Способ размножения чая @ @

Способ размножения чая @ @

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Целью изобретения является оздоровление исходного материала для размножения при сохранении его жизнеспособности . Вычленяют эксплантанты и их в водный раствор, содержащий 1,5-2,0% переки-си водорода и 50-60% этанола на с. Затем эксплантанты помещают в 0,05-0,20%-нык водный раствор диоцида на 5-10 мин. Эксплантанты культивируют при люминесцентном освещении 3000 лк, 16-часовом фотопериоде и . 4 табл. со Ч СО

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЩ4АЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН аи 4 А 01 Н ЗОО

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ Т в ) 4

ГОСУДАРСТ8ЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР пО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (2 1) 3868024/30- 1 5 (22) 10.01.85 (46) 23.05.87. Бюл. № 19 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт кормов им. В. P. Вильямса и Всесоюзное научно-производственное объединение по чаю и субтропическим культурам (72) О. К. Таварткиладзе и A. В. Мезенцев (53) 581.143.6 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 679190, кл. А 01 Н 3/00, 1979.

„„SU„, 1311673 А1 (54) СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ ЧАЯ IN

VITR0 (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству. Цельк> изобретения является оздоровление исходного материала для размножения при сохранении его жизнеспособности. Вычленяют эксплантанты и помещают их в водный раствор, содержащий 1,5 — .?,0% перекиси водорода и 50 — 60% этанола на

10 — 15 с. Затем эксплантанты помен ают в 0,05 — 0,20% ныи водный раствор диоцида на 5 — 10 мин. Зксплантанты культивируют при люминесцентном освещении 3000 лк.

16-часовом фотопериоде и 24I-! С. 4 табл.

1311673

Стерилизующий Концентрация Экспозиция, Инфициро- Жизнесповодный раствор стерилента, мин ванность, собность, Е по объему 7. 7

Перекись водорода

85,4

97,1

Перекись водорода

2,0

96,4

73,2

6,0

71,7

51,6

12,0

48,1

54,8

50

79,2

81,3

Этанол

68,4

76,8

52,7

63,6

58,3

57,5

96,4

72,5

Дионид

69,6

95,1

0,1

0,2

67,2

96,3

0,2

44,1

90,7

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции и семеноводстве, в исследованиях по фитопатологии и морфогенезу растений.

Цель изобретения — оздоровление исходного материала для размножения при сохранении его жизнеспособности.

Пример. Проводится размножение и оздоровление чая сорта Грузинский № 6. Неодревесневшие побеги стерилизуют 12 с в растворе, содержащем по объему 1,5% перекиси водорода и 50% этанола (остальное вода), а затем 6 мин в 0,1%-ном водном растворе диоцида. При этом от 1000 фрагментов с почками получают 937 эксплантаПоложительный эффект достигается только при последовательном применении двух стерилизующихся растворов: перекиси водорода с этанолом и диоцида, При этом оптимальные концентрации составляют для перекиси водорода 1,5 — 2,0%, этанола 50 — 60%, диоцида 0,05 — 0,2% а экспозиция для первого стерилизующего раствора составляет

10 — 15 с, для второго 5 — 10 мин или 300—

600 с (табл. 2}. При уменьшении концентрации стерилентов выход асептического материала значительно снижается, а жизнетов, свободных от фитопатогенной инфекции, т. е. инфицированность составляет всего

6,3%. Жизнеспособность неинфицированных эксплантатов, которая определяется по отсутствию повреждений, вызванных стерилентами, и способности к пролиферации, составляет 92,7% (из 937 эксплантатов 869 жизнеспособны). При стерилизации черенков отдельными стерилентами (перекисью

10 водорода, этанолом и диоцидом) в рекомендуемых дозах и экспозициях получить достаточное количество неинфицированного жизнеспособного материала не удается, Данные о влиянии отдельных стерилентов на инфицированность и жиэнеспособ15 ность эксплантатов чая приведена в табл. 1.

Таблица 1 способность эксплантатов практически не увеличивается. Повышение концентрации

50 стерилентов или увеличение времени выдерживания черенков в стернлиэующих растворах приводит к резкому снижению жизнеспособности эксплантатов без существенного увеличения выхода асептического материала.

Данные о влиянии концентрации и экспозиции двух стерилизующих растворов на инфицированность и жизнеспособность эксплантатов чая приведены в табл. 2.

1311673

Таблица 2

Стерилиэующий водный раствор

Жизнеспособность, у.

