Питательная среда для культивирования базидиальных грибов- продуцентов комплекса ферментов

Питательная среда для культивирования базидиальных грибов- продуцентов комплекса ферментов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биотехнологии , а именно к питательным средам для культивирования базидиальных грибов - продуцентов комплекса ферментов , осуществляющих деструкцию лигноцеллюлозного сырья. Целью изобретения является повышение активности монофенол-монооксигеназы и пероксидазы при сохранении целлюлозной активности . Сущность изобретения заключается в том, что питательная среда, содержащая минеральные соли и воду, содержит в качестве источника углерода лиофилизированный сок зеленой массы люцерны в количестве 1-2 мас.%. Изобретение позволяет более чем в 2 раза повысить активность монофенолмонооксигеназы и пероксидазы. 4 табл. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

GOLDA ËÈÑÒÈ×ÅÑÊÈÕ

РЕСПУБЛИК ((9) SU (II) (5И 4 С 12 N 1/14, 9/00// (С 12 N 1/14, С 12 R l:645) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ: у с

= 1

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

И1,1;

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTVM (21) 3971643/31-13 (22) 28.10.85 (46) 23.07.87. Бюл. У 27 (71) Институт ботаники им. Н.Г.Холод- ного и Центральный научно-исследовательский и проектно-технологический институт электрификации и механизации животноводства Южной эоны СССР (72) К.М.Сытник, Ю.Ф.Новиков, Н.И.Даниляк, B,Ä.Ñåìè÷àåýñêèé, М.N.Êîãàíîâ, Н.Н.Новиков, И.А.Дудка и А.С.Бухало (53) 577 15(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

11(1218673, кл. С 12 N l/26, 1985.

Авторское свидетельство СССР

1(1(874755, кл. С .12 N 9/14, 1981.

Авторское свидетельство СССР

11 1068477> кл. С 12 N 9/00, 1984.

Авторское свидетельство СССР

У 1084299, кл. С 12 N 9/02, 1984. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИ-

РОВАНИЯ БАЗИДИАПЬНЬ1Х ГРИБО — ПРОДУ-1

ЦЕНТОВ КОМПЛЕКСА ФЕРМЕНТОВ (57) Изобретение относится к биотехнологии, а именно к питательным средам для культивирования базидиальньх грибов — продуцентов комплекса Аерментов, осуществляющих деструкцию лигноцеллюлозного сырья. Целью изобретения является повыщение активности моноАенол-монооксигенаэы и пероксидазы при сохранении целлюлозной активности. Сущность изобретения заключается в том, что питательная среда, содержащая минеральные соли и воду, содержит в качестве источника углерода лиоАилизированный сок зеленой массы люцерны в количестве 1-2 мас.Х.

Изобретение позволяет более чем в

2 раза повысить активность монофенолмонооксигеназы и пероксидазы. 4 табл.

1 1325

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к способам получения ферментов, осуществляющих деструк. цию лигноцеллюлозного сырья, и может быть использовано в производстве Аерментов, применяемых н целлюлозно-бумажной, деревообрабатывающей, пищеной промышленности, а также н сельском хозяйстве.

Пель изобретения — повьппение ак- 10 тинности моноАенол-монооксигеназы и пероксидазы прн сохранении целлюлозной активности.

Питательная среда дпя культивирования базидиальньlx грибов — продуцентон комплекса ферментов, обладающего монофенол-монооксигеназной, пероксидазной и целлюлозной активностью, содержит н качестве источника углерода лиофилизиронанный сок зеленой массы люцерны, Состав лиофилизированного сока люцерны приведен в табл. 1, При этом состав питательной среды следующий, г/л: однозамещенный фосфат аммония 1,8-2,0; однозамещенный фосфат калия 0,5-0,6; днузамещенный фосфат калия 0,3-0,4; сульфат магния

0,4-0,5; лиофилизированный зеленый сок люцерны 10-20.

Пример 1, Готовят питательнь|е среды следующего состава, г: NH

2,0; КН РО, 0,6; К,НРО 0,4; Mgsu

0,5; лиофилизированный зеленый сок люцерны 5,0-40,0; вода водопронодная — 35 до 1,О л.

Указанные питательные среды готовят путем последовательной загрузки всех компонентов при постоянном перемешивании, помещают н колбу Эрлен- 40 мейера емкостью 0,5 л (по О,1 л среды на колбу ) и стерилизуют острым паром

30 мин при 0,1 MIla. Затем колбы охлаждают до комнатной температуры и засевают чистой культурой высшего бази- 45 диального гриба Pleurotus ostreatus (Jacg.:Fr) Kumm И1 Б -1300. Культивирование проводят н стационарных условиях методом поверхностной пленки при

?8+1 С в течение 7 сут. 50

В табл. 2 приведены результаты измерений активностей монофенол-монооксигеназы (КФ 1,14.18,1), пероксидазы (КФ 1.)1.1,7), эндо-l,4-Р-глюканаэы (КФ 3.2.1.4), способности комплек- 55 са ферментов к осахаринанию фильтровальной бумаги (Ф1 †активнос) и растворимой карбоксиметилцеллюлоэы

07Г

0,3-0,4

0,4-0,5 люцерны

10-20 KMII-активность) в культуральных фильтратах, полученных после отделения мицелия и остатков твердого субстрата.

Пример 2. Готовят питательные среды следующего состава, г: NH Н PO

1 8; KH РО4 0,5; К НР04 0 3; MgSOq

0,4; лиоАилиэированный зеленый сок люцерны 5-40; вода водопроводная до 1 и.

В качестве продуцента ннеклеточных ферментов используют высший баэидиальный гриб Funalia trogii (Berk.) Bond °

et Sing. 0146 °

Результаты, полученные для 7-суточной культуры, приведены в табл. 3.

