Способ получения антирабического иммуноглобулина человека

Способ получения антирабического иммуноглобулина человека

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СО0ИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (19) (И) С51) 4 A 61 К 39/205 фе :

/ 7

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ, Н A STOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3555253/28-14

{ 22) 21.02. 83 (46) 23,09.86, Бюл. Ф 35 (71) Киевский научно-исследовательский институт эпидемиологии и инфекционных болезней им. Л. В, Громашевского и Киевский научно-исследовательский институт гематологии н переливания крови (72) 10. Н. Щербак, М. А. Селимов, 3, Н, Бабий, М. Н. Мельник, Л. А, Антонова, И. И. Кучер, Е. А. Федоровская, В. Н. Куненко, О, И, Моргунов, .

Л. Г, Болтуций, Л, Б, Эльберт и Т,. А. Аксенова (53) 615.373(088 ° 8) (6) Горшунова Л. П. и др, Лабораторный регламент получения антирабичЕского иммуноглобулина человека, 1969. (54) (57) 1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИРАБИЧЕСКОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА путем внутримышечного введения антирабической вакцины и выделения иммуноглобулина из плазмы крови, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности целевого продукта, вакцину вводят донорам 2-3 раза по 1-1,5 мл с интервалом 30-90 дней.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что используют концентрированную культуральную .антирабическую вакцину из штамма Вну ково-32-107", 1258417

10 !

Изобретение относится к медицине а именно к производству лекарственных препаратов, для лечения людей, подвергшихся заражению бешенством, Цель изобретения — повышение специфичности целевого продукта, Способ осуществляется следующим образом.

Для получения антирабического иммуноглобулина был подобран контингент доноров в соответствии с инструкцией о медицинском освидетельствовании, учете и порядке получения крови.

Доноры-добровольцы в количестве

18 человек мужского пола в возрасте 24-28 лет были провакцинированы концентрированной культуральной антирабической вакциной из штамма

"Внуково-32-107", изготовленной в институте полиомиелита и вирусных энцефалитов AMH СССР, которая представляет собой препарат, концентрированный по объему до 30 раэ и очищенный в среднем в 6 раэ по сравнению с другими антирабическими вакцинами, применяемыми в настоящее время в практике здравоохранения, Вакцину вводят с соблюдением всех правил асептики в верхненаружный квадрант ягодицы.

B 1-й, 30-й и 90-й день всем донорам вводят по 1,5 мл вакцины. Определение уровня вируснейтрализующих антител в сыворотке крови добровольцев проводят с ийтервалом в 2 недели в течение 4-5 мес.

Эти исследования показали, что наилучшая выработка вируснейтрализующих антител (ВНАТ) отмечается на

40-60 дни после первой вакпинации, когда титры ВНАТ повышаются до уровня 1:1000 и более. Одна бустер-инъекция (1 мл КОКАВ), проведенная 8 донорам на 120 день от начала иммунизации вызвала повторный подъем ВНАТ до 1000-1280. В табл, 1 дано содержание вируснейтрализующих антител в сыворотке крови доноров, иммунизированных антирабической вакциной (КОКАВ) .

В процессе иммунизации доноры находились под систематическим клинико-морфологическим, биохимическим и иммунологическим контролем, Местной и общей реакции на введение КОКАВ не отмечено ни у одного донора.

Кровь у доноров беоут с 30-го дня от начала иммунизации 1 .раз в 2 недели; через каждые 10 плаэмоферезов назначался перерыв в кроведачах на

1 мес. Всего осуществлено 10-15 плазмоферезов.

Вся иммуная плазма, полученная от доноров методом плазмофереза в течение 5-6 мес,, по мере поступления эамораживалась и хранилась в низкотемпературных камерах, Перед фракционированием весь исходный материал в зависимости от высоты титров специфических антител был разделен на 2 группы . плазма с высоким содержанием антител в титре свыше 1:400; плазма со средним содержанием антител в титре от 1:100 до 1:400.

В каждой иэ групп плазма была слита и в этой сводной плазме вновь определен титр антирабических антител. Из этого сырья на холоду спиртовым методом получено две серии антирабического иммуноглобулина.

В табл. 2 дано содержание вируснейтрализующих антител в сводной плазме и иммуноглобулине.

В готовом препарате определяют: физические свойства, стерильность, безвредность, апирогенность, стабильность и белок.

В табл, 3 дан аналитический паспорт на антирабический человеческий иммуноглобулин.

Проводят испытание реактогенности полученного иммуноглобулина на 23 добровольцах (мужчины и женщины в возрасте 20-45 лет, не имеющие никаких противопоказаний к введению человеческого иммуноглобулина).

