Способ получения диастереомера n-[3-хлор-4-(2-хлор-этилтио)- бутаноил]-l-фенилаланина

Способ получения диастереомера n-[3-хлор-4-(2-хлор-этилтио)- бутаноил]-l-фенилаланина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение касается замещенных аминокислот, в частности способа получения диастереомера N- З-хлор-4- -(2-хлорэтиптио)-бутаноил -L-фенилалаланина (ФА), который обладает про тивоопухолевой активностью и может быть использован в медицине. Цель - разработка способа получения ФА, имеющего лучшую активность, чем известный сарколизин. Синтез ФА ведут из М-винилацетил-Ь-фенилаланина и 2-хлорэтилсульфенхлорида в среде смеси СНС1, и СС1 при (-20)-(-30)Ч с послед тощим отделением осадка и его фракционной кристаллизацией из эфира. Выход ФА 60%, т. пл. 108-115°С; , +78° (диоксан, концентрация 0,84). Испытания показывают, что ФА после 10 сут быстрее восстанавливает норму числа лейкоцитов (-27,9%), чем рацемат (35,2%). В отношении штамма ЛП наблюдается лучшая активность ФА, чем сарколизина. Токсичность ФА (LD|oo ) составляет 100 мг/кг против 120 для рацемата и LDj сарколизина 17-23 мг/кг. 2 табл. с (Л

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (1Ч1 (11) (51)5 С 07 С 323/59, А 61 К 31/16

ОПИСАНИЕ ИЭОБРЕТЕНИ

К А BTOPCHOMY СВИ4ЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (46) 23.04.92. Г>юл. Р 15 (21) 3930503/04 (22) 18.07.85 (7!) Институт биохимии АН ЛитССР (72) Л.П.Растейкене1 H.-Б.К.Поцюте, Я.В,Валавичене, А.К.Карпавичюте и И.А.Дембинскене (53) 547.466.07(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

В 534063, кл. С 07 С 153/017, А 61 К 31/185, 1976. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ llHACTEPEОМЕРА

N- (3-ХЛОР-4-(2-ХЛОРЭТИЛТИО)-БУТАНОИЛ)-Ь-ФЕНИЛАПАНИНА (57) Изобретение касается замешенных аминокислот, в частности способа получения диастереомера N- (3-хлор-4-(2-хлорэтиптио)-бутаноил) -1.-фенилалаланина (ФА), который обладает про тивоопухолевой активностью и может быть использован в медицине. Цель разработка способа получения ФА, имеющего лучшую активность, чем известный сарколизин. Синтез ФА ведут из

N-винилацетил-L-фенилапанина и 2-хлорэтилсульфенхлорида в среде смеси

СНС1 и СС1, при (-20)-(-30) С с последующим отделением осадка и его фракционной кристаллизацией иэ эфира.

Выход ФА 60, т. пл. 108-115 С;

2о о

fw), = +78 (диоксан, концентрация

0,84). Испытания показывают, что ФА после 10 сут быстрее восстанавливает норму числа лейкоцитов (-27,97.), чем рацемат (35,2Ж). В отношении штамма

ЛП наблюдается лучшая активность ФА, чем сарколизина. Токсичность ФА (LD, ) составляет 100 мг/кг против

120 для рацемата и 1 П, сарколиэина !

7-23 мг/кг. 2 табл.

1329123

Изобретение относится к способу получения нового оптически активного производного фенилаланина, диастереомера Н- (3-хлор-4- (2-хлорэтилтио) -бутаноил) -L-фенилаланина формулы

t и (с1сн,снр)-сн -сн(с1)-сн,соян-сн-соотг снгсp обладающего противоопухолевой активностью.

Он может найти применение в медицине и для лечения экспериментальных опухолей.

Целью изобретения является получение с высоким выходом оптически чистого производного фЕнилаланина, обладающего более высокой противоопухблевой активностью.

Изобретение иллюстрируется следующими ггримерами.

Пример а) Ацилиронание L-фенилаланина.

