Способ получения пептидов
Патент 1316565
Авторы
Классы МПК
Способ получения пептидов
Иллюстрации
Реферат
Изобретение касается пептидов (ПТ), в частности соединений общей формулы H-Tyr-D-Ala-Phe-BrC-W, где B-Giy, Sar, Phe; C-Tyr, D-TyrJ Leu, Met, Met(O), Pro, Ser, Tyr(Bzl)-Pro, Tyr-Pro, Tyr-Ser, Pro-Ser, Tyr-Pro- Ser, Tyr(Bzl)-Pro-Ser, Tyr-Hyp-Ser, Tyr-Hyp-Ser(Bzl), Tyr(Bzl)-Val-Ser, Tyr-Gly-Ser, Phe-Hyp-Ser, Tyr-Pro- Ser, Phe-Pro-Ser, Phe-Hyp-Ser(Bzl), Gly-Pro-Ser, Tyr-Pro-Gly, Tyr(Bzl)- Pro-Ser(Bzl), Tyr-Pro-Ser(Bzl); W-OH, OCH,, NHj, NHR, , NH-NH, Ш- NHRj, где R, - GH,, C,H, ,, адамантил; R - бензилоксикарбонил или фенил, которые обладают анальгетической активностью и могут быть использованы в медицине. Цель - создание новых более активных пептидов. Получение ПТ ведут по следующей схеме: Вос-В-ОН + H.jN-NHZ- -(K)- Boc-B- -NH-NHZ - (ОТЩ)-H-B-NH-NHZ + Boc-Phe-OH- (К) -Boc-Phe-B-NH-NHZ- (ОТЩ)- H-Phe-B-NH-NHZ + Boc-D-Ala- ОН- (К) -Boc-D-Ala-Phe-B-NH-NHZ- - XOTDl)-H-Boc-D-Ala-Phe-B-NH-NHZ + Boc-Tyr-OH- Boc-Tyr-D-Ala-Phe-B-NH- -NHZ--(ГД)-- Boc-Tyr-D-Ala-Phe-B-NH-NHj + Н-Д-E-F(KA3), где К конденсация , которую проводят методом смешанных ангидридов в среде диметилфорнамида или тетрагидрофурана при (-15) - (+25)°G в присутствии этилхлорформиата; ОТЩ - отщепление защитной группы Z при обработке раствором ЙС1 в CHjCOOH или тетрагидрофуране; ГД - гидрогенолиз в присутствии 10%-ного Pd/G в среде метанола или диметилформамида; КАЗ - конденсация по азидному методу в присутствии н-бутилнитрита и HG1 в среде . диметилформамида или тетрагидрофураСУ ) со о: СП Од СП см
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
NW
РЕСПУБЛИК
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblT (21) 2983143/23-04 (22) 19.09.80 (31) 32590/79, 15412/80 (32) 20,09.79, 09.05.80 (33) IT (46) 07.06.87. Бюл. ¹ 21 (71) Фармиталия Карло Эрба С.п.А.(IT) (72) Роберто де Кастильоне, Фьоренцо
Фаоро, Джузеппе Персео, Сильвано
Пьяни и Франческо Сантанджело (IT) (53) 547.964.4.07(088.8) (56) Gyang E.А., Kosterlitz Н.W, Agonist and antagonist actions of
morphine-like drugs on the guineapig isolated ileum. — Brit. J.Pharmac. Chemother. 1966, v. 27, р.514.
Hughes J., Kosterlitz НЛ,, Lesli F.W. Effect of morphine and
adtenergie transmission in the
mouse vas diferens. Assessment of
agonist and antagonist potencies of
narcotic analgesics. — Br.J.Pharmac., 1975, v. 53, р. 371.
Chermant R., Simon P, Injection
intravertrieulaire cerebrale chez
les rat anasthesie. — J.Pharmac, Paris, 1975, v. 6, р. 489, D Amour F.Е., Smith D.L. А method
of evaluating analgisie activity in
the rat, — J.Pharmac. exp. Ther., 1941, v. 72, р. 74.
Ашмарин И.П. и др. Олигопептиды мозга — аналептики, стимуляторы памяти и сна. — Молекулярная биология, 1978, № 12, с. 965. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ (57) Изобретение касается пептидов (ПТ), в частности соединений общей
„,SU„„1316565 А3 цу.4 С 07 К 7/06 А 61 К 37/02 формулы Н-Tyr-D-Ala-Phe-В-С-W где
В-Gly, Sar, Phe, С-Tyr, D-Tyr, Leu, Met, Met(О), Pro, Ser, Tyr(Bz1) -Pro, Tyr-Pro, Tyr-Ser, Pro-Ser, Tyr-ProSer, Tyr(Bzl)-Рго-Ser, Tyr-Hyp-Ser, Tyr-Hyp-Ser(Bz1), Tyr(Вг1)-VaI-Ser, Tyr-Gly-Ser, Phe-Нур-Ser, Туг-ProSer, Phe-Pro-Ser, Phe-Hyp-Бег(Вх1), Gly-Pro-Ser, Tyr-Pro-Gly, Tyr(Bzl)Pro-Ser(Bzl), Tyr-Pro-Ser(Bzl);
W-0Í, ОСН, NH NHR1, NH-NH Kадамантил R — бензилоксикарбонил г или фенил, которые обладают анальгетической активностью и могут быть использованы в медицине. Цель — создание новых более активных пептидов.
Получение ПТ ведут по следующей схеме: Вос-В-ОН + H N-МНŠ†(К) — Вос-B-NH-NHZ †(ОТЩ) — Н-В-NH-NHZ +
Вос-Phe-OH (К) «Вос-Phe;B-NH-МНЕ-» (0Tm} Н-Phe-В-NH-NHZ + Вос-D-Ala-OH â (К) — Вос-D-Ala-Phe-В-NH-NHZ
«(ОТЩ) Н-Вос-D-Ala-Phe-В-NH-NHZ +
4Вос-Tyr-OHBoc-Tyr-D-Ala-Phe-В- 1Н-NHZ (ГД) Вос-Туг-D-Ala-Phe-B-NH-ХН + Н-Д-Е-F (KA3), где К— конденсация, которую проводят методом смешанных ангидридов в среде диметилформамида или тетрагидрофурана при (-15) — (+25) С в присутствии этилхлорформиата; ОТ٠— отщепление защитной группы Z при обработке раствором НС1 в СН СООН или тетрагидрофуране; ГД вЂ” гидрогенолиз в присутствии 10Х-ного Pd/Ñ в среде метанола или диметилформамида; КАЗ вЂ” конденсация по азидному методу в присутствии н-бутилнитрита и НС1 в среде, диметилформамида или тетрагидрофурана при. (-30) — (+25) С, Вос — трет -бутилоксикарбонил; 2 — бензилоксикарбонил;  — указано выше; D-Tyr, D-Tyr, Leu, Met, Met(0), Pro, Ser, Tyr(Bzl), Gly, Phe, Trp; F — Ser, Ser(Bzl) Gly или простая связь;
Š— Pro, Ser, Нур, Gly, Ча1 или простая связь; W — указано выше. Получение фрагмента ведут по следующей схеме: Вос-Е-ОН + Н-F-W (К ). < Boc-Å-F-W (0Tfg ) H-Å-F-W +
Вос-D-OH — (К ) Вос-D-E-F-W (ОТЩ )-Н-В-Е-F-W, где К вЂ” конденсация методом смешанных ангидрицов в присутствии этилхлорформиата
1316565 или изобутилхлорформиата в среде диметилформамида или тетрагидрофуо рана при (-15) - (+25) С или карбоимидным методом в присутствии дициклогексилкарбодиимида и N-оксибензотриазола; ОТ٠— отщепление N-концевой трет-бутилоксикарбонильной группы обработкой НС1 в тетрагидрофуране или CF COOH при 0 С, причем если имеются боковые защитные группы, то их удаляют гидрогенолизом в присутствии 10 -ного Pd/Ñ в среде метанола или диметилформамида. Испытания
ПТ показывают высокую анальгетическую активность. 2 табл.
Изобретение относится к способу получения пептидов общей формулы
Н-Tyr-D-А1а-Phe-В-С-М, 5 где  — .Gly, $аг, Phe; .
