Способ определения продуктов перекисного окисления липидов в крови

Способ определения продуктов перекисного окисления липидов в крови

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицинской биохимии, предназначено для определения уровня перекисного окисления липидов биомембран в норме и при разных патологиях. Цель изобретения - повышение точности способа.Для этого проводят забор крови. Порцию крови или эритроцитов гомогенизируют со 100-500-кратным избытком растворителя гептан - изопропиловый спирт

СВОЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) 8 А1 (gg 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н ASTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

С:

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3933845/28-14 (22) 17.07.85 (46) 15.04.87. Бюл. 11» 14 (7 1) Тюменский медицинский институт (72) В.Н. Ушкалова и Г.Д. Кадочникова (53) 616-07(088.8) (56) Владимиров В.А., Арчаков А.И.

Перекисное окисление липидов. N.: Наука, 1972, с. 237. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОДУКТОВ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ В КРОВИ (57) Изобретение относится к медицинской биохимии, предназначено для определения уровня перекисного окисления лилидов биомембран в норме и при разных патологиях. Цель изобретения - повышение точности способа.Для этого проводят забор крови. Порцию крови или эритроцитов гомогениэируют со 100-500-кратным избытком растворителя гептан — изопропиловый спирт (1:1 по объему), встряхивают в течение 1 мин, расслаивают дистиллированную воду, центрифугируют 5 мин при

3000 об/мин, затем отбирают гептановый экстракт, который фотометрируют при 232 и 268 нм. Концентрацию продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) рассчитывают в единицах оптической плотности (1:) при каждой длине волны на мг липидов по формуле

Р„, „„= D:Р; D,>„, =D„:Ð; где 9оптическая плотность гептанового экстракта при 232 и 268 нм; Р— масса липидов в 1 мл гептанового экстракта, мг. После обработки полученных данных получают среднестатистические показатели концентрации продуктов ПОЛ капиллярной и венозной крови для исследуемых возрастных грулп, 3 табл.

1303938

Изобретение относится к медицинской биохимии, в частности к способам определения уровня перекисного окисления липидов биомембран в норме и при различных патологиях. 5

Цель изобретения — повышение точности способа за счет исключения по— терь сопряженных диенов в изопропанольной фазе и одновременного определения сопряженных триенов.

Способ осуществляют следующим образом.

Производят забор крови и 0,02

0,1 мл крови или эритроцитов гомогенизируют с 100-500-кратным избытком

f5 растворителя гептан: изопропиловый спирт 1:1 IIO II eM, BCTpSIXHBBIOT в течение 1 мин,,расслаивают 1 мл дистиллированной воды, центрифугируют

5 мин при 3000 об/мин, затем отбирают гептановый экстракт, который фотометрируют при 232 и 268 нм ° Концентрацию липидов определяют гравиметри- ,чески в 1 мл гептанового экстракта.

Концентрацию продуктов перекисного окисления.липидов (ПОЛ) рассчитывают в единицах оптической плотности (D) при каждой длине волны на миллиграмм липидов по формуле

D„

232! чг Р

В

Г1 »ь»

D. »ь8/нг где D — оптическая плотность гептанового экстракта при 232 и

268 нм;

Р— масса липидов в 1 мл гепта40 нового экстракта, мг, Пример 1. Определение концентрации продуктов ПОЛ капиллярной крови.

Обследована группа практически здо- ровых рабочих г.уренгоя в количестве

12 человек в возрасте 20-22 года с целью профилактического осмотра. Забор крови производят из пальца. Кап- лю крови (0,02 мл) гомогенизируют с

5 мп растворителя гептан: иэопропиловый спирт 1:1 в течение 1 мин, расслаивают 1 мл дистиллированной воды, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, отделяют гептановый экстракт, в котором определяют оптическую плотность продуктов ПОЛ при 232 и 268 нм и концентрацию липидов гравиметрически.

Получают среднестатические показатели концентрации продуктов ПОЛ капиллярной крови для исследуемой возрастной группы рабочих, равные 1,47+

+0,10 П» 2(мт и 0,62+0,08 0»ь8)„

Концентрация липидов в 1 мл гептанового экстракта равна 0,21+0,04 мг.

Результаты определения концентрации продуктов ПОЛ капиллярной крови в соответствии с примером 1 приведены в табл. 1.

T! p и м е р ?. Определение концентрации продуктов ПОЛ венозной крови.

Обследована группа практически здоровых рабочих г, Уренгоя в количестве 12 человек в возрасте 20-22 года с целью профилактического осмотра.

Забор крови производят из вены. Каплю крови (0,02 мл) гомогенизируют с

10 мл растворителя гептан: изопропиловый спирт 1:1 в течение 1 мин, расслаивают 1 мл дистиллированной воды, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, отделяют гептановый экстракт, в котором определяют оптическую плотность при 232 и 268 нм и концентрацию липндов гравиметрически.

