Способ определения продигиозана

Способ определения продигиозана

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине . Цель изобретения - увеличение чувствительности способа. Готовят стандартный раствор. 0,01 г порошка продигиозана помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 40 мл нагретого до 90°С 0,9%-ного раствора хлорида натрия. После охлаждения раствора его объем доводят тем же растворителем до метки. В пробирку вносят 0,2 мл 0,03%-ного раствора DL-триптофана, 1,3 мл приготовленного раствора и 5 мл концентрированной серной кислоты. Затем готовят исследуемый раствор. В пробирку вносят 0,03% DL-триптофана, 1,3 мл 0,02%-ного раствора продигиозана и 5 мл концентрированной серной кислоты. Приготовленные растворы встряхивают, нагс ревают в течение 5 мин. После охлаждения растворов проводят количествен (Л ное определение продигиозана на спектрофотометре при AMQKC - 320 нм. 2 ил.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (51)4 А 61 К 31/715

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3882094/28-14 (22) 12.04.85 (46) 30.11.86: Бюл. Р 44 (71) Центральный ордена Ленина институт усовершенствования врачей и Всесоюзный научно-исследовательский институт фармации (72) -Л.Е.Щедрина, Л.И.Брутко и Г.А.Растунова (53) 616-094(088.8) (56) Щедрина Л.Е., Брутко Л.И., Растунова Г.А., Щербакова Э.Т. Антибиотики. 1984, т. 29, с. 410 413. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОДИГИОЗАНА (57) Изобретение относится к медицине. Цель изобретения — увеличение чувствительности способа. Готовят стандартный раствор. 0,01 r порошка

„ЛК 12 110 А1 продигиозана помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в

40 мл нагретого до 90 С 0,97-ного раствора хлорида натрия. После охлаждения раствора его объем доводят тем же растворителем до метки. В пробирку вносят 0,2 мл 0,037-ного раствора

DL-триптофана, 1,3 мл приготовленного раствора и 5 мл концентрированной серной кислоты. Затем готовят исследуемый раствор. В пробирку вносят

0,037 DL-триптофана, 1,3 мл 0,027.-ного раствора продигиозана и 5 мл концентрированной серной кислоты. Приготовленные растворы встряхивают, нагревают в течение 5 мин. После охлаждения растворов проводят количественное определение продигиозана на спектрофотометре при 1 „, = 320 нм. 2 ил.

1I 12731

Изобретение относится к фармации, а именно к способам количественного определения бактериальных липополисахаридов, применяемых в медицине в качестве лекарственных препаратов.

Цель изобретения — увеличение чувствительности способа путем предварительной обработки рас вора продигиозана триптофаном в присутствии концентрированной серной кислоты при 10 нагревании.

Способ осуществляется следующим образом.

Определение содержания продигиозана начинают с пригс говления О,ОЗХ-но- 15 го водного раствора DL-триптофана.

С этой целью 0 015 г порошка DI,-триптофана (точная навеска) вводят в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 40 мл нагретой до 90 С дис- 20 тиллированной воде, после охлаждения раствора до комнатной температуры его объем доводят тем же растворителем до метки.

Затем приготавливают стандартный и исследуемый растворы. Приготовле ние стандартного раствора: 0,01 r порошка продигиозана (точная навеска) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 40 мл нагретого до 90 С 0,97-ного раствора натрия хлорида, после охлаждения раствора до комнатной температуры его объем доводят тем же растворителем до метки. Далее в пробирку вносят 35

0,2 мл 0,037-ного раствора DL--триптофана, 1,3 мл приготовленного раствора и 5 мл концентрированной серной кислоты. Приготовление испьггуемого раствора: в пробирку вводят 40

0,2 мл О,ОЗХ-ного раствора DL-триптофана, 1,3 мл испытуемого 0,02Х-ного раствора продигиозана и 5 мл концентрированной серной кислоты. Все растворы готовят в пяти повторностях. 45

Приготовленные растворы встряхивают, нагревают на кипящей водяной бане в течение не менее 5 мин, по охлаждении растворов до комнатной температуры проводят количественное опреде- 50 ление продигиозана на спектрофотометре СФ-!6 при „ „, 320 нм в кюветах с толщиной рабочего слоя 1 см. Раствором сравнения служит раствор, содержащий 0,2 мл О,ОЗХ-ного раствора 55

Ж-триптофана, 1,3 мл 0,9Х-ного раствора натрия хлорида и 5 мл концентрированной серной кислоты.