С - Tyr, D-Tyr, Т.eu, Met, Met(0), Pro, Ser, Tyr-Pro, Tyr(Bzl)—
-Pro, Tyr-Ser, Pro-Ser,.
Tyr-Pro-Ser, Tyr(Bzj.)-Pro- tO
-Ser, Tyr-Hyp-Ser, Tyr-Hyp-Ser(Bzl), Tyr(Bzl) -Val-Ser, Tyr-Gly-Ser, Phe-Нур-Ser, Tyr-Pro-Бег, Phe-Pro-Ser, Phe-Hyp-Ser(Bzl), Gly-Pro-Бег
Tyr-Pro-Gly, Tyr-Pro-Ser(Bzl), Tyr(Bz1) -Pro-Ser(Bzl), W ОН ОСНз ИН2 NH R, NH NH
NH- NH-R где R — - CH» С Н, СН СГ, адамантил, R — бензилоксикарбонил, фенил, в виде хлоргидратов и/или трифторацетатов, которые могут найти применение в экспериментальной биологии и медицине.
Цель изобретения — способ получения новых пептидов, обладающих более высокой анальгетической активностью и низкой токсичностью.
В экспериментальной части исполь- ЗО зованы следующие сокращения: Ме — ме-, тил, Et — этил 2 — бензилоксикарбонил; Вос-трет-бутилоксикарбонил;
Bzl — бензил, Ad — адамантил, Met(0)метионин сульфоксид.
Значения R определяли на пластинках, покрытых силикагелем 60 F (Merck), толщина слоя 0,25 мм, длина пластинки 20 см, в следующих системах:
А Бензол — этилацетат — уксусная кислота — вода 10:10:2:1 (верхний слой)
Б Бензол — этилацетат — уксусная кислота — вода 100:100:
:40:15 (верхний слой)
В н-Бутиловый спирт — уксусная кислота — вода 4:1:1
Г Хлороформ — метиловый спирт—
32Х-ный гидроксид аммония
65:45:20
Д Хлороформ — метиловый спирт
8:2
Анализы методом ТСХ проводятся не в стандартных условиях, поэтому значения R> могут меняться, особенно при различных температурах. Температуру плавления определяют в открытых капиллярах без поправок. Большинство производных до плавления размягчается и разлагается. Растворители для кристаллизации, высаждения или смешения даны в скобках.
Бумажный электрофорез под высоким напряжением проводят на приборе феро раф Оридл инал-Франкфурт, тип 64
1316565
1О
15 (v) Вос-Phe-Gly-NH-NH-Z
35 (II) (vI) .Н-Phe-Gly-NH-NH-Z
3 на бумаге 11 - 2317 ф, "Гляген энд
Шулл" при напряжении 1600 В (40 В/см) и рН 1,2 (муравьиная кислота — уксусная кислота — вода 123:100:777), Значения электролитической подвижности (Е< ) приведены относительно этих величин для глутаминовой кислоты.
Пример 1. Н-Tyr-D-Ala-Phe-ь1у-Tyr-Prp -Ser-МН CF СООН.
Стадия
Вос-pro-Ser-NH (1) К раствору 1,00 г (4,65 ммоль)
Вос-Pro-NH в 10 мл безводного тетрагидрофурана последовательно прибавляют при -12 С 0,52 мл (4,65 ммоль)
N-метилморфолина и 0,45 мл 20 (4,65 ммоль) этилхлорформиата. Реакционную смесь перемешивают 2 мин при
-12 С и добавляют охлажденный раствор 0,48 г (4,65 ммоль) Н-Ser-NHz в 10 мл ДМФА. Реакционную смесь пе- 25 ремешивают при -10 С 3 ч и при 20 С
1 ч, осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме. Остаток кристаллизуют в системе метанол— эфир. 30
Получают 1,1 r (I) т.пя. 138 С, (е = -58,9 (С = 1, MeOH), К
0915; 0933 (В).
Стадия 2.
Н-Pro-Ser-NH СР СООН
1,0 г (3,3 ммоль) соединения (Т). растворяют при 0 .С в 10 мл трифторуксусной кислоты. Через 30 мин раст- 40 вор упаривают в вакууме. Продукт извлекают с помощью системы эфир— петролейный эфир.
Получают 1,0 г (II), т.пл. 48
50 С, В. = 0,10 (С) . 45
Стадия 3.
Вос-Tyr (Bz1) -Pro-Ser-NH z (III) К раствору 1,0 г (3, 2 ммоль) (II) 50 в 35 мл ДЕФА добавляют при 0 С 36 мл (3,2 ммоль) N-метилморфолина, 1,2 r (3,2 ммоль) Вос-Tyr(Bzl)-ОН, 0,43 г (3,2 ммоль) 1-оксибензотриазола и
0,73 r (3,2 ммоль) дициклогексилкар- 55 бодиимида. Реакционную смесь перемео шивают 1 ч при О С и в течение ночи при комнатной температуре. Выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат
4 упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор последовательно промывают насыщенным раствором NaC1 в 1 M лимонной кислоте, 1 М раствором NaHCO> и водой.
Органический слой сушат над безводным Ха SO и упаривают в вакууме.
Остаток кристаллизуют в системе этилацетат-петролейный эфир. Получают 1,4 r (Ш), т.пл. 1154С; (еа)
= -22, 9 (С = 1, МеОН); R =О, 20 (А) .
Стадия 4, Н-Туг(Вк1)-Рго-Ser-NH ° CF СООН (IV) Из 1 0 r (1 8 ммол ) тодике, изложенной на стадии 2, получают 1,0 г (IV), т.пл. 54-57 С (разл,), (еа), = -7,4 (С =, 1 MeOH), R = 0,59 (С) .
Стадия 5.
К раствору 1,0 г (3,8 ммоль)
Вос-Phe-OH в 10 мл безводного .тетрагидрофурана последовательно добавляют при -12 С 0,42 мл (3,8 ммоль)
М-метилморфолина и 0,3 мл (3,8 ммоль) этилхлорформиата. Реакционную смесь о перемешивают 2 мин при -12 С и до- бавляют охлажденный раствор 0,95 г. (3,7 ммоль) Н-Gly-NH-NH-Z НС1 и
0,4 мл (3,7 ммоль) Я-метилморфолина в 15 мл ДИФА. Реакционную смесь пео ремешивают 3 ч при -10 С и 1 ч при о
20 С, отфильтровывают осадок, фильтI рат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и несколько
pas последовательно промывают насыщенным раствором NaC1 в 1 М лимонной кислоте, 1 М раствором NaHCO> и водой. Органический слой сушат над безводным Na SO и упаривают в вакууме. Из остатка продукт извлекают с помощью системы метанол-диизопропиловый эфир.
Получают 1,4 r (V), т.пл. 143 С, (ос)„ = +5,6 (С = 1, МеОН), К
= 0,63 (А).
Стадия 6.
10 г (2,1 ммоль) (V) в течение
30 мин обрабатывают 10 мл 1,3 н. раствора НС1 в ледяной уксусной кислоте. Затем реакционную смесь упао ривают в вакууме при 30 С, остаток
S 131 растирают с эфиром. Получают 0,89 г (VI), т.пл. 178 С; (оЕ) = +45 (С
1, MeOH); R = О, 78 (С) .
Стадия 7.
Вос-D-Аlа-Phe-Gly-NH-NH-Z (VII)
Из 1,0 г (5,3 ммоль) Вос-D-Ala-OÍ и 2,09 г (5, 1 ммоль) (VI) аналогично ь стадии 5 получают 2,5 r (VII),ò.ïë.165 С
f<) z, = +8 (С = 1, MeOH),R =0,51 (A) Стадия 8.
Н-D-Аlа-Phe-Gly-NH-NH-Z НС1 (VIII)
Из 1,0 г (1,8 ммоль) (VII) аналогично стадии 6 получают 0,84 r (VIII) j т. пл, 180 С; (Ы) р = +О, 2 (С=
1, MeOH), Р = 0,75 (С).
Стадия 9.
Вос-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-NH-NH-Z (IX)
Из 1,0 г (3,5 моль) Вос-Tyr-ОН и
1,65 г (3,4 ммоль) (VIII) с помощью методики, изложенной на стадии S, получают 2,24 г (IX), т. пл. 148 С, job) = + 16,2 (С = 1, MeOH); R1
= 0,38 (АЭ.
