Способ определения содержания растворимого фибрина в плазме крови

Способ определения содержания растворимого фибрина в плазме крови

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение может быть использована при диагностике заболеваний, связанных с патологией системы гемостаза . Цель изобретения - повьшение точности и чувствительности способа. К цитратной плазме прибавляют раствор протаминсульфата на фосфатном буфере . Смесь перемешивают, инкубируют и центрифугируют. Осадок растворяют в уксусной кислоте, спектрофотометрируют и определяют содержание растворимого фибрина в плазме крови. Для осаждения используют отечественный препарат. 1 табл. со ел 4

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (Ш (51)4 С 01 N 33 50 аС:Я Г1З

I!. 1,., ((Я

p),(Г

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

H A BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ . СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3870761/28-14 (22) 22 ° 03.85 (46) 23.11.87. Бюл. 1(43 (71) Институт биохимии им. А.В.Палладина и Киевский медицинский институт им. А.А.Богомольца (72) В.А.Белицер, T.В.Варецкая, Л.И.Михаловская, ЯЯ.Ена и Л.А.Дидковская (53) 616.07(088.8) (56) Патент США М 4210420, кл. G 01 N 33/16, 1980. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ

РАСТВОРИМОГО ФИБРИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИ (57) Изобретение может быть использовано при диагностике заболеваний, связанных с патологией системы гемостаза. Цель изобретения — повышение точности и чувствительности способа.

К цитратной плазме прибавляют раствор протаминсульфата на фосфатном буфере. Смесь перемешивают, инкубируют и центрифугируют. Осадок растворяют в уксусной кислоте, спектрофотометрируют и определяют содержание растворимого фибрина в плазме крови. Для осаждения используют отечественный препарат. 1 табл. ьЕ Ч 1000

С (мг ) = —.

У" Ч

1 135411

Изобретение относится к медицине, а именно к клинико-лабораторной диагностике, и может быть использовано при диагностике заболеваний, связанных с патологией системы гемостаза.

Целью изобретения является повышение точности и чувствительности способа за счет изменения концентрации раствора протаминсульфата, добавляемого к плазме крови, и введения поправочного коэффициента при расчете количества растворимого фибрина.

Способ осуществляют слецующим образом, 15

К аликвоте свежевзятой бестромбоцитарной цитратной плазмы прибавляют равный объем раствора протаминсульфата (на фосфатном буфере) до конечной концентрации последнего 0,4-0,6 .

Смесь тщательно перемешивают и инкубируют 30 мин при 25 С, Осадок отделяют центрифугированием, дважды промывают физиологическим раствором и растворяют в 1,5-5 -ной уксусной кислоте, 25 раствор спектрофотометрируют при длине волны 280 мм с поправкой на мутность при 320 нм.

Расчет растворимого фибрина проводят по формуле, исходя из соотношения 30 фибрина к осадку 1:(2,8-3,0).

Пример 1. В коническую пробирку объемом 10-12 мл вносят 0,5 мл патологической плазмы термостатируют 35 о

Р

2-3 мин при 25 С и прибавляют равный объем 1%-ного раствора протаминсульфата в 0,06 М фосфатного буфера, рН

7,4, р =0,15, t=25 С. Конечная концентрация протаминсульфата равна 40

0,5 . Смесь тщательно перемешивают и выдерживают 30 мин при 25 С, после чего осадок отделяют центрифугированием при 2,5 тыс. об/мин в течение

15 мин и дважды промывают физиологи- 45 ческим раствором с последующим центрифугированием. После последнего центрифугирования пробирки переворачивают вверх дном на фильтровальную бумагу и дают стечь несколько минут. 50

Полученный осадок растворяют в 3 мл

1,5 -ной уксусной кислоты и получен= ный раствор спектрофотометрируют при длине волны 280 НМ с поправкой на мутность при 320 нм. Количество фибрина рассчитывают по формуле

5 2 где К=2,86, что учитывает отношение экстинкции белка в осадке к экстинкции фибрина;

V — - объем взятой в тест плазмъц

V — объем спектрофотометрированного

1 раствора; ьЕ

Eàåî

-E разница экстинкций раствора при длинах волн 280 и 320 нм;

2 = коэффициент экстинкции фибриногена в кислой среде равен 15,00. при V=0,5; V =3,0 и LE=0, 120

С =16,8 мг ..

Пример 2. Определение и расчет проводят как в примере 1, но для осаждения к плазме прибавляют 0,5 мл

0 8 -ного раствора протаминсульфата (конечная концентрация протаминсульфата равна 0,4 ), а осадок растворяют в 3 мл 3,0%-ной уксусной кислоты

С Е Ч 1000

142

Пример 3. Определение и расчет проводят как в примере 1, но для осаждения прибавляют 0 5 мо 1,2 . протаминсульфата (конечная концентрация равна 0,6 ), а осадок растворяют в

3 мл 5%-ной уксусной кислоты.

6E V 1000

С = — -- — — -= Е ° 133 33=17 4 Mr .

Ч 3,04

Пример 4. В этом примере проводят сравнительное определение количестна растворимого фибрина в модельных смесях предлагаемым и известным спосбоами. Моделью служит донорская плазма с внесенным известным количеством фибрина. Известный способ воспроизводят с применением препарата протаминсульфата фирмы Sigma".

В предлагаемом способе для осаждения применяют отечественный препарат Õaбаровского фармакологического завода.

Данные, полученные обоими способами, приведены в таблице.

Как видно из таблицы, известный способ обладает слабой чувствительностью. В пробах же с высоким содержанием растворимого фибрина результаты, полученные этим способом, значительно превьппают внесенное количество фибрина, Это объясняется тем, что в осадке, наряду с фибрином, обнаруживается значительное количество фибриногена, что подтверждают экспе13541

Внесенное количество фибрина, мкг/мл

Известный способ редлагаемый способ

Количество Ошибка, оличество Ошибка, ибрина, Ж кг/мл фибрина, 7 мкг/мл

200

1 272

0,6 195

198

150

151

100

4,0

10

104

100

10,0

100

12,0

28

Составитель В. Гудошников

Редактор А.Ворович Техред Л.Олийнык Корректор С.Черни

Заказ 5688/40 Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, t .Ужгород, ул.Проект а ктная 4 риментальные данные, полученные с помощью электрофореза в присутствии додецилсульфата натрия восстановленных дитиотриэтолом протаминсульфат5 ных осадков.

Формула изобретения

Способ определения содержания растворимого фибрина в плазме крови, включающий осаждение протаминсульфатом, промывку комплекса фибриногенфибрин с последующим растворением

4 его и спектрофотометрическим анализом, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и чувствительности способа, осаждение проводят при соотношении объемов плазмы к протаминсульфату 1:1 до конечной концентрации последнего 0,4-0,67., дважды промытый комплекс растворяют в 1,5-5Х-ном растворе уксусной кислоты и после фотометрирования количество растворимого фибрина определяют из соотношения фибрина к осадку 1:

:(2,8-3,0).