Способ диагностики коклюшной инфекции

Способ диагностики коклюшной инфекции

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к способам серологической диагностики инфекционных заболеваний. Цель изобретения - повьшение специфичности способа. Очи- Тценный препарат белковой коклюшной ф ракции сорбируют на полистироловом планшете при рН 7,2-7,4 в 0,1-М трис-соляно-кислом буфере. Дезинтеграты коклюшного и паракоклюшного мик- -роба липополисахарид коклюша сорбируют в 0,1 М карбонат-бикарбонатном буферном растворе при рН 9,6-9,8. При наличии в исследуемой сыворотке титра антител к липополисахариду 1:1600 и вьше, а к белковой фракции коклюшных; микробов и дезинтеграту паракоклюшных микробов ниже, чем к-,липополисахариду , диагностируют коклюшную инфекцию . § (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (51) 4 С 01 М 33/53

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМЪ(СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (?1) 3682696/28-14 (22) 10. 11. 83 (46) 07. 09. 86. Бюл. ¹ 33 (71) Центральный научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им.И.И.Мечникова (72) Н.В.Цветкова, Ю.В.Борисенко, Л.И.Ванеева, Т.С.Селезнева, И.Г.Бажанова и Н.Ф.Янкина (53) 615.373(088.8) (56) Viijamen M.Ê. Ruuskanen О., GranIorg С. and Safuu Т.Т. Sегоlogical diagnosis of Pertussis ЛдМ, JgA, Jgb antibodies against Borde е11а pertussis measured by Enzymefinked Immunosorbent assay. -(E1.isa)

Scandi I. Infection Des. 1982, р. 14, 117-122. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ КОКЛЮШНОЙ ..ИНФЕКЦИИ (57) Изобретение относится к способам серологической диагностики инфекционных заболеваний. Цель изобретения повьппение специфичности способа. Очи щенный препарат белковой коклюшной фракции сорбируют на полистироловом планшете при рН 7,2-7,4 в 0,1- M трис-соляно-кислом буфере. Дезинтег:; раты коклюшного и паракоклюшного микроба липополисахарид коклюша сорбируют в 0,1 М карбонат-бикарбонатном буферном растворе при рН 9,6-9,8. При наличии в исследуемой сыворотке титра g антител к липополисахариду 1:1600 и вьппе, а к белковой фракции коклюшных, / микробов и дезинтеграту паракоклюшных микробов ниже, чем к;липополисаха- С риду, диагностируют коклюшную инфекцию.

1255929

Изобретение относится к медицине, в частности к способам серологической диагностики инфекционных заболеваний.

Цель изобретения — повышение специфичности иммуноферментного коклюш- 5 ного теста для диагностики заболевания.

Способ осуществляют следующим образом.

Очищенный препарат белковой коклюшной фракции коклюша сорбируется на полистироловом планшете в дозе

8-10 мкг при рН 7,2-7,4 в 0,1 М трис-соляно-кислом буфере, а дезинтеграты коклюшного и паракоклюшного микроба и липополисахарид коклюша в дозе 10-15 мгк при рН 9,6-9,8 в 0,1 M карбонат — бикарбонатном буфере. При этом на одном планшете в стандартных условиях получают ответ (учет визуаль-20 яый и инструментальный) о наличии ан.тител ко всем используемым антигенам, который позволяет судить о наличии инфекционного заболевания.

При исследовании антительного от- 25 вета у иммунизированных детей, переболевших и больных, установлено, что характер иммунного ответа различен. У привитых детей сохраняются титры антител к протективной белковой фракции, а у больных и недавно переболевших основные антитела образуются к липополисахариду. На этом и основывается диагностика коклюша с помощью ИФА.

Пример. Микробную массу

В.pertussis штамм 305 (100 мл

1000 млрд суспензии) дезинтегрируют

10 мин с микробусами в баллистичес- ком гомогениэаторе (Л-17), очищают от нераэбившихся клеток центрифугированием при 15000 об/мин в течение

30 мин.

Дезинтеграт содержит 64„37. белка„

7,1Х углеводов и 10,657 нуклеиновых кислот, ЕД = 7,6(?,23 + 12,97) мкг белка.

Получение белковой протективной фракции коклюшных микробов проводят по известному способу.