Стадия 10.
6 вают три дня при -9 С, отфильтровывают осадок, фильтрат упаривают в вакууме, остаток перекристаллизовывают из системы метанол-этилацетатэфир. Полученный продукт подвергают хроматографической очистке на колонке с силикагелем "Мерк" 70-230 меш, с использованием в качестве элюента смеси этилацетат-метанол (8:2).
10 Получают 2,0 r (XI) т.пл. 135 С, (k) = -5,3 (С = 1; MeOH), Н
= 0,24 (В).
Стадия 12.
15 Вос-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Tyr-ProSer-НН (XII)
1,3 r (1,3 ммоль) (XI) в 20 мл о метанола гидрируют при 35 С в при20 сутствии 0,30 г 107-ного Pd/С. Затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме, остаток растирают с эфиром. Получают 1,1 г (XII), т.пл. 160-163 С (разл.);(<)
= -7 5 (С = 1, MeOH), К = 0 11) (В), 0,80 (С) °
Стадия 13.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Tyr-РгоЗ0 Ser-NH CF СООН (XIII) Вос-Tyr-D-Ala-Gly-NH-ИН (Х)
1,0 r (1,4 ммоль) (IX) в 10 мл метанола гидрируют В присутствии
0,27 r 107-ного Pd/С.Катализатор отфильтровывают,.фильтрат упаривают в вакууме, остаток растирают с этилацетатом. Получают 0,64 r (Х), с т. пл. 148 С, (о ) = +26,6 (С = 40
1, MeOH); R = 0,34 (B).
Стадия 11.
Вос-Tyr-D-Alà-Phe-Gly-Tyr(Вzl)—
-Pro-Ser-NH (XI) 45
К раствору 2,0 r (3,5 ммоль) (Х) в 20 мл безводного диметилформамида добавляют при -30 С 2,18 мл (8;75 ммоль) 4 í. НС1 в безводном теФагидрофуране и 0,45 мл (3,85 ммоль) н-бутилнитрита. Яеако ционную смесь перемешивают при -30 С
30 мин, добавляют 1 мл (8,75 ммоль)
N-метилморфолина, а затем охлажденный до -30 С раствор 1,66 r (2,91 ммоль) (IV) и 0,33 мл (2,91 ммоль)
N-метилморфолина в 40 мл диметилформамида. Реакционную смесь выдержи21,0 r (1, 1 ммоль) (XII) обрабатывают 30 мин при 0 С 10 мл трифторуксусной кислоты. Затем реакционный раствор упаривают в вакууме, остаток растирают с эфиром. В итоге получают 0,90 г (XIII), т.пл. 159-160 С, („= +5,5 (С = 1, ИеОН), R<
= 0,51 (C) .
Аминокислотный анализ: Ser 0,95 (1); Pro 0,97 (1); Gly 1,00 (1), D-Ala 1,00 (1), Tyr 1,91 (2); Phe
1,03 (1).
Найдено, 7.: С 64,60;. Н 5,86;
N 12,10.
C«H«NeO„ Рз
Вычислено, : С 55,02; Н 5,61;
N 12,22.
Пример 2, Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Tyr-ИН
xCF rOOH
Стадия 1.
Вос-Tyr-D-Аlа-Phe-Gly-Туг-NH (XiV)
К 2,74 г (4,8 ммоль) (Х) в 50 мл безводного диметилформамнда последо16565 (XVIII) Н-Ser-ИНИН-Z ° HC1
40 (XIX) 45 50
Стадия 1, (XVII) Вос-Ser-NHNH-Z вательно добавляют при -30 С 2,0 мл (12 ммоль) 6 н. НС1 в безводном тетрагидрофуране и 0,63 мл (5,28 ммоль) н-бутилнитрита. Реакционную смесь пео ремешивают 30 мин при -30 С, добавляют 1,34 мл (12 ммоль) N-метилморфоо лина при -40 С, а затем охлажденный до -40 С раствор 0,865 г (4,0.ммоль)
Н-Tyr-NHz НС1 и 0,456 мл (4,0 ммоль)
N-метилморфолина в 50 мл диметилформамида. Реакционную смесь оставляют. о на 7 сут при -10 С, упаривают до минимального объема, отфильтровывают осадок и из фильтрата высаживают продукт добавлением хлороформа. Полученный сырой продукт кристаллизуют из смеси метанол-хлороформ.
Получают 2,0 г (XIV), т.пл. 127129ОС; C<) р = +19,9 (С = 1, MeOH);
В.1 = 0%15 (А); 0956 (В) .
Стадия 2 °
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Tyr-ИН,х
CF, COOH (XV) 1,0 г (1,4 ммоль) (XIV) смешивают с 12 мл трифторуксусной кислоты.
Реакционную смесь выдерживают 30 мин о при 0 С, упаривают в вакууме, оста,ток растирают с эфиром, образовавшийся осадок отделяют и перекристаллизовывают из смеси изопропанол-эфир
Получают 0,94 r (XV) т.пл. 145—
146 С, (3z) = +25 ; C
Аминокислотный анализ: Gly 1,02 (1); D-Ala 1,00 (1); Tyr 1,96 (2);
Phe 1,00 (1).
Найдено, Ж: С 55,57; Н 5,35;
N 11,39; Р 7,65.
С Нз F N ь09
Вычислено, Х: С 55,73; Н 5,36;
И 11,47, F 7,78.
Пример 3.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Tyr-ProSer-NH-NH-Z (XVI) К 1,0 r (4,87 ммоль) Вос-Ser-ОН в 20 мл тетрагидрофурана последова- . тельно добавляют 0,55 мл (4,87 ммоль)
N-метилморфолина и 0,49 мл (4,87 ммоль) этилхлорформиата при о
-12 С. Реакционную смесь перемешивао ют при -12 С 2 мин и добавляют ох5
8 лажденный раствор 1,0 г (4,87 ммоль)
H N-NH-Z НС1 и 0,55 мл (4,87 ммоль)
N-метилморфолина в 20 мл ДМФА. Реакционную смесь перемешивают при
-10 С 3 ч и при 20 С 1 ч, отфильтровывают осадок, фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и полученный раствор несколько раз промывают последовательно насыщенным раствором NaCI 1 М лимонной кислотой, 1 М раствором
NaHCO и водой, сушат над безводным
Na SO< и упаривают в вакууме. Остаток очищают на хроматографической колонке с силикагелем, используя в качестве элюента систему хлороформметанол 98:2. Фракции, содержащие однородный по данным тонкослойной хроматографии продукт, объединяют и упаривают в вакууме. Остаток перекристаллизовывают из смеси эфир-петролейный эфир, Получают 1,4 г (XVII), т,пл. 4246 С, (о J = -25,8 (С = 1; МеОН), R< = 0,52 (А).
Стадия 2.
1,0 г (2,83 ммоль) (XVII) растворяют в 10 мл 4 н, раствора НС1 в безводном тетрагидрофуране, через 30 мин добавляют эфир, выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из смеси абсолютный этанол-эфир.
Получают О 7 г (XVIII), т.пл. 110115 С,(ь), =. +20,7 (С = 1, MeOH)
Rg = 0,49 (С), Е„= 1,16, Стадия 3.
Вос-Tyr(Bzl)-Pro-OH
1,0 (8,7 ммоль) Н-Pro-ОН растворяют в 4,35 мл 2 н. раствора NaOH. о
Раствор охлаждают до 0 С, разбавляют
10 мл ДИФА и упаривают в вакууме при
35 С. Остаток суспендируют в 10 мл
ДМФА и добавляют 4,3 r (8,7 ммоль)
Вос-Tyr(Bzl)-ONp. Реакционную смесь перемешивают 1 ч и упаривают в вакууме. Остаток растворяют в воде и несколько раз промывают этилацетатом.
Водный слой охлаждают до О С, подкисляют 5 н. соляной кислотой до рН 2,0 и экстрагируют этилацетатом.
Органический слой промывают до нейтральной реакции насыщенным раствором
NaCl в воде, сушат над безводным
Na SO< и упаривают, 1316565
Стадия 9.
