Способ получения амфолитов-носителей для изоэлектрического фокусирования белков

Способ получения амфолитов-носителей для изоэлектрического фокусирования белков

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано при разделении смеси белков. Целью изобретения является упрощение технологии процесса получения амфолитов-носителей для изоэлектричеСкого фокусирования белков. Поставленная цель достигается взаимодействием а шнокислоты с этиленимином при их молярном соотношении 1:5-8,8 при 50-100°С в течение 2-10 ч с последующей обработкой полученного продукта смесью непрес S дельных карбоновьк кислот при молярном соотношении аминокислЬты и не (Л предельной кислоты 1:1-5 при 50-100 4 с в течение 5-20 ч.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТ1 Т 1ЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (59 4 С 07 С 101/00 6 О1 N. 27/26

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМ У СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3845379/23-05 (22) 14.12.84 (46) 07.11.86. Бюл. У 41 (71) Ордена Трудового Красного Знамени институт химии АН ЭССР (72) А. П. Мурель, А. А. Конгас, С. В. Вильде, О. Г. Киррет и М. С. Панк (53) 543.865(088.8) (56) Выложенная заявка ФРГ У 2814408, кл. С 07 С 103/52, 1978.

„„SU„„! 268567 А 1 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АМФОЛИТОВ-НОСИТЕЛЕИ ДЛЯ ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОГО ФОКУСИРОВАНИЯ БЕЛКОВ (57) Изобретение относится к биохимии и может быть использовано при разделении смеси белков. Целью изобретения является упрощение технологии процесса получения амфолитов-носителей для изоэлектрического фокусирования белков. Поставленная цель достигается взаимодействием аминокислоты с этиленимином при их молярном соотношении 1:5-8,8 при 50-100 С в течение 2-10 ч с последующей обработкой полученного продукта смесью непредельных карбоновых кислот при молярном соотношении аминокислоты и непредельной кислоты 1:1-5 при 50-100 С в течение 5- 20 ч.

126856?

ВНИИПИ Заказ 5991/23 Тираж 379 Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изооретение относится к биохимии, а именно к способам разделения белковых смесей.

Целью изобретения является упрощение технологии получения амфолитов носителей для иэоэлектрического фокусирования белков.

Поставленная цель достигается тем, что модификацию аминокислот проводят этиленимином при их молярном соотношении 1:5-8,8 при 50-100 С в течение 2-10 ч с последующей обработкой полученного продукта смесью непредельных карбоновых кислот при молярном соотношении аминокислоты и непредельной кислоты 1:1-5 при 50100 С в течение 5-20 ч.

Пример 1. В трехгорлую колбу, снабженную мешалкой, обратным хо. лодильником и термометром, вносят 20

64,5 г (1,5 моль) этиленимина, 300 мл деионизированной воды, 11,25 r (0,15 моль) глицина, 7,36 r (0,05 моль) глутаминовой кислоты, 13, 1 г (О, 1®мо-: ля) 1 -аминокапроновой кислоты и наь гревают смесь в течение 2 ч при 100 С.

Затем смесь охлаждают,до комнатной температуры и прибавляют по каплям

5,8 г (0,05 моль} малеиновой кислоты, 6,5 г (0,05 моль) итаконовой кислоты 3р и 14,4 r (0,2 моль) акриловой кисло- ты. Температуру поднимают до 50 С и нагревают смесь 20 ч, Пример 2. Синтез проводят аналогично примеру 1, но берут, г/моль. глицин 6,75 (0,09); глутаминовая кислота 5,9 (0,04); 1 -аминокапроновая кислота 5,24 (0,04). Смесь нагревают в течение 5 ч при 80 С. В качестве непредельных кислот берут, lp

r/ìîëü . малеиновая кислота 5,8 (0,05); итаконовая кислота 7,8 r (0,06); акриловая кислота 28,8 (0,4).

Нагревают смесь при 80 С в течение

l6 ч.

Пример 3. Синтез проводят аналогично примеру 1, но берут, г/моль, глицнн 6,0 (0,08); глутаминовая кислота 7,36 (0,05); У -аминокапроновая . кислота 10,49 (0,08) ° Смесь нагрева- gp ют 2 ч при 100 С. В качестве непредельных кислот берут, г/моль: малеиновая кислота )1,6 (0,1); итаконовая кислота 19,5 (0,15); акриловая кислота 5?,6 (0,8), Смесь нагревают 5 ч при 100 С.

Пример 4. Синтез проводят аналогично примеру 1, но берут

0,1 моль р -аланина, 0,1 моль - -аминокапроновой кислоты и 0,05 моль таурина. Смесь нагревают в течение 10ч при 50 С, затем охлаждают до комнат ной температуры, вводят в нее

0,1 моль фумаровой кислоты и О, 15 моль метакриловой кислоты и нагревают при

70 С в течение 10 ч.

Пример 5. Для получения линейного градиента рН 4-10 берут

i продукты по примерам 1-3 в соотношении 1:5:1.

Полученная смесь образует при иэоэлектрическом фокусировании в полиакриламидном геле линейный градиент рН 4-9, в градиенте сахарозы— градиент рН 3-10 5. Электрическое сопротивление амфолитов-носителей в сфокусированном состоянии 10000 Ом (рН 6,5). Стандартная смесь белков для электрофореза разделяется при изоэлектрическом фокусировании в полиакриламидном геле на 18 четких зон, что полностью совпадает с известными данными. Оптическая плотность l -ного водного раствора при

280 нм менее 0 1 в 1 см кювете, что позволяет осуществлять прямое определение белков при данной длине волны.

Формула изобретения

Способ получения амфолитов-носителей для изоэлектрического фокусирования белков путем взаимодействия аминокислот с органическим соединением, отличающийся тем, что, с целью упрощения технологии процесса, в качестве органического соединения используют этиленимин и взаимодействие проводят при молярном соотношении аминокислоты и зтиленимина 1:5-8,8 при 50-100 С в течение 2-.

10 ч с последующей обработкой полученного продукта смесью непредельных карбоновых кислот при молярном соотношении аминокислоты и непредельной кислоты 1:1-5 при 50-100 С в течение

5-20 ч.