1П 2

Содержание препарата рассчитывают по формуле

D „4-10 5 с где Х содержание препарата, г/мл; оптическая плотность исD

Иссл следуемого раствора;

D., — оптическая плотность стандартного раствора;

4 10 — содержание продигиозана в 1 мл стандартного раствора;

5 — разведение исследуемого раствора.

Содержание продигиозана в исследуемых 0,027-ных растворах составляет 1,899.10 — 2.075.10 " г/мл, что соответствует 0,019-0,0217.

Результаты количественного спектрофотометрического определения продигиозана в 0,02Х-ных растворах:

Пол уч е но, г /мл

2,075.10

1,975.10

1,901.10

1,899.10

1,955.10

Взято, г/мл

2.10 4

2.10

2.10

2.10

2.10

Предлагаемый способ характеризуется большей (в 5 раз) чувствительностью в сравнении с известным, так как количественное определение продигиозана проводится по компоненту молекулы продигиозана — комплексу полисахарида и липида А, ответственному за терапевтический эффект препарата, в отличие от известного способа, согласно которому определение проводят по нуклеиновой кислоте, не связанной с лечебным действием. Способ позволяет сократить расход препарата, необходимого для проведения анализа, в 5 раз.

Построение калибровочной кривой.

В ряд пробирок добавляют по 0,2 мл

0,037.-ного раствора DL -триптофана, по 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5 мл приго— товленного раствора продигиозана, соответственно по 1,2; I,I; 1,0; 0,9;

0,8 мл 0,97.-ного раствора натрия хлорида. Во все пробирки добавляют по

5 мл концентрированной серной кислоты ° Bce пробирки встряхивают и нагревают на кипящей водяной бане в течение не менее 5 мин. После охлаждения растворов до комнатной температуры

1273

110 4 способу достигаются в пять раз большими концентрациями препарата (фиг.2).

Формула изобретения

Способ определения продигиозана, включающий проведение спектрофотометрического исследования раствора продигиозана с последующим определением его количества по калибровочной кривой, отличающийся тем, что, с целью увеличения чувствительности способа раствор продигиозана предварительно обрабатывают раствором DL-триптофана в присутствии концентрированной серной кислоты при нагревании в течение не менее 5 мин, а оптическую плотность измеряют при

= 320 нм.

100 ЛЮ

C, магг/мл

Риг. 8

Ю 80 50 с, мкг,Гмбх

Рпг. f

Составитель А.Агуреев

Редактор И.Рыбченко Техред Л.Сердюкова

Корр ект ор В. Синицкая

Заказ 6365/6,Тираж 660 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

1роизводственно-полиграфическое предприятие, г ° Ужгород, ул. Проектная, 4 проводят измерение величины оптической плотности на спектрофотометре

СФ-16 при 1„ 320 нм в кюветах с длиной оптического пути 1 см.

Затем строят калибровочную кривую, 5 где по оси абсцисс откладывают концентрацию продигиозана С в мкг/мл, а по оси ординат — оптическую плотность в единицах оптической плотности. tO

Как видно из фиг. 1, прямо пропорциональная зависимость между концентрацией растворов и величиной оптической плотности наблюдается в пределах концентраций 0 — 50 мкг/мл. 15

Те же значения величины оптической плотности при регистрации концентрации продигиозана по известному

08

07 аоб ою 6 04

Я ОS ог 01, 0,á

1 уО5

%04

biz

В ,0Z

601