5 (ХХ) Вос-Tyr-Pro-0H
1,0 r (2,13 ммоль) (XIX) в 15 мл метанола гидрируют в присутствии
0,27 r 10X Pd/С. Подле окончания гид- 10 рирования катализатор отфильтровывают, фильтрат разбавляют этилацетатом и упаривают в вакууме до образования осадка. Получают 0,7 г (ХХ),. т. пл. 136-138 С, $
Стадия 5 .. (XXI)
25
Н-Tyr-Pro-Ser-ИНИН-Z НС1 (XXII)
Из 1,0 r (1,63 ммоль) (XXI) по ме- : тодике, описанной на стадии 2 поо лучают 0,78 г (XXII), т.пл. 172-174 С (эфир); (a) -38,4 (С = 1,,MeOH), R(= 0,46 (С); Е, = 0,79. 35
Стадия 7.
Вос-Tyr-D-Аlа-Phe-Gly-Tyr-ProSer-NHNH-Z (XXIX)
К раствору 1,0 г (1,75 ммоль) (ХХЧТИ) в 15 мл безводного ДМФА последовательно прибавляют 1,1 мл (4,38 ммоль) 4 н. НС1 в безводном тетрагидрофуране и 0,2 мл (1,93 ммоль) о н-бутилнитрита при -30 С. Реакционо ную смесь перемешивают при -30 С
30 мин, добавляют 0,5 мл (4,38 ммоль) . N-метилморфолина, а затем охлажденный до -30 С раствор 0,803 г (1,46 ммоль) (XXII) и. 0,16 мл (1,46 ммоль) N-метилморфолина в 15 мл безводного ДМФА. Реакционную смесь
Получают 3, 7 г (Х?Х), т пл. 97—
100 С (разл), Pot) р = -15,7 (С
1, MeOH) RI = 0,70 (А), Е =0,35.
Стадия 4.
Вос-Tyr-Pro-Ser-NHNH-Z
Из 1,0 г (2,65 ммоль) (ХХ) и
0,77 г (2,65 ммоль) по методике, описанной на стадии 1, получают 1,46 г (XXI), т.пл. 116-118 С (эфир-петролейный эфир); (о ) „ = -46,5 (С = 1, МеОН); R = 0,17 (А), 0,37 (В).
Стадия 6.
Вос-Phe-G 1 y-NHNH-Z (XXI И) Из 1,0 г (3,8 ммоль) Вос-Phe-OH и 0,95 r (3,7 osis) H-Gly-NHNH-Z > ,«НС1 по методике, описанной на стадии 1, получают 1,4 г (XXIII), т.пл. 143 С (метанол-изопропиловый эфир); fee) д = +5,6 (С = 1; MeOH);
R = 0,63 (А) .
Стадия 8.
H-Phe-Gly-NHNH-Z НС1 (XXIV)
1,0 r (2,1 ммоль) (XXIII) растворяют в 10 мл 1,3 н. раствора НС1 в ледяной уксусной кислоте, через
30 мин раствор упаривают в вакууме при 30 С. Остаток растирают с эфиром. Получают 0,89 г (XXIV) ò.ïë.
178 С; (
Вос-D-Ala-Phe-Gly-NHNH-Z (XXV) Из 1,0 r (5,3 ммоль) Boc-D-Ala-OÍ и 1,09 r (5,1 ммоль) (XXIV) по методике, описанной на стадии 5 полуФ чают 2,5 г (XXV), т.пл. 165 С, foLJ „= +8,0 (С = 1; MeOH); R<
= 0,51 (А) .
Стадия 10, Н-D-Ala-Phe-Gly-NÍNÍ-Е НС1 (XXVI) Из 1,0 г (XXV) по методике, описанной на стадии 6, получают 0,84 г (XXVI) т.пл. 180 C; (cC) =.+0,2 (С = 1, MeOH), К- = 0,75 (С); Е, =
= 0,80.
Стадия 11.
Вос-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-ИНИН-Z (XXVII) Из 1,0 r (3,5 ммоль) Вос-Tyr-OÍ и 1,65 г (3,4 ммоль) (ХХЧТ) по методике, описанной на стадии 5 получао ют 2,24 r (XXVII), т. пл. 148 С (метанол-эфиР); (сс) = +16,2 (С = t;
MeOH) R = 0,38 (А) .
Стадия 12.
Вос-Tyr-D-Аlа-Phe-Gly-NÍNÍ (XXVIII) а
1,0 г (1,4 ммоль) (XXVII) в 10 мл метанола гидрируют в присутствии
0,27 r 10X-ного Pd/С. После окончания гидрирования реакционную смесь обрабатывают, как описано на стадии
4.Получают 0,64 r (XXVIII),ò.ïë.148 С;
fa) = +26,6 (С = 1; MeOH); R
=0 34 (В); E, = 0,57.
Стадия 13.
1316565 !2 о оставляют на два дня при -9 С, отфильтровывают образовавшийся осадок, фильтрат упаривают в вакууме и остаток смешивают с 107-ной лимонной кис° лотой, охлажденной до О С. Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают до нейтральной реакции водой, высушивают в вакууме и перекристаллизовывают из смеси этилацетат-эфир.
Получают 1,15 г (XXIX) т.пл. 140150 С; (ос) = -20,3 (С = 1; MeOH), Rg = 0,17 (В); 0,92 (С).
Стадия 14. осаждают иэ изопропанола эфиром.
Получают 0,76 r (XXXII) т.пл. 103105 С; (оС) р = +48,8 (С = 1; MeOH), R = 0»70 (С)» Е,,г = 0»92 °
20 Стадия 3.
Из 1,0 г (0,95 ммоль) (XXIX) по методике, описанной на стадии 2, получают 0,89 г; т. пл. 170 С (разл., этилацетат); W = -1,8 (C = 1, MeOH); (М) = +1,0 (С = 1, AcOH);
R = 0,69 (С).
Аминокислотный анализ: Ser 0,97 (1), Pro 0,98 (1), Gly 1,01 (1);
D-Ala 0,99 (1); Tyr 1,95 (2); Phe
i 0 (1).
Найдено, Ж: С 58,21; Н 5,99;
N 12,69; Cl 3,63.
С в Н gs CINE 0
Стадия 1.
Вос-Tyr-NÍNÍ-Z (ХХХ1) К раствору 1,0 г (3,55 ммоль)
Вос-Tyr-OH в 20 мл безводного ДМФА тетрагидрофурана последовательно прибавляют 0,4 мл (3,55 ммоль) N-метилморфолина и 0,48 мл (3,55 ммоль) изобутилхлорформиата при -12 С. Реакционную смесь перемешивают 2 мин при -12 С, добавляют охлажденный раствор 0,72 r (3,5 ммоль) H N-NH-Z»
«НС1 и 0,4 мл N-метилморфолина в
20 мл ДЙФА. Реакционную смесь перео мешивают при -10 С 90 мин, отфильтровывают образовавшийся осадок, фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и полученный раствор несколько раз последовательно промывают водным раст(ХХХ) Из 1,0 r по методике получают О, ацетат), т.
= +19,9 (С
Е, = 0,52 °
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Tyr-ProSer-ИНИН, НС1
Вычислено, X: С 58,32; Н 5,91;
N 12,75; Сl 3,51.
Пример 4.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Tyr-NÍNÍ-Z»
«НС1 (ХХХ) 25 30
50 вором 1 M лимонной кислоты, 1 M раствором. NaHCO и насьпценным раствором NaC1. Органический слой сушат над безводным Na,SO и упаривают.
Получают 1,3 r (XXXI) т,пл. 68-70 С; (N) „= -5,85 (С = 2; MeOH); R =
= 0,76 (А) .
Стадия 2.
