Способ определения судорожной активности пептидов

Способ определения судорожной активности пептидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к области медицины и может найти применение в фармакологии при тестировании биологической активности синтетических и природных пептидов. Цель изобретения - упрощение способа за счет устранения хирургического вмешательства . Крысятам D возрасте 3-5 дн. в воротниковую область вводят подкожно исследуемьй пептид (например, лейнкефапин) в дозе 1,3-50. мкммол й на 1 кг массы тела, в 0,1-2 мл физиологического раствора. Через 30i 40 с появляются гиперкинезы передСЛ С них и задних конечностей, спазмы, корчи, потеря равновесия, эпистатонус и другие эпилептиформные реакции , которые визуально регистрируют. 1 табл.

СВОЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (5р 4 С 01 N 33/68 А 61 К 37/02

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

fl0 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ iv

° °

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ и (21) 3905203/28-14 (22) 20.06.85 (46) 23.10.86. Бюл. ¹ 39 (71) Ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский институт экспериментальной медицины

АИН СССР и. Ордена Трудового Красного

Знамени институт высокомолекулярных соединений АН СССР (72) A.M,Koòèí, В.Ф.Пучков, И.И.Тиходеева, Г.П.Власов, В.P.Глушенкова, О.В,Глинская, Н.Ю.Кожевникова и Е.Н.Красникова (53) 618. 15-008; 8 (088. 8) (56) Cain Р.P., Corcoran M.Е. Life

Sci, 1983, ч. 35, р. 2535-2542.

Shead С.О. III, Bearden L.I.Neuropharmaco1ogy, 1984, v. 21, р.11371144.

„„SU, 12 5615 А 1 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУДОРОЖНОЙ

АКТИВНОСТЦ ПЕПТИДОВ (57) Изобретение относится к области медицины и может найти применение в фармакологии при тестированииби-ологической активности синтетических и природных пептидов ° Цель изобретения — упрощение способа за счет устранения хирургическоro вмешательства. Крысятам в возрасте 3-5 дн. в воротниковую область вводят подкожно исследуемьп1 пептид (например, лейнкефалин) в дозе 1,3-50. мкммолей на 1 кг массы тела, в 0 1-2 мл фиэи- ологическоro раствора. Через 3040 с появляются гиперкинезы передних и задних конечностей, спазмы, корчи, потеря равновесия, эпистатонус и другие эпилептиформные реакции, которые визуально регистрируют.

1 табл.

1265615

Изобретение относится к области медицины и может найти применение в фармакологии при тестировании биологической активности синтетических и природных пептидов.

Цель изобретения — упрощение способа за счет использования крыс в возрасте 3-5 дн. и подкожного введения пептидов.

Способ осуществляется следующим образом.

Крысятам в возрасте 3-5 дн. вводят исследуемый пептид в дозе 1,350 мкммолей 1 кг массы тела вводят подкожно в 1,0-0,2 мл физиологического раствора, затем визуально регистрируют наличие или отсутствие эпилептиформных реакций.

Пример 1. Крысенку 3-ro дня

I развития (средняя масса- крысят этого возраста 5,6 + 0,4 г) в воротннковую область подкожно вводят ,185 HKI" лейэнкефалина (что соответтвует дозе 50 мкммолей/кг) в

0,1 мл физиологического раствора.

В предварительных опытах установлено, что введение до 0,4 мл физиологического раствора не приводит к развитию судорожной активности.Через 30-40 с- у крысенка появляются гиперкинезы передних и задних конечностей, опистотонические спазмы, корчи, потеря равновесия, эпистатонус и другие эпилептиформные реакции.

Пример 2. Крысенку 4- ro дня развития сходным образом вводят

5 мкг пептида 16 (табл.), что соответствует дозе 1,3 мкммолей/кг;Судорожная активность начинается через

15-20 с и продолжается свыше 1О мин, Пример 3. Крысенку 5-го дня развития (средняя масса 9,5+1,2 г) вводят 225 мкг пептида 10 в 0,1 мл физиологического раствора (табл.), что соответствует дозе 35 8 мкммолей/

/кг). Судорожная активность развиватся через 2-3 мин и продолжается течение 10 мин.

Данные по исследованию судорожной активности 22, олигопептидов представлены в табл.

Изобретение позволяет в течение

15 . 5-15 мин беэ хирургического вмешательства и использования специального оборудования определить судорожную активность пептидов, а также выявить отдаленные последствия воздействия пептидов на развитие животных и функции ЦНС. Известные способы требуют значительных затрат времени (несколько дней) и проведения операций для центрального введения пептицов.

Форл1ула изобретения

Способ определения судорожной активности пептидов путем введения исследуемых пептидов лабораторным животным с последующей регистрацией эпилептиформных реакций, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью

35 упрощения способа за счет устранения хирургического вмешательства используют крыс в возрасте 3-5 дн, а исследуемые пептиды вводят подкож— но в дозе 1,3-50 мкммоль на 1 кг

40 массы.

i 265615

Неытид аиболъяая сследованая доза, мкмноль/кг

Иинималь

noporosa доза, мкимоль/ лукулярный вес птида

1. TFA-Leu-enkephalin

2. ТРЛ-DAla -Met-enkepbal in-NH

662

45,0

700

771.

3. TFA"Tyr-ПА1а-Сlу-Phe-(Dala) -gl

1 2

4. ЬЛ1а 5-des-Иес-enkephalin-NHCOC(CH ) КН

584

5 ° PTCK-Òór-DAla-Gly-Phe-NH-КН-СО-С(СН ) К К-С(СН ) -СО-КН"КН-Pbe-Сlу"DAla-Tyr-PTCK

3 2

5 ++4 .

3,0

1558

84

6. РТСК-Tyr"DAI à"Gly-Phe-Da1 à-Туг-К М

714

7. PTCK-DOFA"DËlà"0 1 ó-Phe-N Н

687

B, PTCK-DOPA"DË1à-Gly-Phe-(КО, )-К,Н, НС1-Tyr-DA1 à-Glу"КНКН QO да, 1O. PTCK-Tyr-Da1а-G ly-КН-NH О,)-М02

60 ++

35 ++

34,1

435

27,0

662

569

11, ТРА-Tyr-DAl à-Gty-Phe-КН

12. TFA-Тут-DA1a-G 1y-Ðbå-РА1а-NH

640

13; TFA- Tyr-DA1a-G1y-Phe"(0Аlа) КН

14. TFA-(DAla) -Tyr-0А!а-Сlу-Phe-КН

1 1

782

711

15. TFA-Туг-ПА1а-Сlу-Pbe-(DAta) -NH

4 2

853

16. l.eu-His-Lys-Leu-G1u-Thr

986 l 3

50 ++4

573

17. Arg Thr-Asn-Thr

18. Tbr-Лзи-Thr

104

382

785

19. Phe"Pro-Arg-Thr-Лап-Thr

8t7

122

20. TFA-Lys-(СО1СН С Н )-Ьеи-Gln-Thr

602.70 .

41

1620

Д р и и е ч а н и е. Знак "+" соответствует 5 мин судороиной активности; "-" отсутствю

cy2topomott активности.

21. Leu-His-Lys (СО СН С Н "Ьен-Gln-Thr-Phe-Pro-Arg 1403

22. С1пС!п-С1а"Сlу-Arg-Leu-Gly-Àsn-Glу-Try"Аlа"

-Val-G1y-}Iis-Leu-Иес-КН

4 1

70 +4

70 ++

40 +++

37,3

94

104

70 +99