Пример 3. Состав питательных сред и условия культивирования аналогичны примеру I.

Активности внеклеточных ферментов

Coriolus hirsutus (Fr.) Quel. 069, Stereum purpureum (Pers,) Fr. 030, Coriolus versicolor (Fr.) Quel. 087, .

Fomes fomentarius (Fr.) Kickx. Ol17 при культивировании и на среде с зеленым соком люцерны приведены в табл ° 4.

Изобретение позволяет более чем в 2 раза повысить активность монофенол-монооксигеназы и пероксидазы.

Формула и э о б р е т е н и я

Питательная среда для культивирования базидиальных грибов — проду-. центов комплекса ферментов, осуществляющих деструкцию лигноцеллюлозного сырья, содержащая источник углерода, однозамещенный фосфат аммония, однозамещенный фосфат калия, двузамещенный фосфат калия, сульфат магния и воду, отличающаяся тем, что, с целью поньппения активности монофенол-монооксигеназы и пероксидаэы при сохранении целлюлозной активности, н качестве источника углерода и стимулятора биосинтеза среда содержит лиофилизированный сок зеленой массы люцерны при следующем соотношении компонентов, г/л воды:

Однозамещенный фосфат аммония 1,8-2,0

Однозамещенный фосфат калия 0 5-0,6

Днузамещенный

АосАат калия

СульАат магния

ЛиоАилизиронанный зеленый сок

1325071

Таблица 1

Содержание, 7. на сухую массу

Компоненты

93,8-95,7

24,3-25,1

15,3-15,5

1,91-1,94

2,76-2,77

l 8 ° 40 19!0

50,80-51,90

5!90 5.99

4,64-4,66

Сухое вещество

Сырой протеин

Белок

Сырой жир

Сырая клетчатка

Сырая зола

БЭВ

Сахара

Кальций

Фосфор

0,26-0,27

0,30-0,32

4,50-4,52

Натрий

90, 18-91, 34 мг/кг

164,0-168,0 ед/г

Каротин

Сапонины

Хлорофилл (суммарный) 14,2-14,3мг/кг

Таблица 2

Фермент

Субстрат Единицы изме- Показатели при концентрации рения зеленого сока, 7.

О!5 1 ° 0 2ьО 4эО

Мо нофе нолмоноок си ед/л

Бензидин

140,0 140,0 122,2

112,0 140,0 128,8

70,0 геназа

Пероксидаза

70,0

Эндо-1,4- глюканаза

Х деполимеризации

22 ° 5 22 5 20 ° 8

16,6 28,3 25,9

20,0 мг Х глюкозы

КИЦ-активность

13,9

ФБ-активность

Фильтровальная бумага

117,5 80,4 80,0

1325071

Единицы изме- Показатели при концентрации рения зеленого сока, Х

Субстрат

Фермент ед/л

43 1

Бе изидин

43,7

Пероксидаза мг 7. глюкозы 27,8 36,8 35,5 35,0

Фильтроваль" ная бумага

6,2

8,8

Таблица 4

Фермент

Субстрат

Coriolus hirsutus (Fr.) Quel. 069 ед/л

14,4

Бенэидин

12 7

14 7 15 1 геназа

13,3

18,5 18,0

17,6

21,2 21,0 20,2

25,0 мг 7. глюкозы 16,1

l2 3 12,2

10,6

ФБ-активФильтров альная бумага ность

6,0 22,7 15,Я

Stereum purpureum (Pers) Fr. 030

Монофенол-монооксигенаэа Бензидин ед/л

14,0!

0,0

18,6

12,2

Пероксидаза

Моноф гнолмонооксигеназа

Эндо- 1,4-Jглюк анаэ а

КМЦ-актив— ность

ФБ-активность

МонофенолмонооксиПероксидаэа

Эндо-1, 4-Pглюканаэа

КИЦ- ак тивность

Х деполимеризации

Единицы измерения

7. деполимеризации

Таблица 3

0,5 1,0 2,0 4,0

50,0 108,0 106,6

50,9 1)2,0 1 10,6

l5,6 56,3 40,6 40,0

Показатели при концентрации зеленого сока, 7

0,5 1,0 2,0 4,0

14,7 14,5

17,5 18,0

1325071

Продолжение табл.4 Субстрат

Фермент

Эндо- l, 4-P— глюканаэа

17,3

21,2 22,0 23,0 мг Е глюкозы 14, 1

9,1 9,5

9,0

2,4

Cnrio1us versicolor (Fr.) Quel. 087

Монофенол-монооксигенаэа ед/л

14,5

Бенэидин

17,5

Пероксидаза

Эндо- l, 4-P— глюк анаэ а

9,6

9,6 12,5 10,9

16,7 22,0 20,0 мг Ж глюкозы 10 6

2,4 26,2 14,4

3,9

Гошев fomentarius (Fr.) Kickx. 0117

Монофенол-монооксигеназа ед/л

13,7

23,3

27,3

Бензидин

39,0 24,4

18,0

25,5

Пероксидаза

Эндо-1 4- глюканаза

18,0

7,3 11,0 мг Х ггллююккооэзы ы 1!44,1

7,9

2,2 26

О.

ВНИИПИ Заказ 3021/24 "Гираж 499 Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

КМЦ-активность

ФБ-активность

КМЦ-активность

ФБ"активность

КМЦ-активность

ФБ-активность

Фильтровальная бумага

Фильтровальная бумага

Фильтровальная бумага

Единицы измерения

7 деполимернзации

Е деполимеризации

Х деполимеризации

Показатели при концентрации зеленого сока, X

0 5 1,0 2,0 4,0

6,7 13,3 18,9

8,5 17,4 18,9