Н-Tyr-ИНИН-Z"ÍÑ1 (XXXI I) 1,0 г (2,33 ммоль) (XXXI) растворяют в 10 мл 4 н. НС1 в безводном тетрагидрофуране, через 30 мин раствор упаривают в вакууме и продукт
Во с- Tyr-D-Ala-Phe-G1y- Ty rИНИН-Z (XXXIII) К раствору 1,0 г (1,75 ммоль) (XXVII) в 15 мл безводного ДМФА носледовательно добавляют 1,1 мл (4,39 ммоль) 4 н. НС1 в безводном тетрагидрофуране и О, 2 мл (1, 93 ммоль) о н-бутилнитрита при -30 С. Реакционную смесь перемешивают 30 мин при
-30 С, добавляют 0 5 мл (4,38 ммоль)
N-метилморфолина, а затем охлажденный до -30 С раствор 0,535 г (1,46 ммоль) (XXXII) и О, 16 мл (1,46 ммоль) N-метилморфолина в 15 мл безводного ДМФА. Реакционную смесь выдерживают в течение трех дней при о
-9 С, отфильтровывают образовавшийся осадок, фильтрат упаривают в вакууме. Остаток смешивают с охлажден-. ной до О С 10Х-ной лимонной кислотой, выпавший осадок отфильтровывают, промывают до нейтральной реакции водой, сушат в вакууме и перекристаллизовывают из смеси изопропанол-эфир. Получают 0,85 г (XXXIII), т.пл. 137
150 С; jk) a = +3,8 (С = 1, MeOH);
Rl = 0,27 (А), 0,52 (В).
Стадия 4.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-ТугИНИН-Z«HC1 (1,5 ммоль) (XXXIII. описанной на стадии 2, 83 r (ХХХ) (разл., этилпл. 190-192 С;(<3 и — 1, MeOH); R < — — О, 81 (С), 1316565
Стадия 1.
13
Аминокислотный анализ: Gly 1,03 .(1); D-Аlа 0,98 (1); Tyr 1,96 (2), Phe 1,00 (1).
Найдено, %: C 59,61; H 5,81;
N 12ю20; Cl 4в49
Вычислено, %: С 59,73; Н 5,76;
N 12,19; Cl 4,41
Пример 5.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Ъ1у-Tyr ProNHò HCl (XXXIV) Вос-Tyr(Bz 1) -Pro-ИН z (XXXV)
Получают путем конденсации ВосTyr(Bzl)-ОНс Н-Pro-NH в присутствии т дицикгексикарбодиимида и N-оксибензотриазола в среде ДИФА.
Стадия 2.!
С Н N О
Вычислено, %: С 62,98; Н 6,54;
N 10,49.
Стадия 5.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Tyr-ProNH Нсl (XXXIV) Из соединения (XXXVIII) путем обработки раствором НС1 в этилацетате получают (XXXIV), т. пл. 200 С (этилацетат); R(= 0,58 (С); E = 0,59.
Аминокислотный анализ: Pro 1,00 (1); Gly 1,00 (1); D-Аlа 1,0t (1);
Tyr 1,98 (2); Phe 1,00 (t) .
Найдено, %: С 58,97; Н 6, 15, N 13,00; Cl 4,77.
Вычислено, 7.: С 59,08; Н 6,16;
N 13,03; Cl 4,78.
Приме р 6.
НС1 Н-Tyr (Bz1)-Pro-Инт (XKXVI)
Из (XXXV) по методике, описанной в примере 3 (стадия 2), получают (XXXVI), т,пл. 159-161 С (эфир), R4 = 0,5 (С).
Ст ия 3. ад
Вос-Tyr-D-Аlа-Phe-Gly-Tyr (Bz 1)Рго ИН (XXXVI I) Из соединений (Х) и (XXXVI) по методике, описанной в примере 1 (ста- 35 дия 11), получают (XXXVII), т.пл, 143 С (эфир); RI = 0,47 (В).
Аминокислотный анализ: Pro 0,98 (1); Gly 1,00 (1); D-Ala 1,02 (1);
Туг 1,96 (2); Phe 1 ° 00 (1) . 40
Найдено, %: С 64,89; Н 6,66;
N 10,87
С Н N О
Вычислено, %: С 64,95; Н 6,56;
N 10,82. 45
Стадия 4.
Вос-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-TyrPro-%12 (XXXVI I I) -Из (XXXVII) по методике, описанной
50 в примере 1 (стадия 12), получают (XXXVIII), т.пл. 170-175 С (раэл., диизопропиловый эфир), R =0,24 (В) .
Аминокислотный анализ: Pro 1,00
;;(1) т Gly 0 98 (1); D-Ala 0 97 (1);
Tyr 1,92 (2); Phe 1,02 (1).
Найдено, %: С 62,71; Н 6,45;
: N 10,41
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Tyr(Bzl)Pro-ЫН Нсl (KXXIX) Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Tyr-Ser-NH ° CF3 СООН (хт.) Стадия 1. (х1.1) Вос-Tyr-Ser-NH
Из Вос-Tyr-OH и Н-Ser-NH по методике, описанной в примере 1 (стадия 1), получают (XLI), т.пл. 88—
90 С (эфир-петролейный эфир); Г. =
0,20 (А).
Стадия 2.
Н-Tyr-Ser-NH НС1 т (хт.11) Из соединения (XLI) по методике, описанной в примере 2 (стадия 2),,получают (XLII), т.пл. 117-120 С (метанол-эфир), R = 0,27 (С).
Из соединения (XXXVII) по методике, описанной в примере 5 (стадия 2), получают (XXXIX), т.пл. 180 С (эфир), R = 0,63 (С); Ef, = 0,53.
Аминокислотный анализ: Pro 1,00 (1), Gly 1,01 (1); D-Аlа 1,02 (1);
Туг 2,00 (2); РЬе 1,00 (1).
Найдено, %: С 62,66; H 6,19;
N 11 60 Cl 4,25.
С Н5г С1ИтОв
Вычислено, %: С 62,73; Н 6,22;
К 11,63; Cl 4,20.
Пример 7.
1316565
16
Стадия 3.
Из Вос-Нур-OH и соединения (XLVI) методом смешанных ангидридов с ис- пользованием изобутилхлорформиата в тетрагидрофуране получают(Х1,Ч?1), т.пл. 111 С (эфир-петролейный эфир), 0 13 (А), () з = -34 3 (С
1, MeOH) .
Стадия 4.
Из соединения (XLVII) по методике, описанной в примере 1 (стадия 2) получают (XLVIII), т.пл. 181-182 С (метанол-эфир); R = 0,32.(C}, Стадия 5.
Из Вос-Tyr(Bzl)-OH и (XLVIII) методом активированных эфиров получают (XLIX), т.пл. 130 С (метанол-этнлацетат-эфир); R = 0,46 (В); (сс) 9
= -5,7 (С = 1; МеОН) .
Стадия 6.
Н-Tyr(Bzl)-Нур-Ser(Bzl)-NH (Ь) Из соединения (XLIX) по методике, описанной в примере 1 (стадия 2), получают (LI) т.пл. 67-69 С (эфирпетролейный эфир); R< = 0,52 (C);
Е .,г
Стадия 7.
Стадия 1.
Вос-Ser-NH, Вос-Ser (Bzl)-NHz (нл) (Х? Ч) Из Вос-Ser(Bzl)-OH и NH> методом 45 смешанных ангидридов с использованием этилхлорформиата в тетрагидрофуране получают (ХТЧ), т.пл. 97 С (этипацетат-эфир) Rg = 0,82 (В);
5 3 = +19,9 (С = 1; МеОН). 50
Стадия 2.
Вос-Туг-0-Аlа-Phe-Gly-TyrSer-NHz (XLIII)
Иэ соединений (Х) и (XLII) по методике, описанной в примере 1 (стадия 11), получают (XLIII), т.пл.110 С (этилацетат); R g = О, 15 (В), О, 83 (С) .
Аминокислотный анализ: Ser 0,99 (1); Gly 1,00 (1), D-Аlа 1,02 (1);
Tyr 1,98 (2); Phe 0,99 (1) .
Найдено, Х: С 59,70, Н 6,43, N 12,20.
4оНя И О<
Вычислено, X: С 59,64; Н 6,38;
N 12,17.
Стадия 4.
Н-Tyr-0-Аlа-Phe-Gly-Tyr БегСР СООН (Х1.)
Из соединения (XLIII) по методике, описанной в примере 1 (стадия 12), получают (XL) т.пл. 150-153 С (эфир)
Rg = 0,59 (C); E, = 0,57; joc7
= +25,6 (С = 1; 11еОН).
Аминокислотный анализ: Ser 0,9? (1), Gly 1,00 (1); D-Ala 1,01 (1);
Tyr 2,00 (2); Phe 1,03 (1) .
