 з проводят при 4 С. К полученной надосадочной жидкости добавляют сульфат аммония (из расчета 209 г/л), выпавший осадок отделяют центрифугированием (15 мин при 7000 g) и растворяют в 100 мл буфера А. Смесь центрифугируют еще раз при 7000 в течение 15 мин, собирают надосадочную жидкость и устанавливают рН 4,6 путем добавления по каплям

1 М уксусной кислоты. Смесь центрифугируют 10 мин при 23000 g осадок собирают и растворяют в 100 мл буфера А, затем устанавливают рН 7,4.

Полученный раствор ФРПФ-синтазы имеет активность 5000 мЕ (1 мЕ = 1 нМ

ФРПФ/мин). Продолжительность процесса вьделения 3,5 ч. Хранят раствор ФРПФ-синтаэы при -10 C. о