Способ диагностики инфаркта миокарда

Способ диагностики инфаркта миокарда

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицине , точнее к кардиологии, предназначено для диагностики инфаркта миокарда (им). Цель изобретения - ранняя диагностика заболевания. Порцию крови для определения активности ферментов помещают в изотонический K,Na- фосфатный буфер 0,005 М, рН 7,4,

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„.SU. 323958

yg 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3890546/28-14 (22) 30,04.85 (46) 15.07.87. Бюл. Ю 26 (71) Всесоюзный кардиологический научный центр AMH СССР (72) В,Ç.Ланкин, А.К.Тихазе, Д.P.Ðàêèòà, Н.И.Афонская, M.ß.Ðóäà и А.М.Вихерт (53) 616.07(088.8) (56) Klein Н., Shell M.Е., Sobel В.Е, Cardiol. Res, 1973, V. 7, р. 412-418. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИНФАРКТА МИОКАРДА (» ) Изобретение относится к медицине, точнее к кардиологии, предназначено для диагностики инфаркта миокарда (ИМ). Цель изобретения — ранняя диагностика заболевания. Порцию крови для определения активности ферментов помещают в изотонический К,Naфосфатный буфер 0,005 М, рН 7,4, (0,154 М Na01), содержащего 10 М

ЭДТА, Кровь центрифугируют при 850 " х10 мин. Эритроциты дважды отмывают

0,154 M NaC1 и лизируют 20 объемами

0,005 М.К, Na-фосфатного буфера рН

7,4, содержащего 10 М ЭДТА. Эритроциты цельной крови из пальца пациен та лизируют тем же буфером в соотношении 1:9. Активность супероксиддисмутаэы (СОД). определяют при

25 С на спектрофотометре по ингибированию восстановления синего нитротетразолия О> генерируемого при окислении ксантина ксантин-оксидазой. 3а единицу активности СОД принимают кол-во фермента, необходимое для 50Х ингибирования реакции. Активность глутатионпероксидаэы (ГП) определяют при 30 С по окислению

N АДРН в сопряженной с глутатион-редуктазой системе при использовании гидроперекиси трет-бутила и GSH в качестве субстратов. Эа единицу активности ГП принимают кол-во фермента, необходимого для окисления

1 ммоль N АДРН в условиях определения. Активность СОД резко возрастает уже через 2 ч в эритроцитах при

ИМ, достигает максимума через 10 ч от начала болевого приступа, оставаясь еще до 2 сут, активность ГП у тех же больных, напротив резко уменьшается, достигая минимума в те же сроки, оставаясь на пониженном уровне до 2 сут. Достоверное увеличение активности СОД и уменьшение активности ГП в эритроцитах при ИМ выявляются т.о. весьма рано, уже через

1-2 ч после приступа. 1 ил., 2 табл.

Т а б л и ц а 1

GSH GSSG-reductage

400 ед/мл (360 рх 1) 336,2 833,36 307,33

М.в.

С (конечная концентрация) l0 М О,!2 10 М 0,85 10 М 0,5 ед/мп

-ъ„,. -э

Навеска (1 мг, на 25 мл буфера) 14,6 ед=l l pl

9,8 мг 2,9 мг

7,6 мг

Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии, и может быть использовано для диагностики инфаркта миокарда (ИИ).

Цель изобретения — ранняя диагностика заболевания.

На чертеже показано графически изменение активности СОД (1) и ГП (2) в эритроцитах больных инфарктом миокарда.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь для определения активности ферментов берут в количестве 0,2 мл и помещают в 0,8 мл изотонического (0,154 M NaC1) К,Na-фосфатного буфера 0,005 М, рН .7,4, содержащего 1(Т M

ЭДТА. Кровь центрифугируют s рефриже- >О раторной центрифуге- при 850 g<10 мин, Эритроциты дважды отмывают 0,154 М

NaC1 и лизируют 20 объемами 0,005 М

К,Na-фосфатного буфера рН 7,4, содержащего !О М ЭДТА. Эритроциты 2б цельной крови, взятой из пальца, лизируют тем же буфером в соотношении

1:9 (объем/объем). Все операции проводят при 0-(+4) С. При определении активности супероксиддисмутазы (СОД) Характеристика ЭДТА НАДФ"Н веществ

Реактив 1. Растворить в 20 мл фосфатного буфера 0,05 М рН 7,4 (в мерной колбе на 25 мл} 9,8 мг ЭДТА, затем НАДФ Н,,7,6 мг GSH. Влить 11р,l

GSSG-reductase и довести буфером до

25 мл. Брать для заполнения кювет по

650 1. Реактив 2. ROOHt-бутила (М.в.=

=116,246; H =1,3761) 13 р1 исходно8

2 гемоглобин охлаждают при — 10 С смесью хлороформ — метанол (3:5).