В качестве носителя используют планшеты для иммунологических реакций. Затем получают белковую протективную фракцию коклюшных микробов, липосахариды. конюгат известными способами. Сенсибилиэацию планшетов проводят следующим образом, нанося вертикально в 1 и 5 ряды деэинтегра1 коклюшных микробов, в 2 и 6 ряды— деэинтеграт паракоклюшных микробов, в 3 и 7 ряды — белковую коклюшную фракцию, в 4 и 8 ряды — липополисахарид коклюша, в 9 ряд (контрольный) — бычий сывороточный альбумин, в 10 ряд (контрольный) — раствор желатина, в 11 и 12 ряды (контрольный) — деэи Гтеграт коклюшного микроба.

В 1-10 рядах раститровывают сыворотки обследуемых. B 11 ряду заведомо положительный контроль (сыворот- ка от больного с бактериологическим подтверждением, проверенная другими серологическими методами). В 12-м ряду раститровывают сыворотку здоровых доноров.

Антигены сорбируют при следующих условиях.

Дезинтеграт коклюшный и паракоклюшных бактерий и липополисахарид используют в дозе 10-15 мкг/мл в

0,1 M карбонат-бикарбонатном буфере рН 9,6 при 37 — 38 С 2-4 ч, а белковую фракцию коклюша — в дозе 8-10 мкr/мл в 0,1 М трис-соляно-кислом буфере рН 7,2-7,4 ?-4 ч при 38-37 С.

Исходное разведение сыворотки обследуемых 1:200, шаг разведения двукратный.

Постановка ИФА осуществляется известным способом (EL)SA. Учет реак— ции ведется визуально или .инструментально при длине 449 нм. Реакция считается положительной, если разница между контролем и опытным образцом равна или более 0,1. При визуальном учете положительной реакции считается, та, которая по окраске отличается от контроля на два разведения (лунки).

Диагностический титр ИФА при заболевании коклюшем 1:1600 при реакции на ЛПС. У больных людей титр к ЛПС

1:1600 и выше при более низком или равном титре к белковому компоненту.

У привитых детей наблюдают высокие титры к белковой фракции и снижение к липополисахариду. При заболевании паракоклюшем титр антител к дезинтеграту паракоклюша вьппе не менее, чем на три разведения, чем к коклюшному дезинтеграту и его компонентам.

При массовом обследовании возможно использовать всего 2-3 разведения

5929 4

Формула изобретения

125

Составитель Н. Кузенкова

Техред Л. Сердюкова Корректор М. Демчик редактор Н. Рогулич

Заказ 4816/44

Тираж 778

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная. 4

3 сыворотки, начиная с титра 1:1600

Все значения реакции с JIIIC коклюша выше 1:1600 при более низких или равных титрах к белковой фракции коклюша и его дезинтеграту свидетельствуют о .наличии коклюшной инфекции.

Тест рекомендован для диагностики коклюша и оценки поствакцинального иммунитета. 10

Предлагаемый способ позволяет с помощью ИФА-коклюша (теста) различать привитых детей от больных и переболевших, отдифференцировать коклюш 15 от паракоклюша, ставить диагноз даже при слабом антительном ответе (по разнице титров к ЛПС и белку) пациента, а также для выявления стертых форм заболевания, носительства. Кроме 20 того, тест подтверждает наличие заболевания в 95 случаев (при подтверждении бактериологическом) и 80-85K при клиническом диагнозе (больные с подозрением на коклюш без бактери- 25 ологического подтверждения).

Способ диагностики коклюшной инфекции путем иммобилизации на планшете дезинтегратора коклюшных микробов сыворотки больного, кроличьих антител к гамма-глобулину человека, меченных пероксидазой хрена, с последующей оценкой реакции по интенсивности окраски, субстратной смеси, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности способа, в качестве антигенов дополнительно используют липополисахарид коклюшных микробов, дезинтеграт паракоклюшных микробов в 0,1 М карбонат-бикарбонатном буферном растворе рН 9,6-9,8 и белковую фрак" цию коклюшных микробов в 0,1 М триссоляно-кислом буферном растворе, и при наличии в исследуемой сыворотке титра антител к липополисахариду

1:1600 и выше, а к белковой фракции коклюшных микробов и дезинтеграту паракоклюшных микробов ниже, чем к липополисахариду, диагностируют коклюшную инфекцию.