Способ диагностики эхинококкоза

Способ диагностики эхинококкоза

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение предназначено для биохимии при диагностике эхинококкоза. Цель изобретения - повьшение чувствительности способа путем использования в качестве меток антигена фермента каталазы с ферментативной активностью 30-1000 нкат и про,- стого по составу субстрата (Н.О,, в концентрации 0,001-0,0005%, KI 1-5% и крахмал 0,1-0,2%). Результат анализа проявляется через 20-30 мин в виде синего окрашивания в лунках, где отсутствуют антитела к эхинококновому антигену. При наличии антитела к эхинококковому антигену окрашивания нет. 4 табл. СП

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„Я0„„13322 (511 4 G 01 N 33/535

ВСРУ 1:. . а

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3887313/28-14 (22) 17.04. 85 (46) 23,08.87, Бюл, У 31 (71) Научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней (72) В.А.Шамардин, Ю,А,Кузьмин, Б,В,Каральник, П,П,Гладышев и Ю,А,Шаповалов (53) 615.373 (088.8) (56) Курманова Л,В. Иммунодиагностика тропических и паразитарных болезней, M. 1980, с, 24-31, (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЭХИНОКОККОЗА (57) Изобретение предназначено для биохимии при диагностике эхинококкоза. Цель изобретения — повышение чувствительности способа путем использования в качестве меток антигена фермента каталазы с ферментативной активностью 30-1000 нкат и простого по составу субстрата (Н О в концентрации 0,001-0,0005K, KI 1-5Х и крахмал 0,1-0,2X). Результат анализа проявляется через 20-30 мин в виде синего окрашивания в лунках, где отсутствуют антитела к эхинококковому антигену, При наличии антитела к эхинококковому антигену окрашивания нет, 4 табл.

13322

Изобретение относится к биохимии и может быть использовано для диагностики эхинококкоза, Целью изобретения является повы5 шение чувствительности способа за счет использования в качестве меток антигена фермента каталазы, Пример 1, Определение антител в сыворотке больного эхинокок- 10 козом. Адсорбцией эхинококковый антиген фиксируют на поверхности лунок планшет. Затем вносят в лунки по

О,1 мл исследуемой сыворотки человека с разведения 1:50 и после экспо- 15 зии и отмывания избытка сыворотки вносят по 0,1 мп коньюгата с активностью фермента 100 нкат (вносимый в лунки коньюгат состоит из прочного комплекса глобулинов кроличьей 20 антисыворотки против глобулинов сыворотки человека и фермента каталазы, сшитых глютаровым альдегидом), выдерживают 60 мин при 37 С и отмывают 0,05%-ным раствором твина-20, Пос- 25 ле этого во все лунки добавляют

0,05 мл Н О и выдерживают в течение

30 мин, затем в эти же лунки вносят

0,025 мл 5 -ного раствора KI u

0,025 мл 0,1 .-ного раствора крахмала, 30

Результат, анализа проявляется через

20-30 мин в виде синего окрашивания в лунках, где отсутствовали антитела к эхинококковому антигену. В случае, если исследуемая сыворотка в определенных разведениях содержит антитела к эхинококковому антигену, соответствующие лунки остаются бесцветными, Влияние ферментативной активности каталазы в используемом для реакции коньюгате показано в табл.l

Таким образом, коньюгат работает специфически с ферментативной активностью 1000 нкат, При активности менее 30 нкат он не дает положительной 45 реакции с иммунной сывороткой, Слезз 2 довательно, коньюгат может применяться с ферментативной активностью 30- "

1000 нкат.

Влияние концентрации Н 0 и KI

2 2 на чувствительность реакции показано в табл.2.

Из приведенных в табл.2 результатов видно, что оптимальным сочетанием для проявления активности каталаэы являются концентрации Н О 0„00100 0005 и KI lâ0 5i0

Влияние дозы крахмала на чувствительность метода показано в табл,3, Из результатов, приведенных в табл,з видно, что оптимальной концентрацией крахмала является 0,1.—

0,2%-ный раствор, Чувствительность диагностики при использовании коньюгата с пероксидазой (известный метод) и каталазой (предлагаемый метод) показана в табл.4.

Таким образом, предлагаемый способ, основанный на использовании фермента каталазы и простого по составу субстрата, позволяет с большей чувствительностью проводить определение антител по сравнению с известным способом.

Формула изобретения

Способ диагностики эхинококкоза, включающий фиксацию антигена на твердой фазе, добавление исследуемой сыворотки крови вторичного коньюгата антигена с ферментом и соответствующего субстрата, о т л и ч а ю— шийся тем„ что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве фермента для коньюгата используют каталазу с активностью 301000 нхат и добавляют субстрат, содержащий Н О в концентрации 0,001— ,0„0005, KI 1-5 и крахмал 0,1-0,2, 1332233

Таблиц а 1

1:10

1!3000 1:1000 1:300

1:100 1:30

Иммунной

1:10

1:50

1:250

+ + +, Нормальной

1:10

1:50

1:250

П р и м е ч а н и е, + — положительный результат реакции;

tt 1! — отрицательный результат реакции, Таблиц а2

Разведение Разведение иммунной сыворотки, дающее положиKI Ж тельный результат, при концентрации Н О, X

1:80 1:160 1:160 Реакция

1:40

0,5 отрицательная

1:160 1:200 1:320 1:320

1,0

1:160 1:200 1:320

1:320

5,0

1: 160 1: 200 1:320 1: 320

10,0 к+ к+

П р и м е ч а н и е, к+ — положительная реакция в контроле, Разведение сыворотки

Результат реакции при активности каталазы, .нкат, в коньюгате

Без разведения

Без разве- 0,1 0,01 0,001 0,0005 0,00025 дения

Реакция отрицательная

1332233

Таблица3

Разведение сывороток больных, дающих положительный результат

Концентрация крахмала, %

Бальной М, Больной С, Больной А, Больная Д, Больная С. (1: 20

0,8

<