Активность (СОД) определяют при

25 G на спектройотометре Hitachi-220 (Япония) по ингибированию восстановления синего нитротетразолия О, генерируемого при окислении ксантина ксантин-оксидаэой. За единицу активности СОД принимают количество фермента, необходимое для 50Х ингибирования реакции. Активность глутатионпероксидазы (ГП) определяют при 30 С на аналитической установке "FP-900" (Финляндия} по окислению N AjJPH в сопряженной с глутатион-редуктазой системе при использовании гидроперекиси трет-бутила и GSH в качестве субстратов. За единицу активности ГП принимают количество фермента, необ-ходимого дпя окисления 1 моль И АДРН в условиях определения. Содержание гемоглобина (в ед на 1 r гемоглобина) определяют при помощи стандартных тест-наборов фирмы "Medix" (Финляндия) цианогемоглобиновым методом на анализаторе "FP-900". Смесь (V=

=0,65 мм) для определения GSH-пероксидазы на "FP--900" 1 в 340 нм (см. табл. !). го раствора растворить в 10 мл буфера, полученный раствор развести еще в 10 раз. Брать для запуска реакции !

00 р 1 (см. табл. 2 ) .

Образец для анализа вносить в !

О и1.

Смесь для определения СОД на спектрофотометре "Hitachi-220".

Смесь 1: Ъ 1950 и1, Л вЂ” 560 нм.

1323958

Т а б л и ц а

1 1$Т

Характеристика веществ

11 а СОз

ЭДТА

Ксантин

105,99 336,2

152,1

817,7

M.â.

С (конечная концентрация) 1

2,5 10 М

10 M

10 М

0,05 М

Навеска (1 мг, на 1 мл ис25 мл буфера) 154,9 мг 0,98 мг 0,597 мг ходного раствора

55

11,1 мг раствора ксантина (исходный) 1 растворить в 0 5 мл 0 5 н.

Na0H в мерной колбе на 25 мл, Довести до метки дистиллированной водой (Н О). Н О хранится в холодильнике в течение месяца.

Ксантин-оксидаза. Развести исходный фермент таким образом, чтобы добавление 300 р1 к 1950 п1 в кювете давало скорость 0,016-0,020 ед.опт/мин.

Для приготовления смеси и разведения ксантин-оксидазы используется 0,05 M фосфатного буфера рН 7,8. Образец вносить в 10-20 pl.

Определив активность СОД и ГП в динамике, строят кинетические кривые, отражающие изменения активности (см. чертеж).

Активность супероксиддисмутазы (кривая 1) резко возрастала уже через 2 ч в эритроцитах.больных ИМ, достигала максимальных значений приблизительно через 10 ч и оставалась на повышенном уровне до 2-х сут после болевого приступа, тогда как активность глутатионпероксидазы у этих же больных, напротив, резко уменьшалась, достигала минимальных значений в те же сроки и оставалась на пониженном уровне до 2-х сут. Начиная с 3-х сут после начала заболевания, выявлялась отчетливая тенденция к нормализации уровня активности СОД и ГП в эритроцитах больных ИМ, причем к 14-21 сут активность обоих исследованных ферментов достигала контрольных значений. Достоверное увеличение активности СОД и достоверное уменьшение активности ГП в эритроцитах больных ИМ выявляется весьма рано — уже через 1-2 ч после болевого приступа.

Пример 1. Больной С,, 46 лет.

При поступлении предъявлял жалобы на интенсивную давящую боль за грудиной с иррадиацией в левое плечо, резкую слабость, потливость. Объективно; состояние средней тяжести, Температура тела 37,2 . Правильного телосложения. Кожные покровы бледные.

Область сердца визуально не изменена, верхушечный толчок определяется в 5 межреберье. Границы относительной сердечной тупости расширены на

1,5 см кнаружи от средне-ключичной линии. Тоны сердца приглушены, правильный ритм прерывается единичными экстрасистолами частотой 4-6 в мин .

Пульс 75 уд/мин, АД=130/90 мм рт.ст.