Реактогенность иммуноглобулина оценивают по характеру и числу общих (повышение температуры тела, головные боли, головокружение, тошнота, повышение кровяного давления, высыпания на коже и слизистых, и прочие жалобы) и местных (эритемы, инфильтраты, их диаметр, продолжительность, боли на месте введения препарата) реакции у лиц, получивших иммуноглобулин с регистрацией их в дневнике наблюдений, Учет реакций среды иммунизированных начинали через 30 мин после введения испытуемого иммуноглобилина, а также через 1, 2, 3, 4 ч, а затем ежедневно на протяженйи 12 дней.

1258417

Таблица 1

Уровень вируснейтрализующих антител в титрах

Группа доноров после второй иммунизации через, нед.

2 4 14 до иммунизации

1% (10 человек) 200-2500 200-2000

11 (8 человек) 200-2300 200-2000 300-1000 650-1280

+ введена вакцина на 1-й и 30 день по 1,5 мл, 1 " введена вакцина на 1-й, 30 день по 1,5 мл и на 90 день — 1 мл.

В результате проведенных исследований установлено, что полученный антирабический человеческий иммуноглобулин серия 50/440 МЕ и серия

51/1497 МЕ не обладает реактогенными свойствами.

Иммуноглобулин антирабический человеческий предназначен для антирабического лечения лиц, получивших тяжелые и средней тяжести укусы, нанесенные бешенными животными, Доза препарата 100 МЕ на 1 кг веса человека (взрослого старше 1 лет) при укусах средней тяжести и 200 ME npu тяжелых укусах, Например, при содержании 1000 ME в 1 мл иммуноглобулина человеческого антирабического человеку весом

60 кг необходимо ввести 6 мл препат рата (из расчета 100 ME íà 1 кг веса тела).

Препарат вводят внутримьппечно один раз за сутки до начала курса вакцинации.

Пример 1, Донорам †добровольцам внутримышечно вводят концентрированную антирабическую вакцину по 1,5 мл двухкратно с интервалом 30 дней. Получена сыворотка с высоким титром 12000-640) с 45 до 90 дня после первой вакцинации, В эти сроки методом плазмофереза получают иммуноглобулин. Получен препарат, специфическая активность которого равна 1497 ME/мп (серия 51).

Пример 2. Донорам-добровольцам внутримышечно вводят вакцину по 1,5 мл трехкратно с интервалом 30 дней. Вируснейтрализующие антитела в крови доноров определялись в высоких титрах (2000-620) с 45 до 150 дня. В эти сроки, т.е. на протяжении 3 мес. у этих доноров производят забор крови для получения иммуноглобулина. Получен препарат активностью 1497 МЕ/мл (серия 51), 5 Пример 3. Группе доноров вводят по 1,0 мл вакцины двухкратно с интервалом 30 дней. Получен препарат с активностью 440 МЕ/мл (серия 50), Пример 4. Группу доноров вакцинируют по 1,0 мп на 1-й, 30-й и 90-й дни, Получают препарат с высокой активностью (1497 ME/ìï) °

Однократная вакцинация и уменьшение дозы вакцины не обеспечивают

1 в крови высокого уровня антител, пригодных для получения иммуноглобулина, Положительный эффект заключается

20 в том, что при использовании предлагаемого способа устраняется опасность возникновения поствакцинальных нейтропаралетических вплоть до смертельных исходов осложнений у доноров25 продуцентов иммуноглобулина, ввиду применения безаллергенной, неэнцефалитогенной концентрированной -культуральной антирабической вакцины, а также в том, что резко сокращается

gp объем вводимой вакцины и количество инъекций, вместо 25-дневного курса вакцинации по 5 мл с суммарным объемом 125 мл препарата, обладающего энцефалитогенными свойствами, вводится 3-5 мл КОКАВ.

Предлагаемый способ дает возможность получения гомологичного ареактогенного с высоким титром антирабических антител до 2000 человеческого иммуноглобулина в количествах, необходимых для потребностей здравоохранения. е

Т аблица 2

1258417

Сводная плазма антител в плазме тел в иммуноглобулине

I 7290

1497

1: 2430

440

Таблица 3

Результаты испытаний

По каз атели

Физические свойства (прозрачность, цвет) . Прозрачный, бесцветный

7,5+0,5

Величина PH

Электрофоретическая чистота

97Х гаммаглобулина

Стерильность

Безвреден

Не токсичеи

Количество содержания белка

lQX

Составитель Г. Крюкова

Редактор С, Патрушева Техред И.Верес Корректор С. Черни

Тираж 5052/4 Тираж 660 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1 13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул, Проектная, Титр антирабических.

1: 537

1:169

Пирогенность

Стабильность

Безвредность

Токсичность

Серия иммуноглобу1лина

Титр антирабических антиСтерильный

Апирогенен

Стабилен

Количе ство

МЕ в 1 мл иммуноглобулина