Штамм @ @ ,используемый для получения вибриоцина холерного вибриона

Штамм @ @ ,используемый для получения вибриоцина холерного вибриона

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Штамм Escherichia coli, 127 (Коллекция Государственного НИИ стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича), используемый для получения вибриоцина холерного вибриона. (/ С

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУ БЛИН

„,SU„„>293216 А 1 (59 4 С 12 N 15/00 ° А 61 К 39/108//

С 12 N 15 00 С 12 R 1:19

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ASTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

110 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3865578/28-14 (22) 25.03.85 (46) 28.02.87. Бюл. У 8 (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (72) И.M.Áàäaëîâà и Б.Н.Мишанькин (53) 576.8.097(088.8) (56) Бадалова И.M., Бурлакова О.С.

Ускоренный метод количественного определения активности вибриоцинов.—

В сб. Молекулярная биология и иммунология ООИ, г.Ростов-на Дону, 1984.

Farkas-Himsley Н. Bacteriocinsare they broad-spectrum antibiotics.

J.Antimicrob. Chemoterap., 1980, 6, У 4, р. 424-427.

Farkas-Himsley Н. Antitumor

agents. Effect of vibriocin, à bacte-

riocin from Uibrio comma, on the Hela

and L-cell tissue cultures. IRCS. Ме"

dical Sciense, 1974, В 2, р. 1117.

Farkas-Himsley Н,, Cheung Н., Tompkins R., W.À.F. Selective antitumor agents-bacteriocins from Gramnegative bacteria. IRCS. Medical Sciense, 1975, В 3, р. 148.

Farkas-Himsley H., Kurniak S. Bac-.

teriocins as inhibitors of neoplasia.

In Current Chemotherapy (siegenthaler, W.Luthy, R.Eds) 1188-91. American Society of Microbiology, УазЬм

Ыа Э.С., 1978, Farkas-Himsley Н., Cheung R. Bacterial proteinaceous products (Ъасteriocins), as cytotoxic. agents of

neoplasia. Cancer Research. 1976, Р 36, р. 3641-3649. (54) ШТАММ ESCHERICHIA C0LI, ИСПОЛЬ-.

ЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ВИБРИОЦИНА ХОЛЕРНОГО ВИБРИОНА (57) Штамм Escherichia coli, 127 (Коллекция Государственного НИИ . стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича), используемый для получения вибриоцина холерного вибриона.

1293216 2 на. Лизируется кишечными фагами Т-7 и У г.

ix Клетки штамма авирулентны для белых мышей и морских свинок при под5 кожном, аэрозольном и внутриконьюнктивальном заражении в дозе до 10 м.к.

Штамм несет искусственно полученный коинтеграт плазмид КР4 и pVib, который позволяет ему в контролируемых условиях образовывать большие количества вибриоцина, в 10-15 раз превышающие уровень продукции бактериоцина родительским штаммом V.eltor

637/67.

Использование штамма 127 иллюстрируется следующими примерами.

Hp и м е р 1. Клетки штамма

Е.coli 127 выращивают в бульоне Мартена (рН 7,2) при 37 С со встряхиванием до оптической плотности 0,6 и добавляют 0„5 мкг/мл митомицина С.

Через 6-12 ч клетки собирают центрифугированием и трехкратно обрабатывают 1 М раствором NaC1. Полученные соленые экстракты объединяют и после соответствующего разведения исследуют на вибриоцин биологическим методом отсроченного антагонизма по Фредери3О ку с использованием B качестве индикаторного штамм E.coli и V.cholerae Nag 296/1.

Четкое пятно подавления роста индикаторной культуры регистрируется при использовании экстрактов разве2 3

У ценных в 10 — IO раз.

Изобретение относится к микробиологии, в частности к производству антибактериальных и противоопухолевь препаратов.

1, елью изобретения является создание штамма, способного продуцировать бактериоцин — вибриоцин холерного виб риона и безопасного для окружающих.

При проведении исследований, связанных с изучением генетического детерминирования фактора вибриоциноген ности у холерного вибриона, мобилиза цией на перенос с помощью плазмиды

RP4 удалось передать кишечной палочке от Зльтор вибриона плазмиду вибриоциногенности pVib.. При этом оказалось, что плазмиды ВР4 и pVib образуют сравнительно стабильный коинтеграт КР4::Vib с суммарной молеку лярной массой 42,0 мегадальтона.

Клетки кишечной палочки с RP4 и

pVib благодаря особенностям своего нового хозяина продуцируют вибриоцин в 10 раз больше, чем родительский штамм холерного вибриона V ° eltor

637/67. Сконструированный штамм

Escherichia coli QD.5003 К-50 депони рован в коллекции государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им.Л.А.Тарасевича МЗ СССР под номером 127.

Штамм Е.coli 127 характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические приз-. наки.

Клетки штамма 127 кишечной палочки в мазках из суточных культур имеют вид коротких палочек 1,0-2,0х0,340

-0,4 мк. Неподвижны . Грамотрицательны. Полиморфизм выражен умеренно.

Агар hB-образует мутные колонии серовато-белого цвета.

Агар Хоттингера (рН 7,6) образует мутные колонии серовато-белого цвета.

Бульон Хоттингера вызывает помутнение среды.

Физиолого-биохимические признаки.

Сбраживают с образованием кислоты и газа лактозу, глюкозу, арабинозу„ манноэу, галактозу. Не ферментируют сахароэу. Образуют коагулазу и фибринолизин. Оптимум температуры культивирования 37 С.

Устойчив к канамицину и ампицилину (> 100 мкг/мл), а также к тетрацикпину (>20 мкг/мл). Зависит от пролиПример 2. Клетки предлагаемого штамма кишечной палочки 127 высевают в виде макроколоний на 1,5Х агар LB и проверяют на способность продуцировать.вибриоцин биологическим методом (Frederica, 1952) с помощью индикаторных штаммов Е.coli У.cholerae Nag 296/1. Об активности бактериоцина судят по величине зон подавления роста индикатора.

Пример 3. 18-24-часовую бульонную культуру штамма Е. coli 127, обработанную митомицином С с целью индукции вибриоцина, центрифугировали для освобождения от клеток, а прозрачную надосадочную жидкость испольэовали в качестве источника вибриоцина. Активность вибриоцина оценивали по изменению оптической плотности взвеси микробных клеток индикаторных штаммов при взаимодействии с центрифуга1293216

Составитель Г.Смирнова

Техред М. Ходанич Корректор М.Самборская

Редактор А.Долинич

Заказ 348/28 Тираж 500 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная, 4 том. Величина активности, выраженная в условных единицах (Бадалова И.М. с соавт., 1984), у данного штамма Е.соli 127 на 12-14 усл.ед. превышала активность вибриоцина родительского штамма V.eltor 637/67.