Получают среднестатистические показатели концентрации продуктов fi031 венозной крови для исследуемой возрастной группы рабочих равные 1,91+

+0,11 D,,,- и 0,86+0,09 D, „ .Концентрация липидов в 1 мл гептанового экстракта равна 0,22+0,05 мг, Результаты определения концентрации продуктов Г!ОЛ веноэной крови в соответствии с примером 2 приведены в табл. 2.

Пример 3 ° Определение концентрации продуктов ПОЛ эритроцитов венозной крови.

Обследована группа практически здоровых рабочих r.Òþìåíè в количестве

15 человек в возрасте 20-22 года с целью профилактического осмотра. Забор крови проводят из вены и О, 1 мл эритроцитов дважды отмывают 0,9%-ным раствором хлорида натрия, гомогенизнруют с 9,9 мл растворителя гептан: изопропиловый спирт 1:1 в течение

1 мин, расслаивают 1 мл дистиллированной воды, центрифугируют 5 мин при 3000 об/мин, отделяют гептановый экстракт, в котором определяют опти1303938

Формула изобретения

Способ определения продуктов перекисного окисления липидов в крови путем экстракции проб смесью гептан: изопропанол 1:1 с последующим добавлением воды, разделением фаэ и oripeделением в гептановой фазе содержания сопряженных диенов спектрофото-— метрически по поглощению при 232 нм, отличающийся тем, что, с целью повьппения точности способа эа счет исключения потерь сопряженных диенов в иэопропанольной фазе и одновременного определения сопряженных триенов, смесь гептан : изопропанол берут в 100-150-кратном избытке, а содержание сопряженных триенов определяют при 268 нм.

Таблица 1

Условия опыта Возраст D „ „, обсле- липидов дуемых 2бв (мг липидов

0,49+0,03

0 52+0 05

1,29+0,03

1,37+0,06

1,38+0,04

Экстракция

250-кратным избытком ра- 21 створителя из

0,02 мп капил- 20 лярной крови

0,54+0,04

20 1,39+0,03

1,39+0 05

1,43+0 05

1,46+0,04

1,47+0,05

1,58+0,03

1,62+0,04

1,66+0,06

1,68+0 05

20

21

22

22

Среднестатистическое значение

0,62+0,08

20-22 1,47+0, 10 ческую плотность при 232- и 268 нм и концентрацию липидов гравиметрически. !

Получают среднестатистические показатели концентрации продуктов ПОЛ венозной крови для исследуемой возрастной группы рабочих равные 1,94+ центрация липидов в 1 мл гептанового экстракта равна 0,18+0,02.мг.

fO

Результаты определения концентрации продуктов ПОЛ эритроцитов венозной крови в соответствии с примером

3 приведены в табл. 3.

Примечание к табл. 1-3:

15 ,Данные сгруппированы в порядке увеличения. Число повторений каждого анализа равно 3.

0,52+0,04

0,54+0,05

0 58+0 05

0,64+0,03

0,63+0,05

0,70+0,04

0,72+0,04

0,74+0,05

0,74+0,05

1303938

Таблица 2

Условия опыта

266 (мг, липидов

23 2 lмг липидов

Возраст обследуемых

0,72+0,04

0,76+0,04

0,73+0,05

0,78+0)05

0,79+0)03

1,75+0,04

1,78+0,04

1,80+0,03

1,80+0,05

1, 81+0, 03

1,86+0,05

1,90+0,05

1,98+0,03 .

2,01+0,03

2,04+0,04

2,04+0,05

2,07+0,02

Экстракция

500-кратным избытком растворителя из

0,02 мл венозной крови

20

22

0,88+0,05

0,85+0,04

0,90+0,03

0,96+0,03

0,94+0,05

0,98+0,05

0,99+0,03

20

21

Таблица 3

Вб8Ьег липидов

1,78+0,03

1,79+0,06

1,80+0,04

Экстракция

100-кратным избытком растворителя из 0,1 мл эритроцитов венозной крови

0,72+0,02

0,81+0,05

0,85+0,04

0,83+0,04

0,89+0,06

1,80+0 05

1,81+0,05

Среднестатистическое значение 20-22 1,91+0,11 0,86+0,09 1303938

Про олжение табл.Э

0,89+0,03

1,86+0,03

1,93+0,02

1,98+0,05

2,01+0,06

0,98+0,06

20

2,02+0,04

22

22

21

Среднестатистическое значение 20-22

0,94+0,08

1,94+0, 10

Составитель H. Гуляева

Редактор А, Ревин Техред И.Попович Корректор Л. Патай

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

2,03+0,04

2,03+0,06

2 05+0 03

2,06+0,04

2,08+0,04

Заказ 1303/45 Тираж 777 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, F-35, Раушская наб., д. 4/5

0,97+0,ОЭ

0,98+0,04

0,99+0,04

0,99+0,05

1,0 +0 07

1, 01+0, 03

1,06+0,05

1,08+0,04