Способ определения активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах

Способ определения активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в эритроцитах

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

НзоВретение относится к медицине , а именно к гематологии, и может быть применено для диагностики гемолитических анемий и оценки метаболизма эритроцитов. Цель изобретения повышение точности способа. У пациента берут кровь, смешивают с инкубационной средой, содержащей дополнительно хлористый магнш, гепарин, метиленовую синь. Инкубир пот смесь при 37°С. 30 мин. Затем делают мазок, высушивают и микроскопируют (окуляр х10; объектив х90). При этом подсчитывают общее количество гранул формазана в 200 эритроцитах. Определяют среднее содержание гранул в одном эритроците, что и является показатеi лями активности фермента. При сред (Л ней концентрации гранул 3-5 констатируют сниженную, 7-9 - нормальную, 10-14 - повышенную активность фермента . 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕС»ИХ

РЕСПУБЛИН (5П 4 G 01 N 33/68

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТБЕННЬ1Й»ОМИТЕТ СССР пО делАм изОБРетений и От»Ритий (21) 3700258/28-14 (22) 10.02.84 (46) 23.10.86. Бюл. Р 39 (71) Тюменский государственный медицинский институт (72) Э.Н.Баркова, Э.В.Калиничева, С.H.Ñóïëîтов (53) 616.07(088.8) (56) Нарциссов Р.П. Дегидрогеназы с применением и-нитротетразолия фиолетового. /B кн.: H.Ñ.Êèñëÿê, Р.В.Ленская. Клетки крови у детей в норме и патологии. — М.: Медицина, 1978, с. 149. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕН1И АКТИВНОСТИ

ГЛЮКОЗО-6-ФОСФАТДЕГИДРОГЕНАЗЫ В

ЭРИТРОЦИТАХ (57) Изобретение относится к медйцине, а именно к гематологии, и может быть применено для диагностики гемолитических анемий и оценки метаболизма эритроцитов. Цель изобретения повышение точности способа. У пациента берут кровь, смешивают с инкубационной средой, содержащей дополнительно хлористый магний, гепарин, метиленовую синь. Инкубируют смесь при 37 С. 30 мин. Затем делают мазок, высушивают и микроскопируют (окуляр х10; объектив х90). При этом подсчитывают общее количество гранул формазана в 200 эритроцнтах. Определяют среднее содержание гранул в одном эритроците, что и является показатеЮ лями активности фермента. При средней концентрации гранул 3-5 констатируют сниженную, 7-9 — нормальную, 10-14 — повышенную активность фермен. С та. 1 табл.

65614

Изобретение относится к области медицины, а именно к гематологии, и может быть использовано клинико-диагностическими и научно-исследовательскими лабораториями для диагностики ;гемолитических z анемий и оценки метаболизма эритроцитов.

Цель изобретения — повышение точности способа за счет исключения ингибирования фермента фиксацией и добавления в инкубационную среду дополнительно хлористого магния, гепарина и метиленовой сини, проведения инкубации непосредственно с пробой крови, приготовления мазков и подсчета в них среднего числа гранул формазана в одном эритроците.

Способ осуществляют следующим .образом.

Из пальца пациента берут 0,05 мкл .крови и смешивают с 0,1мкл инкубационной среды в центрифужной пробирке, которая предварительно нагрета до

37 С.

Состав инкубационной среды пРиведен, в таблице.

Кровь инкубируют в термостате при о

37 С в течение 30 мин, предварительно тщательно и осторожно перешав с инкубационной средой. По истечении срока инкубацин делают мазок, высушивают и микроскопируют (Окуляр х 10; объектив х 90). При микроскопии мазков подсчитывают общее количество гранул формазана в 200 эритроцитах и определяют среднее содержание гранул в одном эритроците, что и является показателем активности фермента.

Разработаны критерии для оценки активности Г-6-ФДГ при использовании предлагаемого способа: при средней концентрации гранул от 3 до 5 констатируют сниженную, от 7 до 9— нормальную, от 10 до 14 — повышенную активность фермента, П р и и е р 1. Больной M., 32 го. да, поступил с диагнозом: острая лекарственная гемолитическая анемия.

