Способ изготовления иммуноэлектродов

Способ изготовления иммуноэлектродов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к иммунологии , может быть применено также в изготовлении лекарственных препаратов . Цель изобретения - ускорение процесса изготовления. Для этого в ячейку, содержащую стандартный хлорсеребряный и вспомогательный платиновый электроды вносят электролитную смесь: водно-этанольный растворитель , коллагеновая суспензия, глута .ровый альдегид, соляная кислота, антиген или антительная сыворотка, вода . Раствор перемешивают, проводят катодное электроосаждение антигеноили антительно-коллагеновой пленки на поверхности хлорсеребряного электрода . Полученный иммуноэлектрод промывают дистриллированной водой и помещают в 0,05 М боратно-фосфатный буфер, содержащий бычий сывороточный альбумин для блокировки активных центров глутарового альдегида. Элект (Л С роосаждение коллагеновой пленки на поверхности хлорсеребряного электрода ведут при плотности тока 1012 мА/см в течение 40-45 с.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5D 4 6 01 N 33/53 ф(р- д «г },. р

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H A BTGPCHGMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (2", ) 3887314/28-14 (22) 18.04.85 (46) 30.11..86. Бюл. к 44 (7 1) Самаркандский ордена Дружбы народов медицинский институт им. И.П.Павлова (72) Д.И.Ивницкий, А.И.Приев, M.Ô.Þëàåâ и А.П.Кашкин (53) 621.3 15(088.8) (56) Sasnamoto N Tsubomura Н.

Sawai М. Proc Japan Acad, v 57, sor В, N 4, 1981, р. 123-128. (54) СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ИИИУНОЭЛЕКТРОДОВ (57) Изобретение относится к иммунологии, может быть применено также в изготовлении лекарственных препаратов. Дель изобретения — ускорение процесса изготовления. Для этого в ячейку, содержащую стандартный хлорсеребряный и вспомогательный платиновый электроды вносят электролит-., ную смесь: водно-этанольный растворитель, коллагеновая суспензия, глутаровый альдегид, соляная кислота, антиген или антительная сыворотка, вода. Раствор перемешивают, проводят катодное электроосаждение антигеноили антительно-коллагеновой пленки на поверхности хлорсеребряного электрода. Полученный иммуноэлектрод промывают дистриллированной водой и помещают в 0,05 М боратно-фосфатный буфер, содержащий бычий сывороточный альбумин для блокировки активных центров глутарового альдегида. Электроосаждение коллагеновой пленки на поверхности хлорсеребряного электрода ведут при плотности тока 1012 мА/см в течение 40-45 с.

1 12

Изобретение относится к иммунологии и может найти применение в медицине и промышленности лекарственных препаратов.

Целью изобретения является ускорение процесса изготовления.

Способ осуществляют в следующей последовательности.

В ячейку, содержащую стандартный хлорсеребряный и вспомогательный платиновый электроды, вносят электролитную смесь следующего состава: водноэтанольный растворитель, коллагеновая суспензия, глутаровый альдегид, соляная кислота, антиген или антительную сыворотку. Раствор перемешивают и проводят катодное электроосаждение антигено- или антительно-коллагеновой пленки на поверхности хлорсеребряного электрода. Полученный иммуноэлектрод промывают дистиллированной водой и помещают в 0,05 М боратно-фосфатный буфер, содержащий тритон Х-100 и бычий сывороточный апьбумин (БСА) для блокировки активных центров глутарового альдегида.

Иммобилизация антигенов или антител из электролитной смеси методом электроосаждения существенно сокращает время изготовления иммуноэлектрода. Формирование антигено- или антительно-коллагеновой пленки на токопроводящей поверхности иммунозлектрода осуществляется за 40-45 с при плотности тока 10-12 мА/см .

Наличие коллагеновой пленки затрудняет диффузию различных примесей, окислителей и восстановителей непосредственно к токопроводящей поверхности и исключает их влияние на потенциал иммуноэлектрода. К тому же потенциал иммуноэлектрода из хлорсеребряной основы является высоковоспроизводимым. Результатом этого является увеличение селективности измерений антигенов и антител иммуноэлектродом.