К раствору 16,52 r (О, 1 моль) !.-фенилаланина и 60 мл 2 н. раствора

Na0H при перемешивании одновременно прибавляют по каплям 10,4 r (0,1моль) хлорангидрида нинилуксусной кислоты и 5 н. раствор Na0H при 0-(-5) С и

РН 8-9 (по универсальному индикато

py). Погученную смесь разбавляют

50 мл хлороформа и перемешивают при комнатной температуре ч, подкисляют концентрированной НС1 (по Конго), органический слой отделяют, водный слой экстрагируют хлороформом. Зкстракт сушат М850 ., упаринают, остаток н виде масла обрабатывают четыреххлори.стым углеродом и образующееся твердое вещество кристаллизуют из смеси СНС1, и СС1 (2:1). Получают N-винилацетил-L-фенилаланин (14,0 r) т. пл. !

08-115 С, выход 60, удельное вращение (ос) = +78 (диоксан, с

569

0,84) (поляриметр "Perkin Elmer 141").

Найдено, : С 67,28, Н 6,17;

N 6,01, С, Н, Ю

Вычислено, : С 66,94; Н 6,48;

N 6,00.

ПИР-спектр снят на приборе "Hitachi" R-22 (90 МГц) в D-ацетоне, внутренний стандарт — ТИДС, и, м.д.:

3,2-2,7 м (2H, СН, СО), 4,7 1 м (1H, CH?, 5,0 м (1Н, =СН), 5,7 м (2H, СH ), 7,1 с (5Н, С Н ).

Аналогично ацилируют D-ôåíè In пан ин. Пол уч ают N-вин илацет ил-D-фен илаланин (12,8 г), т.пл. 108-115 С, выход 55, удельное вращение (э,) — — 77,7 (диоксан, с 0,72).

Найдено, .: С 67,20! H 6,29;

N 5,85.

ПИР-спектр н аналогичных условиях

10 совпадает с ПМР-спектром ацилированного !.-фенилаланина. б) Присоединение 2-хлорэтилсульфенхлорида.

К раствору 23,32 г (0,1 моль) полученного н пункте а) N-винилацетил-L-фенилаланина в 100 мл абсолютного хлороформа при (-20) †(-25) С прибавляют по каплям 13,1 r (0,1 моль) 2-хлорэтилсульфенхлорида в 30 мл четыреххлористого углерода. Выпавший осадок отфильтровывают и подвергают фракционной кристаллизации из абсолютного эфира. Выделяют диастереомер

N- (3-хлор-4-(2-хлорэтилтио)-бутаноэ5 ил) -L-фенилаланина (1) (14,5 г), о г. пл. 116 — 1 7 С, выход 80 ., удельное ие (K) 559 = +64, 7 (диоксан, с n,50) .

ГП1Р-спектр в П-ацетоне, внутренний стандарт — ТИДС, и, м.д.: 4,32 м (1Н, СНС1), 4,01 м (1Н, CH), 7, 12 с (5Н, С,H ).

Аналогично получают N- (3-хлор-4-(2-хлорэтилтио)-бутаноил)-D-фенилаланггн (III) (14,5 г), т.пл. 11535

117 С, выход 80 ., удельное вращение

Ъ 1, = -65,0! (диоксан, с 0,51) .

ПИР-спектр н D-ацетоне, внутренний стандарт — ТИДС, 8, м.д.: 4,32 м (! Н, СНС1), 4,01 и (1H, CH), 7, 12 с (5H С,,Н,) .

И зученне физиологической актинности.

0 токсичности соединений судили

4 по величине дозы, вызывающей 100 -ную гибель животных (ЛД „), максимально переносимой дозе (ИПД) и по изменению массы тела и селезенки. Токсичность определяли на белых беспородньгх кры50 сах-самках с массой тела 100-120 г.

Препараты вводили суспендированными н растительном масле, внутрибрюшинно.

Протиноопухолевую активность (ПОА) оединений I-III определяли на крысах с привитой карциг осаркомой УокеРа (КСУ), саркомой r1-1 (С-М-1), опухолью яичника (ОЯ), лимфосаркомой Нлисса (ЛП? и на линейных мьппах С гВ1 с карциномой легких Льюиса (LL8) . В

Таблица 1

Доза, мг/кг

Ш, лмм о»ухоли

Соедине ни

ИИД ТД и число введений

100 60 8 х 25 КСУ 98,3 (0,001 +18 0

+6,7

10 х 15 ЛП

67, 9 с0,05

+23,0

+!4,0

+2,0

+ 18,6

-10,6

-6,0

1О х 15

С-M-1 59,3 с0,05

5 х 30 ОЯ

5 х 20 LLS

95,5 с0,001

65,3 с0,001

+19,4

II (известный рацемат) 12п 90 8;: 30 КСУ 68,2 сО 01

1О х 20 ЛП 66 4 с0 05

10 х 20 С-M-1 32,8 c0,1 > x 25 LLS 36, 1 с0,1 — 15,7

+35,4

-1,6

+26,8

+3,0

+1,9

+2,7

-2,7

3 1r опытах использс влив 350 крыс и 130 мышей! Об зффективности действия судили по торможению роста опухоли и изменению массы тела и селезенки.