Инфицированность, й

Экспозиция, с

Концентрация стерилента, Ж по объему

2,0

1. Перекись водорода +

+ этанол

90,2

3 5

60,0

300

0,2

Диоцид

1,75

2. Перекись водорода +

+ этанол

91,0

4,2

55,0

450

0,12

Диоцид

1,5

3. Перекись водорода +

+ этанол

91,3

4,8

50 0

600

0,1

Диоцид

1 5

4. Перекись водорода +

+ этанол

95,3

9,1

50,0

360

0,05

Диоцид

1,0

5, Перкись водорода +

+ этанол

98,4

53,2

40,0

360

0,03

Диоцид

Та блица 3

Концентрация ВАП, мг/л

Показатели

0,1 0,3 0,5 1,О 1,5 2,0

Не образуются 9 1 44 35 37 45

Срок образования розеток почек, сут

Среднее количество почек в розетке

1,8 5,3 5,8 5,4 4,3

Срок образования розеток из почек, сут

22 20 "15 24 30

Среднее количество побегов на 1 эксп1,6 5,1 5,7 5,2 4,1 лантат

Стерильные эксплантаты культивируют в пробирках с агаризованными средами MS, Вя, SN, в которых концентрацию сахарозы доводят до ЗО г/л, а рН до 5,5, В среды

В5 и SH, не содержащие нитрата аммония, добавляют его в количестве 0,25 г/л. В качестве фитогормона используют БАП в концентрации 1 мг/л. При снижении его концентрации увеличиваются сроки образования адвентивных почек и уменьшается их количество (табл. 3). Увеличение концентрации БАП приводит к ингибированию развития побегов из почек.

Данные о влиянии различных концентраций БАП на морфогенез в культуре чая приведена в табл. 3.

1311673 таблица 4

Показатели эффективности известный предлагаемый

Расход исходных черен— ков на получение

1000 саженцов

1100

Коэффициент размножения за - месяца

333

0,9

Потрсбггость в тел:гичной лггощади, м

1,2

12,0

Стон

9,0

С . оггмость дитэтеггвных сред, руб

6,3

Расход зг-.ектрознергии, кит ч

240

1062

Затраты труда, человекодней

Фор.чула изобретения

Составитель С. Куваева

Редактор О. Ьугир Техред И. Верес Корректор М. Шароши

Заказ 1833г2 Тираж 530 Подписное

Г311ИИПИ Государственного комитета СГСР оо делам изобретений и открытий ! 13035, Москва, jt(-35, Раугцская наб., д. 415

Г1о<н:зводственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. 11роектная, 4

3ксплантаты культивируют при люминесцентном освещении 3000 лк. При освещении ниже 2000 лк почкованис замедляется на 2--3 недели, а при освещенности выше

4000 лк развитие побегов из почек инrèáèруется. Эксплантаты культивируют при 16гасовом фотопериоде (8 ч темнота). При

12--14 ч/сут. фотопериоде образование почек и развитие из них побегов замедляется на 15 — 20 дней, а при фотопериоде более

l8 ч/сут различий в почковании и развитии побегов по сравнению с 16 — 18 ч/сут фотопериодом не отмечается, однако расход электФрагменты с почками помещают для дальнейшего размножения на питательные среды того же состава. Во втором цикле выращивания (50 сут) каждый эксплантат также образует по 5 — -6 побегов. Всего за 100 дней культивирования от каждого исходного эксплантата получают в среднем по 162 побега. Не выявляются существенные различия в почковании и развитии побегов при использовании питательных сред различного состава (Вв, MS, SH).

Для получения растений побеги пересаживают на питательные среды без БАП, где они в течение 3 недель укореняются и образуют по 4 — 5 листьев. Затем полученные растения высаживают в почву, укрывают на 2 недели полиэтиленовой пленкой и после этого выращивают в обычных условиях.

РОЭНЕРГИИ СУГЦЕСтВЕггНО ПОВЫШаЕтСЯ. ЗКСплантаты инкубируют при 24 1 С. При температуре ниже 22"С развитие почек и побегов замедляется на 10 — 14 дней, а при температуре ниже 16 С полностью прекращается. Температура выше 28 С ингибирует развитие почек и побегов, а при 32 — 34 С эксплантаты погибают.

Сравнительная характеристика эффективности размножения чая традиционным и предлагаемым способом (в расчете на

1000 саженцев) приведена в табл. 4.

Растения нормально растут и развиваются, свободны от фитопатогенной инфекции и морфологически не отличаются от исходного клона.

Способ размножения чая in vitro, включающий вычленение эксплантатов, их стери-. лизацию и культивирование на питательной среде, отлииагощийся тем, что, с целью оздоровления исходного материала для размножения при сохранении его жизнеспособности стерилизацию эксплантатов осуществляют путем их помещения в водный раствор, со50 держащий 1,5 — 2,0% перекиси водорода и 50 — 60% этанола, на 10 — 15 с, а затем в 0,05 — 0,20%-ный раствор диоцида на ."

10 мин.