Штамм yersinia реsтis ev-94тнy,используемый для определения тимидина в питательных средах

Штамм yersinia реsтis ev-94тнy,используемый для определения тимидина в питательных средах

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и направлено I a создание нового штамма, обладающего высокой чувствительностью к экзогенным добавкам тимидина. Штамм lersi- nia pestis EV-94 thy получен путем воздействия N-нитрозометилмочевины на вакцинный штам EV 76 с последующей селекцией среди устойчилых к тпиметоприму вариантор, нуждающихся в тимидине. Штамм lersinia pestis КМ- 161 хранится в Музее живых культур ВНИПЧИ Микроб, Штамм 1 предназначен для oпpeдeJfcни l , ржания тьмидина в питательных срелх. СО .1ф со со Ci CD

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„.80„„1348369 с

y I

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЙ--

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

С:

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3946314/28-13 (22) 23.08.85 (46) 30.10.87. Бюл. N - 40 (71) Ростовский-на-Дону государственный научно-исследовательский противочумный институт (72) Б,Н.Мишанькин, В.Ю.Рыжков и А.Н.Кравченко (53) 576.8.093 (088.8) (50 4 С 12 N 15/00, C 12 g 1/04//

С 1 5 00 2 .уд) (54) ШТАММ IERSINIA PFSTIS FV-94

ТНУ, ИСПОЛЬЗУЕМЬЙ ДЛЯ ОПРЕЦЕЛЕН1 Я

ТИМИДИНА В ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и направлено,а создание нового штамма, обладающ го высокой чувствительностью к зкзогепным добавкам тимидина. Штамм Tarsi—

nia pestis EV — 94 t1iy получен путем воздействия N-нитрозометплмочевины на вакцинный штам ЕЧ 76 с последующей селекцией среди устой п.вых к тоиметоприму вариантов, нуждаюш»хся в тимидине. Штамм Iersinia pest is k>f161 хранится в Музее жи ых культ,р

ВНИПЧИ "Микроб". Штамм К,"-161 препназначен для определ »»», pжани»

-,.ìèäèíà в питательных средах.

1348369

Изобретение относится к медицинской микробиологии и-может быть использовано при контроле качества питательных сред.

Цель изобретения — создание нового штамма, об.падающего высокой чувствительностью к экзогенным добавкам

35 тимидина.

Штамм EV-94 thy — получен воздействием N nèòðosометилмочевины на вакцинный штамм EV 76 линии НИИЭГ с последующей селекцией среди устойчивых к триметоприму вариантов, нуждающихся в тимидине. 15

Штамм Iersinia pestis,V-94 thyхранится в Музее живых культур Всесоюзного ордена Трудового Красного

Знамени научно-исследовательского противочумного института Микроб под номером КМ-161 и характеризуется следующими признаками.

Культурально-морфологические признаки.

Клетки в мазках, окрашенных по 25

Граму, имеют вид полиморфных грамо.трицательных палочек овоидной формы размером 0,3 0,7 мк, в мазках из бульона встречаются биполярно окрашенные клетки, расположенные цепоч- 30 ками: жгутиков клетки не имеют.

На поверхности агара Хоттингера с добавлением 10 мкг/tLI тимидина (рН 7,1-7,2) клетки штамма формируют при 28"С колонии в Е-форме с типичной для чумного микроба морфологией.

В бульоне культура штамма дает придонный агглютинативный рост и гиде хлопьев, среда при этом остается прозрачной, На минимальной среде с 1,-метионином, L- p-фенил-д. -аланином и тимидином при высея е взвеси, содержащей

10 или 10 клеток в 1 мл, чсрез 4- 45

1 1

6 дней инкубации при 28 С формирует типичные полупрозрачные беловатые колонии размером до 1,5 мм. На минимальной среде без тимидина рост стабильно отсутствовал даже при высевс

1 ° 10 клеток. Физиолого- биохимические признаки, Ауксотроф. Для роста на мнимальной синтетической среде (М-9) при

28ОС нуждается в тимилпне и, как его

55 родительский штамм, в Ь-метионине и

L- P -фенил- Ф -аланине.