Найдено, .7.: С 54,12; Н 5,30;
N 11 83 Р 6,90.
С Н Р, Nz 0«
Вычислено, Х: С 54, 21; Н 5, 41;
N 11,96, F 6,95.
Пример 8. 35
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Tyr-HypSer-NH НС1 (Х1ЛЧ) г
Н-Sei(Bzl)-МНг СР СООН (XLVI) Из соединения (XLV) по методике, описанной в примере 1 (стадия 2) е
Ф получают (XLVI) т.пл. 98 С (эфирдиизопропиловый эфир); R> = 0,44 (С);
Е„ = 1.33.
Стадия 3.
Вос-Нур-Ser(Bzl)-NHг (XLVII) Н-Нур-Ser(Bzl)-NHz CF COOH (XLVIII) Вос-Tyr (Bz1) -Hyp-Ser (Bz 1) -NH (XLIX) Вос-Tyr-D"А1а-Phe-Gly-Tyr Нур-Ser-NHz (LII) Из (LI) по методике, описанной в примере 1 (стадия 12), получают (LII), т.пл. 156-160 С (этилацетатэфир); R = 0,75 (С); (ос) = -1,4 (С = 1, MeOH).
Аминокислотный анализ: Нур 0,98 (1); Ser 0,98 (1); Gly 1,05 (1);
D-Ala 1,01 (1); Tyr 1,97 (2); Phe
1,00 (1).
Найдено, X: С 5863; Н 6,15;
N 11,90.
C sHse Ne0 ç
Вычислено, 7: С 58, 81; Н 6, 36;
N 12,19.
Стадия 8.
НС1 Н-Tyr-D-А1а-Phe-Gly-Tyr-Нур-Ser-МН (LIII) 17
1316565
Стадия 1. (LVI) Вос-Tyr-Ual-OMe
Стадия 1. (LVII) Вос-Tyr-Val-ОН
Вос-Tyr-Val-Ser NH
2 (LVIII) Из (LII) обработкой раствором
НС1 в тетрагидрофуране получают . (LIII), т.пл. 210-220 С (изопропанол-эфир); Р Z = 0,44 (C) 0,66 (D)
Е,. = 0,51; (ы) „= +10,1 (С = 1;
МеОН).
Аминокислотный анализ: Нур 0,96 ,(1), Ser 0,96 (1); Gly 1,07 (1);
D-Ala 0,97 (1), Tyr 1,97;Phe 1,00 (1)
Найдено, %: С 55,72; Н 5,86;
N 12,82.
С„Н, С1НвО„
Вычислено, %: С 56, 17; Н 6,01;
N 13,10.
Пример 10.
Н-Tyr-D-Аl а-Phe-Gly-Tyr (Bz 1)—
Нур-Ser(Bzl)-ИН НС1 (1ЛЧ) Из (LII) по методике, описанной в примере 8 (стадия 8), получают (LIV), т.пл. 175-180"C (метанол-эфир); R> =
= 0,67 (С), E,2 = 0,44; о ) =+10,3 (С = 1, NeOH) .
Аминокислотный анализ: Нур 0,97 (1); Ser 0,95 (1); Gly 1,03 (1);
D-Ala 0,98 (1); Tyr 1,96 (2); РЬе
1,00 (1) .
Найдено, %: С 62,04; Н 5,89;
N 10,61.
С„Н, С1пвО„
Вычислено, %: С 62 63 Н 6,13;
N 10,82.
Пример 11.
CF СООН Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly- з
Tyr-Чаl-Ser-NH2 (1.Ч) Из Вос-Tyr-OH и НС1 Н-Val-OMe методом смешанных ангидридов с использованием этилхлорформиата в диметилформамиде получают (LVI).
Стадия 2.
Иэ (LVI) путем обработки 1 н. раствором NaOH получают (LVII).
Стадия 3.
Из Н-Зег-ИН2 и (LVII) по методике, описанной в примере 1 (стадия 1), получают (IVIII), т.пл. 190-195 С (метанол-диизопропиловый эфир).
l8
Стадия 4.
CF COOH Н-Tyr-Val-Ser-NH (LIX)
3 г
Из (LVIII) по методике, описанной в примере 1 (стадия 2), получают (LIX), т. пл. 114-116 С (изопропанолэтилацетат).
Стадия 5.
Вос-Tyr-D-Ala-РЬе-С1у-Tyr-ValSer-ИН2 (1.Х)
Из соединений (Х) и (?.?Х) по методике, описанной в примере 1 (ста15 дия 11), получают (LX), т.пл. 230 С (диизопропиловый эфир);2 =0,47 (Е).
Аминокислотный анализ: Ser 0,97 (1); Gly 1, 05 (1), D-Ala 1,00; Val
0,95 (1); Tyr 1,94 (2); Phe 1,04 (1).
Найдено, %: С 59,61; Н 6,57;
N 12,30.
С45 НьФ И8012
Вычислено, %: С 59,72; Н 6,68;
N 12,38.
Стадия 6.
CF СООН Н-Туг-D-Ala-Phe-Gly3
Tyr-Чаl-Ser-ИН2 (LV) Из соединения (LX) по методике, описанной в примере 1 (стадия 13), получают (LV), ò.ïë.203-206 С (эфир), E
Аминокислотный анализ: Ser 0,95 (1); Gly 1,00 (1), D-Аlа 1,07 (1);
35 Ча1 0,95 (1); Tyr 1,95 (2); Phe
1,00 (1) .
Найдено, %: С 54,66; Н 5,71;
N 12,15; F 6,05.
С Н F NaO<2
Вычислено, %: С 54,89; Н 5,81;
Н 12,19, F 6,20, Пример 12.
СР СООН Н-Tyr-D-Ala-РЬе-Gly45
Tyr-Gly-Ser-NH
2 (LXI) Вос-Gly-Ser-NH2 (1.XII)
Из Вос-Gly-OÍ и H-Ser-NH по методике, описанной в примере 1 (стадия 1), получают. (LXII).
Стадия 2.
HCl Н-Gly-Ser-NHi (LXIII) Из (LXII) обработкой раствором
НС1 в тетрагидрофуране получают (LXIII).
1316565
Стадия 3.
Вос-Tyr-Gly-Ser-NH г (LXIV) Стадия 1; (ьхч1п) Вос-Phe-Pro-Ser-NH г
Из Вос-Tyr-ÎÍ и (LXIII) по методике, описанной в примере 1 (стадия
1), получают (LXIV), т.пл, 66-68 С (этилацетат-эфир); R = 0,57 (С).
Стадия 4 °
НС1 Н-Tyr-Gly-Ser-МН (LXV) Из (LXIV) обработкой раствором
НС1 в тетрагидрофуране получают (LXV), т.пл. 84-86 С; R =0,16 (0).
Стадия 5.
Во с- Tyr- D-Al a-Phe-G ly- TyrGly-Ser-ИН (LXVI)
Из соединений (Х) и (ЬХ7) по методике, описанной в примере 1 (стадия 11), получают (LXVI), т.пл.245250 С (эфир-петролейный эфир); К
= 0,79 (С), 0,15 (В).
Аминокислотный анализ: Ser 0,96 (1), Gly 2,04 (2); D-Ala 1,00 (1);
Tyr 1,96 (2); Phe 1,03 (1) .
Найдено, 7.: С 58,41; Н 6,29, N 13,02 °
С гН Ив О, Вычислено, 7.: С 58 48; g 6,31;
N 12,99.
Стадия 6.
CF> СООН Н-Tyr-D-Alа-Phe-GlyTyr-Gly-Ser-ИНг (LXI) Из соединения (LXVI) по методике, описанной в примере 1 (стадия 13), получают (LXI) т.пл. 180-190 С (эфир); R = 0,51 (С), 0,73 (D), Е,г = 0,52, (<1 >
Аминокислотный анализ: Ser 0,97 (1), Gly 2,04 (2); D-Ala 1,05 (1);
Tyr 2,00 (2); Phe 1,00 (1) .
Найдено, 7.: С 53,54; Н 5,57;
N 12,74; F 6,39.
М 47 3 8
Вычислено, 7: С 53 45; Н 5,41;
N 12,79; F 6,50.