В легких веэикулярное дыхание, хрипов нет. Со стороны органов.пищеварения и мочевьщелительной системы патологии не выявлено. Предположительный диагноз: острый инфаркт миокарда. Больному сделали анализ крови (через 1 ч после болевого приступа).

СОД (ед/г Нв) 9806; ГП (ед/г Нв)

15,19; КФК (ммоль/ч л) 4,01; MB-КФК (ммоль/ч л) 0,49.

Как видно, активность СОД повысилась, а активность ГП снизилась через 1 ч после возникновения болевого приступа. Активность же основных ферментов, тестирующих инфаркт миокарда (КФК, МВ-КФК), через 1 ч после возникновения болевого приступа не меняется. На основании данных по изменению активности ферментов СОД и ГП можно предположить диагноз инфаркта миокарда. Больному сделана

ЭКГ. Ритм синусовый, прерывается единичными желудочковыми экстрасистолами. Электрическая ось отклонена влево. Горизонтальная позиция сердца.

Отмечается смещение амплитуды зубца

5 1323958

Н < элевация сегмента 8-Т < вы Э 1 4 сокии (+), остроконечный Т „. Ди -"5 „ агноз: ИБС, острый трансмуральный передне-перегородочный инфаркт мио5 карда. Желудочковая экстрасистолия.

Таким образом, диагноз инфаркта миокарда подтвержден с помощью ЭКГ.

Динамика

СОД

3 ч. 9225

5 ч. 9355

7 ч. 11657

15 активности ферментов:

ГП КФК МВ-КФК

15,98 5,67 2,66

15,24 8,09 3,47

15,51 15,58 10,53

Пример 1 наглядно демонстрирует, что изменения активности КФК и МВКФК произошли гораздо позже (активность КФК увеличилась лишь к 7-му, а.МВ-КФŠ— к 3-му ч от начала боле- 20 вого приступа, в то время как изменения активности СОД и ГП произошли уже через 1 ч после начала заболевания.

Пример 2. Больной В-н, 60 лет.

При поступлении предъявлял жалобы на давление и сжимающие боли за грудиной, возникающие при физической на,— грузке и в покое, иррадиирующие в ле- 30 вое плечо. Объективно:.состояние удовлетворительное, правильного телосложения. Видимые слизистые цианотичны. В легких дыхание везикулярное, хрипов нет. Область сердца визуально не изменена. Границы относительной сердечной тупости: левая — на 0 5 см кнаружи от средне-ключичной линии, верхняя и правая не изменены. Тоны сердца приглушены. На верхушке про- 40 слушивается грубый систолический шум.

Акцент 11-го тона на аорте. Пульс

72 уд/мин, АД 140/80 мм рт.ст. Предположительный диагноз — инфаркт миокарда, нестабильная стенокардия.

Больному сделан анализ крови:

СОД (ед/г НВ) 4331; ГП (ед/г НВ)

17,18; КФК (ммоль/ч л) 4,03.

На основании анализа крови (активность СОД и ГП не изменена) диагноз инфаркта миокарда отвергается.

На ЭКà — признаки рубцовых изменений нижней локализации. В момент болевого приступа — групповая желудочковая экстрасистолия. Диагноз: ИБС, нестабильная стенокардия.

В стационаре у больного возник сильный приступ болей эа грудиной, сопровождающийся пароксизмальной желудочковой техикардией. Через 1,5 ч после возникновения болей, анализ крови: СОД 8948; ГП 13,17; КФК 4,02.

На основании данных изменения активности СОД и ГП у больного предпола-гается диагноз инфаркта миокарда.

ЭКГ: Подъем Б - T 11, 111 AVF.. Диагноз: Инфаркт миокарда нижней локализации. Активность КФК: через 4 ч—

6,02, через 8 ч — 20,17.

Таким образом, активность КФК изменилась только к 8-му ч от начала заболевания, тогда как активность

СОД и ГП изменилась уже через 1,5 ч и на основании изменения активности

СОД и ГП был правильно поставлен диагноз инфаркта миокарда.

Формула изобретения

Способ диагностики инфаркта миокарда путем исследования активности ферментов крови, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью ранней диагностики, в эритроцитах крови определяют активность супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы и при увеличении активности первого и снижении активности второго относительно нормы диагностируют инфаркт миокарда. з

1323958

Заказ 4859

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул, Проектная, 4

Составитель К.Валеева

Редактор Е.Копча Техред М.Дидык Корректор М.Шароши

Тираж 775 Пбдписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Ъ р

Ъ ф %ю

Ъ

Ч