Результаты биолс гических исследований соединений 1 III и широко используемого в медицине слрколизинл приведены в табл. 1.

Из табл. 1 следует, что соединение I по токсичности не уступает II и соответствующему производному D-фенилаланина, величины ЛД „и МПД для всех соединений одного порядка, а отрицательное влияние на массу селезенки оказывает только вещество

II (-15,7 и — 1,67), на массу тела в зависимости от штлмма опухоли незнаЧительно влияют все три соединения.

В то же время соединение 1 намного превосходит сарколизин и по величине

ЛД,, МПД и rro влиянию нл массу селезенки.

Противоопухолевля лктивносTb предложенного соединения I нл всех штлммах опухолей в терапевтических дозах выше, чем ПОЛ соединения II и производного П-фениллллнина III.

Наиболее высокую, достигающую 98,3

?91)3 д и 95,57., активность оно проявляет в отношении штаммов опухолей КСУ И ОЯ соответственно, а в отношении штлммл

Tt1 — превосходит даже сарколизин (результлты 67,9 и 61,07. соответственно получены в одном опыте на крысах).

Данные по изучению действия соединений I-III на число лейкоцитов крови

v крыс с лимфосаркомой Плисса приведены в табл. ?.

Из табл. 2 следует, что число лейкоцитов после 10 сут возвращается к норме быстрее в случае применения соединения 1 (-27,9Ж), чем рацемата (35,2Ч).

Формула изобретения

Способ получения диастереомера

N- t3-хлор-4-(2-хлорэтилтио)-бутаноил) -L-фенилаланина, о т л и ч а ю шийся тем, что N-винилацетил-Ь-фсниллланин подвергают вэаимодей2, ствию с 2-хлорэтилсульфенхлоридом в смеси хлороформл и тетрахлорметана при (-20) †(-30) (;, выплвший осадок .отфильтровьr»;»cr и фракционной кристаллизацией иэ эфира выделяют индивидуальный диастереомер.

Торможение рос- Изменение массы, та опухоли Х

Z (Р селезенки тела!

329123

Продолжение табл.!

Соединени

Изменение массы, Доза ° мг/кг

««

TopMorewe роста опухоли

Ф ,щ МПД ТД и число введений селезенки тела

Сарколизин

IV ЛД

17-23 12 10 х 2,3 ЛП 61,0 ñ0)05 28)4 2)7

ТД вЂ” терапевтическая доза.

Таблица2

Соединение

Число лейкоцитов через время, сут

Лоза, мг/кг

)О

mac/MM X Р tsIc/H))) 7. Рс тыс/мм g Pc

25,8+ 2,4

18,6+ 1,0 -27,9 0,02

20 10,0 2 0,7 «386 0,01 15,4+ 1,3 -40,0 0,01 !6,7 Т 1,7 -35,2 0)01

30 ЧЭ,О + 0,7 -20,2 0,5 18,0+ 2,0 -29,9 0,05 20,7+ 2,1 -19,7 0,2

Составитель Л.Иоффе

Техред А,Кравчук

Корр е к тор Л. Бе с к ид

Редактор E.Õîðèíâ

Тирам Подписное

ВЯИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Рвушская нвб., д. 4/5

° В

Заказ 2311

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Va город, ул . Проектная, 4

Контроль

Штамм опухоли

120 90 8 х 30 КСУ 60 5 с0 О!

10 х 30 ЛП 37,3 0,5

10 х 30 С-М-1 18,6 i0,5

163+15 - - 257+23

Э

15 9)6 + 0,9 -41,1 0,01 15,7+ 2,4 -38,9 0,02

+20,0

+12,3

+34,7

-1,0

-5,3