Пример 13.
Н-Tyr-D-Аlа-Phe-Gly-Phe-ProSer-ИН НС1 (LXVII) 20
Из Вос-Phe-ОН и соединения (II) по методике, описанной в примере 5 (стадия 1), получают (LXVIII) т.пл.
140-142 С (этилацетат-эфир).
5 Стадия 2
CF COOH H-Phe-Pro-Ser-NH (LXIX) 1 г
Из (LXIX) по методике, описанной в примере 1 (стадия 2), получают (LXIX), т.пл. 93-96 С (этилацетатэфир).
Стадия 3 °
Вос-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Phe-РгоБег-NHг (т.хх) Из соединений (Х) и (LXVIII) по методике, описанной в прийере 1 (ста дия 11), получают (LXX), т.пл.155- . !
160 С (метанол-этилацетат), R =0,16 (В), 0,80 (С).
Аминокислотный анализ: Ser 0,98 (1), Pro 1,04 (1); Gly 1,03 (1);
D-Аlа 1,02 (1); Tyr 1,03 (1); Phe
2,00 (2).
Найдено, 7.: С 60,41; Н 6,35;
N 12,31.
Вычислено, Ж: С 60,94; Н 6,59;
N 12,63.
Стадия 4.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Phe-ProSer-NH HCl (LXVlI) Из соединения (LXX) по методике, описанной в примере 8 (стадия 9), 4р получают (LXVII), т.пл. 190-195 С (метанол-эфир), R< = 0,39 (С), E,,z =, = 0,52; () = +4,4 (С = 1, МеОН).
Аминокислотный анализ: Ser 0,94 (1), Pro 1,04 (1), Gly 1,02 (1);
D-Ala 1,03 (1); Tyr 1,03 (1); Phe
2,00 (2) .
Найдено, 7.: С 57,98; Н 6,33;
N 13,15; Cl 4,18.
Вычислено, 7 : С 58,35; Н 6,24;
N 13,61; Cl 4,31.
Пример 14, НС1 Н-Tyr-D-Аlа-Phe-Gly-PheHyp-Ser-NHz (LXXI ) Стадия 1.
Вос-Phe-Нур-Ser(Bz1) -NH (LXXII) 13
Из Вос-Phe-OH и соединения (XLVIII) по методике, описанной в примере 5 (стадия 1), получают (LXXII), т.пл. 143-146 С (этилацетатпетролейный эфир).
Стадия 2.
Н-Phe-Hyp-Ser(Вк1)-NH x
АССР СООН (LXXII I) Из соединения (LUII) по методике, описанной в примере 1 (стадия 2), получают (LXXIII) т.пл. 70-72. С (метанол-эфир).
Стадия 3.
Вос-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Fhe-HypSer(Bz1)-ИН (ЬХХТЧ) Из соединений (Х) и (LXXII) по методике, описанной в примере 1 (стадия 11), получают (LXXIV), т.пл.140145 С (изопропанол-этилацетат); R
= 0,25 (В); 0,90 (С).
Аминокислотный анализ: Нур 0,96 (1), Ser 0,96 (1); Gly 1,01 (1); 1D-.Ala 0,99 (1), Tyr 0,98 (1); Phe
2,00 (2).
Найдено, : С 62,53, Н 6,61, N 11,37. Свгна4И80%4
Вычислено, : С 62,89; Н 6,50;
N 11,28.
Стадия 4.
Вос-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-PheHyp-Ser H (т.ххч) 16565 22 нол-этилацетат); R = 0,47 (С); Е, = 0,51; (е ), =+1,8 (С = 1, МеОН).
Аминокислотный анализ: Нур 0,97
5 (1); Ser 0,98 (1); Gly 1,04 (1);
D-Ala 0,98 (1); Tyr 1,01 (1); Phe
2,00 (2).
Найдено, : С 57 00; Н 6,19;
К 12,21; Cl 4,29.
Вычислено, .: С 57,24; Н 6,12;
N 13 35 Cl 4,22.
Пример 15, H-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Phe-HypSer(Bzl)-НН НС1 (LXXVI) Из соединения (LXX) по методике, описанной в примере 2 (стадия 5), получают (LXXVI), т.пл. 160-170 С (изопропанол-этилацетат); Rf = 0,65 (С); Е, = 0,50.
Аминокислотный анализ: Нур 0,98 (1); Ser 0,96 (1); Gly 1,03 (1);
D Ala 0,97 (1); Tyr 1,02 (1); Phe
2,00 (2).
Найдено, : С 60,47; Н 6,23;
N 12,13; Cl 3,95.
C„i H s C1Ne0„o
Вычислено, %: С 60,74; Н 6, 18; К 12,06; Cl 3,81.
Пример 16.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Trp-ProSer-NH -НС1 (LXXVII)
Стадия 1.
Из соединения (LXXIV) по методике, описанной в примере 1 (стадия
10), получают (LXXV), т.пл. 165
170 С (метанол-эфир); Rf= 0,75 (С).
Аминокислотный анализ: Нур 0,96 (1); Ser 0,98 (1); Gly 1,03 (1);
D-Ala 1,01 (1); Tyr 1,02 (1); Phe
2,00 (2.) .
Найдено, : С 59,63; Н 6,55;
N 12,49.
СФ Н Ив 012
Вычислено, : С 59, 86; Н 6, 47;
N 12,41.
Стадия 5.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Phe HypSer-NH ° HCl (LXXI)
Иэ соединения (LXXV) по методике, описанной в примере 3 (стадия 2), получают (LXXI), т.пл. 300 С (метаВос-Trp-Pro-Ser-NH (LXXVIII)
Из Вос-Trp-OÍ и соединения (II) по методике, описанной в примере 5 (стадия 1), получают (LXXVIII), о т. пл. 133-136 С (изопропанол-диизо45 пропиловый эфир) .
Стадия 2.
Н-Trp-Pro-Ser-NH ° НС1 (LXXIX)
Из соединения (ЬХХЧШ) по методике, описанной в примере 3 (стадия
2), получают (LXXIX), т.пл. 174—
176 С (метанол-этилацетат).
Стадия 3.
Вос-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Trp-ProSer-NH (тххх)
Из соединений (Х) и (1,ХХХХХ) по методике, описанной в примере 1 (ста565 24 дня 11), получают (LXXXIII),т.пл. 180о
183 С (метанол-этилацетат); R> =
= 0,34 (В).
Стадия 3.
Н-Tyr-D-Ala Phe-Phe-Tyr-Pro- 35
Ser-NH НС1 (LXXXI)
Стадия 1 °
23 1316 дня 11), получают (LXXX), т.пл.175180 С (метанол-этилацетат); R
= 0,12 (В); 0,81 (С); 0,86 (D).
Аминокислотный анализ: Ser 0,96 (1); Pro 0,97 (1); Gly 1,00 (1); 5
D-Ala О, 99 (1); Tyr О, 97 (1); Phe
1,00 (1) .Найдено, 7.: С 60,57; Н 6,61;
N 13,53.
С H so М 0 н
f0
Вычислено, %: С 60,96; Н 6,42;
N 13,61.
Стадия 4.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-Trp-Рго-, т-ННг НС1 (LXXVII) Из соединения (LXXX) по методике, описанной в примере 3 (стадия 2), получают (LXXVII), т.пл. 210-220 С, 20 (изопропанол-этилацетат); R$=0,54 (С), 0,79 (Д), E,,z = 0,50,(юС1, = +3,,8 (С = 1, MeOH) .
Аминокислотный анализ: Ser 0,98 (1), Pro 0,97 (1), Gly 1,03 (1);
D Ala 0,97 (1); Tyr 1,02 (1); Phe
1,00 (1) .
Найдено, 7: С 58,21; Н 6,23;
N 14,45, Cl 4,21.
Вычислено, %: С 58,50; Н 6,08;
N 14,62; Cl 4,11.
Приме р 17.
Вос-Tyr-D-Ala-Phe-PheNH-NH (т.xxxll) 4о
Из соединения Вос-Tyr-D-Ala-PhePhe-NH-NH-Z по методике, описанной в примере 1 (стадия 10), получают (LXXXII), т.пл. 180-183 С (этипацетат); Rf = 0,54 (В); E, = 0,49. 45
Аминокислотный анализ: D-Ala
1,00 (1); Tyr 0,99 (1), Phe 1,98 (2).