Электролитная смесь следующего состава, мас.Ж: этанол 24,6740—

24,8124; коллаген 0,0500-0,1000Ä глутаровый альдегид 0,7000- l,2000; соляная кислота 0,0004-0,0040," антиген или антисыворотка О, 1100-0,1300, вода остальное, обеспечивает получение плотных и равномерных по толщине коллагеновых пленок на токопроводящей поверхности электрода, предотвращает осаждение коллагена в объеме

73805 2 раствора, что позволяет иммобилизовывать в коллагеновой пленке антигены и антитела в количестве, на порядок превышающем известный способ.

Пример 1. Для изготовления иммуноэлектрода с иммобилизованной

L-аспарагиназой в качестве токопроводящей поверхности используют стандартный хлорсеребряный электрод (ф =0,3 мм, S=l0 мм -), являющийся контактн.ям полуэлементом ионселективных электродов. В ячейку, содержащую хлорсеребряный и вспомогательный платиновый электроды. вносят

0,6 мп электролитной смеси следующего состава, мас.Е: этанол 24,8124; коллаген 0,0500; глутаровый альдегид

0,7000, соляная кислота 0,0004 и

L-аспарагиназа из бактерий E. coli

0,1100; вода остальное. Раствор псремешивают и проводят электроосаждение аспарагиназно-коллагеновой пленки на поверхности хлорсеребряного электрода при плотности тока 1012 мА/см в течение 40-45 с. Полученный иммуноэлектрод промывают дистиллированной водой и помещают на 14 мин в 0,05 М боратно-фосфатный буфер

pfl 8,7, содержащий и, 1Z раствора тритона Х вЂ” 100 и 0,67. БСА для блокировки активных центров глутарового альдегида.

5

10 l5

Пример 2. Для изготовления иммуноэлектрода с иммобилизованными антителами к L-аспарагиназе в качестве токопроводящей поверхности ис- пользуют стандартный хлорсеребряный электрод (ф =0,3 мм, S=10 мм2) .

В ячейку, содержащую хлорсеребряный и вспомогательный платиновый электроды, вносят О,б мл электролитной смеси следующего состава, мас. : этанол 24,6?4; коллаген О, 100; глутаl ровый альдегид 1,200; соляная кислота 0,004 и обессоленная кроличья сыворотка против L — аспарагиназы О, l3 вода остальное. Раствор перемешивают и проводят электроосаждение антительно-коллагеновой пленки на поверхности хлорсеребряного электрода при плотности тока 10 — 1? мА/см в течение 40-45 с. Полученный иммуноэлектрод промывают дистиллированной водой и помещают на 14 мин в 0,05 М боратно-фосфатный буфер рН 8,7, содержащий 0, 1Z раствора тритона Х-100 и 0,6Х БСА для блокировки активных центров глутароного альдегида.

12738

Формула изобретения

Составитель В. Назарова

Редактор Н.Швыдкая . Техред-Л.Сердюкова Корректор И.Муска

Заказ 6470/41 Тираж 778 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

И3035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная, 4

С помощью изготовленных данным способом иммуноэлектродов и электродов сравнения проводят анализ содержания антигенов или антител в анализируемых жидкостях. 5

Способ изготовления иммуноэлектродов, состоящий в иммобилизации анти- >О генов или антител на токопроводящей поверхности, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса изготовления, иммобилизацию проводят

05 ф электроосаждением в электролите состава, мас. :

Зтанол 24, 6 740-24, 8124

Коллаген 0,050-0, 100

Глутаровый альдегид О, 700-1, 200

Соляная кислота 0,0004-0,0040

Антиген или антисыворотка О, 1100-0, 1300

Вода Остальное при плотности тока 10-12 мА/см в течение 40-45 с на токопроводящую поверхность, имеющую хлорсеребряную основу.