С 15-летного возраста страдает приступами острого гемолиза, связанными с приемами анальгина. Антибиотики гемолитических кризов не дают.

Анализ кропи: гемоглобилин 73,0 г/л эритроциты 2250000, ц.п. = 0,95; ретпкулоциты -- 2% (45 Tbi . / K ) . Содержание непрямого билпрубипа в сывог ротке крови 45 мкмоль/л. Реакция

Кумбса отрицательная.

Для выяснения причины гемолиза эритроцитов проведено определение активности Г-6-ФДГ по предлагаемому способу.

У обследуемого больного общее количество гранул в 200 эритроцитах составило 631. Следовательно, активность Г-6-ФДГ составляет 3,15, что свидетельствует о низком уровне активности фермента, обусловившем острый гемолиз эритроцитов после приема анальгетиков.

Пример 2, Больная Р, 40 лет, поступила с диагнозом. гемолитическая анемия.

Анализ крови. гемоглобин 50 г/л; эритроциты 1600000; ц.п. = 0,9; ретикулоциты 1,2% (19,2 тыс/мкл). В миелограмме содержание эритроидных клеток 45%. Содержание непрямого билирубина в сыворотке крови составр ляет 14 мкмоль/л, прямого нет.

С целью исключения гемолитической анемии, обусловленной недостаточной активностью глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы эритроцитов, проведено определение активности данного фермента по предлагаемому способу, У обследуемой больной общее количество гранул в 200 эритроцитах составило 1566. Таким образом, актив35 ность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы составляет 7,83, что соответствует нормальному уровню и позволяет исключить дефицит фермента как причину гемолиза эритроцитов.

Пример 3. Больной Б. 35 лет, поступил с диагнозом: гемолитическая анемия .

Анализ крови: гемоглобин 87 г/л; эритроциты 2900000; ц.п. = 0,9; ретикулоциты 20% (580 тыс/мкл). Содержание непрямого билирубина в сыворотке крови 37 мкмоль/л, реакция Кумбса отрицательная. В мазке крови выражен микроцитоз. Осмотическая резистентность эритроцитов снижена. При объективном исследовании больного обнаружено увеличение селезенки.

При .определении активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы по предлагае-, мому способу обнаружены высокие показатели: 12,8, что позволяет исключить энзимопенический вариант гемолитической анемии и подтверждает диагноз:

1265614

Ингредиенты Количество вещества, растворенного в

10 мл физиологического раствора, мг

Количество раствора, используемого на одно исследование, мкл

Глюкозо-6-фосфатдинатриевая соль

0,01

НАДФ

0,01

MgC1 1

200

0,01 и-Нитротетразолий фиолетовый

0,01

Мегилено-—

0,02 вая синь

Гепарин "Рихтер" 25000 м.е.

0,5

0,02

Трис-буфер рН = 8,0

0,02

Составитель И. Емельяненко

Техред И.Попович Корректор Л.Патай

Редактор Н.Яцола

Заказ 5655/39 Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r Ужгород, ул. Проектная, 4 наследственная микрофероцитарная гемолитическая анемия.

Ф о р м у л а изобретения

Способ определения активности глюкоз о-6-фосфатде гидро геназы в эритроцитах путем исследования ее цитохимическим методом с использованием инкубационной среды, содержащей и- 0 нитротетразолий фиолетовый, трис-буфер рН = 8,0, глюкозо-6-фосфатдинатриевую соль и НАДФ при физиологических условиях, о т л и ч ающ ийс я тем, что, с целью повышения точности за счет исключения ингибирования фермента фиксацией, инкубационная среда дополнительно содержит хлористый магний, гепарин и метиленовую синь, а инкубацию проводят непосредственно с пробой крови, далее готовят мазки и определяют число гранул образовавшегося формазана в одном эритроците и по средней величине этого показателя определяют актиВность фермента.