Способ определения цитотоксичности пыли

Способ определения цитотоксичности пыли

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к методам исследования патогенного действия промышленных пылей. Цель изобретения - упрощение способа и повышение чувствительности выявления мембранно-повреждающего действия пыли на клетки. Эритроциты человека параллельно инкубируют с образцами различных пыпей одной и той же концентрации. Пыль центрифугируют. Затем в надосадке определяют аденозинтрифосфатную кислоты (АТФ), вышедшую из поврежденных эритроцитов. Определение АТФ осуществляют биолюминесцентным методом путем введения в реакционную среду высокоочищенного люцеферин-люцефе- Q -разного комплекса. Цитотоксический эффект определяют минимальной порого (Л вой концентрацией. 1 табл.

СОКИ СОВЕТСНИХ

РЕСПУБЛИК (!9) (!1!

А1 (5g 4 С 12 Я 1/66 G 01 N 21/76

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ;:ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

По ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНР!.!Тий

Н ABTGPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3730414/28-14 (22} 21.04.84 (46) 15.10.86. Бюл. М 38 (71} Куйбышевский медицинский институт им. Д.И. Ульянова (72) В.В. Косарев, А.С. Шпигель и В.С. Лотков (53) 613.633(088.8) (56) Гигиена труда и профессиональные заболевания. М,, 1983, 1!й 5, с. 31-34.

Авторское свидетельство СССР

1! 760959, кл. А 61 В 10/00. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ ПЫЛИ (57) Изобретение относится к области медицины, а именно к методам исследования патогенного действия промышленных пылей, Цель изобретения — упрощение способа и повышение чувствительности выявления мембранно-повреждающего действия пыли на клетки.

Эритроциты человека параллельно инкубируют с образцами различных пылей одной и той же концентрации. Пыль центрифугируют. Затем в надосадке определяют аденозинтрифосфатную кислоты (АТФ), вышедшую из поврежденных зритроцитов. Определение АТФ осуществляют биолюминесцентным методом путем введения в реакционную среду высокоочищенного люцеферин-люцефе.разного комплекса. Цитотоксический эффект определяют нннннелъной порото- Нее вой концентрацией. 1 табл, 1263713

Формула изобретения

Способ определения цитотоксичности пыли путем инкубации ее с биологическим объектом и последующим люминесцентным определением, о т л и ч а ю щ и.й с я тем, что, с целью упрощения способа и повышения точности определения непосредственно мембранно-повреждающего действия, в качестве биологического объекта используют эритроциты крови человека, при этом инкубацию проводят параллельно с различными видами пыли, центрифугируют и с помощью биолюминесценции в надосадке измеряют уровень фотоэмиссии, а наличие цитотоксического эффекта определяют минимальной пороговой концентрацией, а

Концентрация пыли в инкубационной сре де,мг/мл ровни биолюминесцен ции

Кварц Доломит

19,3 (+) 16,0 (+)

13,2 (+) 5,0 (-)

10,0 (+) 5,0 {-)

4,9 4,9

0,2

0,02

0,002

0 контроль

Как видно из таблицы, кварцевая пыль вызывает повреждение эритроцитов на субгемолитическом уровне уже

Ю

П р и м е ч а н и е. (+) - эффект повреждающего действия.

Составитель Л. Покрышкина

Редактор И, Петрова Техред .А.Кравчук Корректор В, Бутяга

Заказ 5497/26 Тираж 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

„Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4

Изобретение относится к медицине, а именно к методам исследования пато генного действия промышленных пылей, Цель изобретения — упрощение способа и повышение чувствительности выявления непосредственно мембранного-повреждающего действия пыли на клетки.

Укаэанная цель достигается тем, что эритроциты человека параллельно 10 инкубируют с образцами различных пылей одной и той же концентрации, затем центрифугируют и в надосадке определяют АТФ, вышедшую из поврежденных эритроцитов, биолюминесцентным 15 методом путем введения в реакционную среду высокоочищенного люцеферинлюцеферазного комплекса.

Пример,,Приготавливают взвеси кварцевой и доломитовой пыли в 26 следующих концентрациях, мг/мл: 2;

0,2; 0,02. Затем в ряд пробирок, содержащих 0,1 мл эритроцитарной . массы и 0,8 мл физиологического раствора прибавляют 0,1 мл взвеси пыли в указанных концентрациях (конечные концентрации становятся на порядок меньше). Контролем служат пробирки с чистым физиологическим раствором (без пыли). Содержимое всех дроби- Зп рок инкубируют 45 мин при 37 С, затем о центрифугируют (3000 об/мин, 15 мин при 4 С). Отбирают 0,2 мл надосадочной жидкости, которую вносят в реакционную среду, содержащую 0„6 мл трис-ЭДТА буфера (0,1 М, рН 7,75) и 0,2 мл АТФ monitoring-reagent фирмы ЛКБ-ВАЛЛАК. Затем определяют уровень биолюминесценции.

В таблице приведены значения уров- 4О ней биолюминесценции в надосадочной жидкости после инкубации эритроцитов человека. с взвесью кварцевой и доломитовой пылей. в концентрации 0,002 мг/мл — уровень фотоэмиссии превышает контрольный более, чем в 2 раза (в то время как доломитовая пыль вызывает повреждение эритроцитов лишь при концентрации 0,2 мг/мл).

Следовательно, доломитовая пыль обладает значительно менее выраженными цитотоксическими свойствами, чем кварцевая пыль.