2-(5-нитротиазолил-2-азо)фенолсульфокислота в качестве реагента для обнаружения белков в полиакриламидном геле

2-(5-нитротиазолил-2-азо)фенолсульфокислота в качестве реагента для обнаружения белков в полиакриламидном геле

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение касается замещенных тиазолинов, в частности ,2-(5 нитротиазолш1-2-азо)-фенолсульфокислоты (ТФК), которая может быть реагентом для белков в полиамидном геле. Для выявления соединений указанного класса , позволяющих сократить время обнаружения белков при электрофорезе, в полиамидных гелях было получено новое замещенное тиазолина 1. Его получение ведут нитрозированием 2- амино-5-нитротиазола в среде концентрировднной Н Р0 с помощью NaNOj в присутствии HNO с последующим азосочетанием с п-фенолсульфокислотой, растворенной в водно этаноле, при охлаждении до (-2)-0 С. ТФК очищают, переосаждением из этанола. Вькод 41,4%. При использовании ТФК для гелей , которые они окрашивают, не требуется время для отмывания фона красителя в противоположность известному - с красителем амидовым черным ЮБ нужно 15-20 ч при высоком расходе 7%-ного раствора -200-300 мл. Определяемая с помощью ТФК концентрация белков составляет 10 -10 моль/л. 1 табл. с 3 сл

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„Я0„„1286598 (51) 4 С 07.D 277/82 С 01 N 33/50

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ „ т c„"

Н A BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3956014/31-04 (22) 25.09.85 (46) 30.01.87. Бюл. № 4 (71) Институт химии им. В.И.Никитина (72) М.10супов, А.Х.Алиходжаев, Т.П.Копиця, В.К.Буриченко и И.В.Игнатова (53) 547.789.1.03(088.8) (56) Raymand S., Wang I. — P. Preparations .and propertes of acrylamide

gel for use in electrophoreses.

Anal Biochem. 1960, № 8, р. 391-396. (54) 2-(5-НИТРОТИАЗОЛИЛ-2-АЗО)-ФЕНОЛСУЛЬФОКИСЛОТА В КАЧЕСТВЕ РЕАГЕНТА

ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ БЕЛКОВ E ПОЛИАКРИЛАМИДНОИ ГЕЛЕ (57) Изобретение касается замещенных тиазолинов, в частности 2-(5-нитротиазолил-2-азо)-фенолсульфокислоты (ТФК), которая может быть реагентом для белков в полиамидном геле. Для выявления соединений указанного класса, позволяющих сократить время обнаружения белков при электрофорезе, в полиамидных гелях было получено новое замещенное тиазолина 1. его получение ведут нитрозированием 2амино-5-нитротиазола в среде концентрированной Н PO с помощью NANO, в присутствии HNO с последующим азо3 сочетанием с п-фенолсульфокислотой, растворенной в водном этаноле, при охлаждении до (— 2)-0 С. ТФК очищают. переосаждением из этанола. Выход

41,47.. При использовании ТФК для гелей, которые они окрашивают, не требуется время для отмывания фона краО сителя в противоположность известно- щ му — с красителем амидовым черным !

ОБ нужно 15-20 ч при высоком расходе

7Х-ного раствора СН СООН -200-300 мл.

Определяемая с помощью ТФК концентрация белков составляет 10 6 -10 моль/л. ф

1 табл.

86598

Краситель

Расход

7%-ной уксусной кисВремя отмыва ния фо на кра лоты мл сителя

2-(5-Нитротиазолил-2-азо)фенолсульфокислота

Амидовый черный

10Б

15-20 200-300

Кумасси голубой

R-250

200-300

OH

1 = Д

SO H

1 * 12

Изобретение относится к новому химическому соединению, конкретно к 2-(5-нитротиазолил-2-азо)-фенолсульфокислоте, которая может быть использована в качестве реагента для обнаружения белков.

Цель изобретения — новые реагенты, позволяющие снизить время обнаружения белков при их электрофорезе в полиакриламидном геле.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами, Пример 1. Диазотирование

2-амино-5-нитротиазола.

В круглодонную колбу объемом на

500 мл, снабженную механической мешалкой, капельной воронкой и термометром, помещают 14,7 г (0,1 м)

2-амино-5-нитротиазола, растворенного в 100 мл концентрированной ортофосфорной кислоты. К смеси приливают

80 мл концентрированной азотной кислоты, раствор охлаждают до (-2)-0 С и медленно в течение 15-20 мин, по каплям приливают 6,9 г (0,1 м) нитрита натрия, растворенного в минимальном количестве во . После п и,ЦЫ P бавления всего нитрита натрия раствор перемешивают 10 мин. Полученный диазораствор используют для сочетания с n- фенолсульфокислотой.

Для проведения реакции азосочетания к 19,6 г (0,1 M) n-фенолсульфокислоты, растворенной в 300 мл водного спирта (1:1), при охлаждении до (-2 )-0 С и перемешивании приливают небольшими порциями в течение 30 мин диазораствор 2-амино-5-нитротиазола.

При этом выпавший мелкодисперсный осадок красно-желтого цвета оставля40 ют на ночь при охлаждении. Полученный продукт очищают переосаждением из этилового .спирта водой, сушат на воздухе. Выход 15 г (41,4%). Для анализа полученное вещество перекристаллизовывают из муравьиной кислоты.

Найдено, %: С 29,62; Н 2,07.

Б Ь 0 Н 0

Вычислено, %: С 3 1,03; Н 2,29.

Пример 2. Электрофорез белков 0 (рибонуклеазы, гистона) в полиакриламидном геле (ПААГ) проводили в трубках диаметром 5 мм высотой 100 мм.

После электрофореза гели окрашивали

0 2%-ным раствором 2-(5-нитротиазолил-2-азо)-фенолсульфокислоты в смеси этанол — вода — уксусная кислота (5:5:1).

Параллельно для сравнения гели окрашивали 0,2%-ными растворами амидо-черного 10Б и кумасси голубого

R-250 в смеси этанол — вода — уксусная кислота.(5:5:1). Затем гели, окрашенные растворами амидо-черного 10Б и кумасси голубого R-250 отмывали

7%-ным раствором уксусной кислоты.

Во всех случаях белки определяли по появлению окрашенных зон.

Для гелей, окрашенных раствором

2-(5-нитротиазолил-2-азо) фенолсульфокислоты, не требуется дополнительная отмывка красителя, что делает удобным его применение при серийном анализе (см. таблицу).

Определяемая с помощью 2-(5-нитротиазолил-2-азо)-фенолсульфокислоты б концентрация белков составляет 10

10 моль/л.

Формула изобретения

2-(5-Нитротиазолил-2-азо)-фенолсульфокислота формулы в качестве реагента для обнаружения белков в полиакриламидном геле.

ВНИИПИ Заказ 7681/24 Тираж 37 1 Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, r Ужгород, ул. Проектная, 4