Ферментирует с образованием кислоты без газа глюкозу,арабинозу,мальтоэу, маннозу,галактозу,манит и не ферментирует сахарозу, дульцит, рамноэу, сорбит, лактозу и глицерин. Лизируется чумным диагностическим фагом, фагами

Л-413, Т-7 и Д Эрелля. Синтезирует при 28 С пестицин, фибринолизин и плазмокоагулазу. На среде Джексона

Берроуза формирует колонии, которые не сорбируют гемин. При 37"С синтезирует антиген фракцию 1.

При подкожном и внутрибрюшинном ь введении 10 — 10 микробных клеток гибели лабораторных животных не вызывает. При определении плаэмидного состава штамма методом элсктрофореза в геле агарозы отличии от родительского штамма не обнаружено. Клетки штамма устойчивы к триметоприму (50 мкг/мл) и чувствительны к полимиксину.

Пример. Определение тимидина осуществляют как в жидких средах пробирочным методом в ряду стандартных растворов тимидина в пределах

0,1 — 10 мкг/мл, так и в плотных средах чашечным методом в ряду стандартных концентраций тимидина от 0,2 до

50 мкг/мл.

Определение проводили в синтетической среде, приготовленной на основе минимальной солевой среды (М-9), г: КН РО„ 3, NaHPO 6; NaCI 0,65;

МН „С1 1, дистиллированной воды — до

1 л, устанавливают рН 7,1 и стерилизуют антсклавированием при 115 С (0,5 атм) 30 мин. Добавляют стерильные растворы: 107.-ного магния сернокислого — 2,5 мл/л; 107-ного натрия сульфита — 10 мл/л; 107-ного аммония сернокислого — 5 мл/л; 107. — нои глюкозы — 5 мл/л; 17.-ные растворы аминокислот в ?,-форме: фенилаланина, ( метионина, цистеина, треонина, валина, лейцина, изолейцина, лизина, тирозина, триптофана, аснарагина.

Готовят два параллельных ряда пробирок с последовательными десятикратными ра..- ведениями исследуемой питательной среды. Разводят до 10 минимальной средой без добавления тимидина.

Для построения стандартной кривой роста тест-штамма два параллельных ряда пробирок заполняют по 4,5 мл синтетической минимальной среды с добавлением тимидина в концентрациях

100; 10,1, О, 1" 0 01 мкг/мл. Затем в каждую пробирку как в опытном, так

1348369 риментах штамма.

Составитель Г.Смирнова

Техред Л.Олийнык

Корректор А.Обручар

Редактор ti.Товтин

Заказ 5 164!25

Тираж 499

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская.наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, r.Óæãoðoä, ул.Проектная,4 и в стандартных рядах вносят по 0,5 мл суспензии культуры тест-штамма кон7 центрацией 5 10 клеток/мл, омытых центрифугированием в физиологическом растворе. Посевы инкубируют при 28 С в течение 48 ч, после чего производят регистрацию интенсивности роста штамма путем измерения мутности среды с помощью нефелометра или фотоэлектроколориметра.

Наибольшая чувствительность тесткультуры наблюдается в пределах 0,350 мкг/мл тимидина в среде.

Помимо контроля за качеством сред, а также определения тимидина в различных биологических жидкостях, штамм

Iersinia pestis КМ-161, зависимый от тимидина, найдет широкое применение для решения эопросов "бестиминового" мутагенеза у чумного микроба, выяснения причин гибели клеток при бестиминовом голо5 дании, получении меченной по Н . — тимидину хромосомной и плазмидной ДНК во всевоэможнык генетических экспе10 формулаиэобретения

Штамм Iersinia pestis EV-94 hy

КМ-161 (Музей живых культур Всесоюзного. научно-исследогательского про" тивочумного института "Микроб" ), используемый для определения тимидина в питательных средах.