Найдено, 7.: С 63,70; Н 6,75;
N 12,66.
Вычислено, 7: С 63,62; Н 6 71;
N 12,71.
Стадия 2.
Вос-Tyr-D-Ala-Phe-Phe55
Tyr(Bz1) -Рго-Ser-NH > (LXXXIII) Из соединений (LXXXII) и (IV) по методике, описанной в примере 1 (стаВос-Tyr-D-Ala-Phe-Phe-TyrPro-Ser-ИН (L XXXIV) Из соединения (LXXXIII) по методике, описанной в примере 1 (стадия
12), получают (LXXXIV), т.пл. 140145 С (эфир); Rf = 0,18 (В);0,88 (С).
Аминокислотный анализ: Ser 0,95 (1) Pro 1,01 (1), D-Ala 1,00 (1);
Tyr 1,98 (2), Phe 2,02 (2).
Найдено, %: С 62,78; Н 6,52;
N 11,29.
С Н N Oqq
Вычислено, %: С 62,89; Н 6,49;
Н 11,28.
Стадия 4.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Phe-Tyr-Pro5er-NH НС1 а (т.хххт) Из соединения (LXXXIV) по методике, описанной в примере 3 (стадия 2), получают (LXXXI), т.пл. 195-200 С (эфир); В = 0,66 (С); 0,82 (D), E, = 0,50; (ос) = +3,8 (С=1;МеОН).
Аминокислотный анализ: Ser 0,96 (1); Pro 1,01 (1); D-Аlа 1,00 (1);.
Tyr 2,03 (2); Phe 2,00 (2) .
Найдено, 7.: С 60,60; Н 6,11;
N 11,97; Cl 3,78.
С,ц Мд GIN 0 «o
Вычислено, %: С 60, 73; Н 6, 1 8;
N 12,05; Cl 3,81.
Пример 18.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Phe-Tyr(Bzl)Pro-Ser-NH НС1 (LXXXV) Из соединения (1.ХХХ?ТТ) по методике, описанной в примере 3 (стадия
2), получают (LXXXV) .т. пл. 168-180 С (этанол-эфир); Rf = 0,90 (D); Е<
= 0,46; Pot) = +0,9 (С = 1; MeOH).
Аминокислотный анализ: Ser 0,98 (1); Pro 1,02 (1); D-Ala 1,03 (1);
Tyr 1,98 (2); Phe 2,00 (2) .
Найдено, %: С 63,49; H 6,14;
N 10,83, Cl 3,48.
С 1Н С1НзО io
Вычислено, %: С 63,61) Н 6,22;
N 10,99; Cl 3,47.
Пример 19.
Н-Tyr-D-Аlа-Phe- Gly-LeuNH1 Нсl (LXXXVI) 1316565
25
Стадия 1.
Пример 21, (ХС) Стадия 1.
Вос-Tyr-D-А1а-Phe- Gly-LeuИН (LXXXVI I) Из соединений (Х) и Н-Leu-ИН НС1
2 по методике, описанной в примере 1 (стадия 11), получают (LXXXVII).
Стадия 2.
Н-Tyr-D-А1а-Phe-Phe-Gly1. -ИХ, НС1. (LXXXVI) Из соединения (LXXXVII) по методике, описанной в примере 3 (стадия 2), получают (LXXXVI)., т.пл. 143-147 С (иэопропанол-эФир); R< = 0,73 (С);
Е, = 0,62; (с )р =+8,1 (С = 1;
МеОН).
Аминокислотный анализ: Gly 1,04 (1), D-Ala 0,99 (1); Leu 1,02 (1);
Tyr 1,01 (1); Phe 1,00 (1) .
Найдено, Х: С 57,27; Н 6,91;
N 13,70 С1 5,97.
С 9Н 1 C1NsOe
Вычислено, 7.: С 57,56; Н 6,83;
N 13,89; Cl 5,86.
Пример 20.
Н-Tyr-D Ala-Phe-Gly-MetNH г. H C l (LXXXVII I) Вос-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-MetИ 4 (ЬХХХ1Х) Из соединения (Х) и Н Met-ИН ° НС1 по методике, описанной в примере 1 (стадия 11), получают (LXXXIX).
Стадия 2.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-MetИН НС1 (т.ХХХЧттт)
Из соединения (LXXXIX) по мето дике, описанной в примере 3 (стадия
2), получают (LXXXVIII) т.пл. 220-
225 С (изопропанол-диизопропиловый эфир)э Rf = Оэб8 (С); Eqz = 0,63; (ос = +13,5 (С = 1; МеОН).
Аминокислотный анализ: 61у 1,01 (1); Р-А1а 1,01 (1); 1et 0,97 (1), Tyr 1,03 (1); Phe 1,00 (1).
Найдено, Х: С 53,45; Н 6,45;
N 13,32; Cl 5,73.
С „Н„CINeOe S
Вычислено, : С 53,97; Н 6,31;
N 13,49; Cl 5,73.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Sar-TyrPro-Ser-NH . НС1
Стадия 1.
Вос-Tyr-D-Ala-Phe-Sar-ИНИН (XCI)
Из Вос-Tyr-D-Ala-Phe-Sar-NHNH-Z по методике, описанной в примере 1 (стадия 10), получают (XCI) т.пл.110115 С (этилацетат); R< = 0,32 (В);
E,,z = 0,57.
Аминокислотный анализ: Sar 0,97 (1); D-Ala 1,00 (1); Tyr 0,98 (1);
Phe 1,02 (1).
Найдено, Е: С 59,36; Н 6,80;
N 14,32.
Cz4 Н И60
Вычислено, 7.: С 59,59; Н 6,89;
N 14,З7.
Стадия 2.
Вос-Tyr-D-Ala-Phe-SarTyr(Bzl)-Pro-Ser-NHz (XCII) Из соединений (IV) и (ХСЕ) по методике, описанной в примере 1 (ста30 дия 11), получают (XCII), Стадия 3.
Вос-Tyr-D-Ala-Phe=Sar-Tyr-ProSer-ИН (XCIII) Из соединения (KCII) по методике, описанной в примере 1 (стадия 11), получают (XCIII) R = 0,18 (В), 0,71 (С) .
Стадия 4.
Н-Tyr-D-Ala-Phe-Sar-Tyr-ProSer-NH< НС1 (ХС) 45 Из соединения (XCIII) по методике, описанной в примере 3 (стадия 2), получают (ХС), т.пл. 195-200 С (эфир); Е,л = 0,49; (eL) =+18,0 (С = 1; МеОН).
Аминокислотный анализ: Sar 1,10 (1); Ser 0,94 (1); Pro 1,02 (1); р-А).а 0,97 (1); Tyr 1,98 (2);- Phe
1,00 (1) .
55 Найдено, Ж: С 57,65; Н 6,20;
N 13,14, Cl 4,22
Вычислено, Х: С 57,71; Н 6,26;
N 13, 13 ; Cl 4, 15.
27
Пример 22.
Стадия 1. (XCV) Вос-Gly-Pro-Ser-NH г
Н-Tyr-D-Ala-Phe -Gly-ProSer-NH HCl (ХСТУ) Из Вос-Gly-ОН и соединения (II) по методике, описанной в примере 1 (стадия 2), получают (XCV).
Стадия 2.
H-Gly-Pro-Ser-NH НС1 (XCVI) 16565 28 мере 1 (стадия 1), получают (XCIX), т.пл. 124-126 С (эфир).
Стадия 2.
Вос-Tyr(Bz 1) -Pro-Ser-NH-Me (С) Из соединения (XCIX) и метиламина в диметилформамиде получают соединения (С), т.пл. 179-181 С (этилаце10 тат); R< = 0,46 (A).
Стадия 3.
Н-Tyr (Bz 1)-Pro-Ser-NH-Me >
> НС1 (CI) !
Из соединения (XCV) по методике, описанной в примере 3 (стадия 2), получают (XCVI), т.пл. 119-121 С. (метанол) (oLJ = -68,2 (С = 1;
MeOH).
Стадия 3.
Вос-Tyr-D-Аlа"Phe- Gly-ProSer-ХН (XCVII)
Из