Способ выделения популяции незрелых макрофагов из мононуклеарных фагоцитов

Способ выделения популяции незрелых макрофагов из мононуклеарных фагоцитов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к цитологии и иммунологии. Цель изобретения - выделение чистой фракции незрелых макрофагов и увеличение их выхода. Животным вводят в брюшную полость сбалансированный фосфатно-солевой буфер с сывороточным тонеальной полости наносят на полистироловые чашки, предварительно инкубированные в той же среде. Клетки со средой инкубируют. Неприлипшие клетки смывают. Оставшиеся клетки заливают средой 199 с фетальной телячьей сывороткой и ncjBTOpHO инкубируют. Адгезию-.макросЬагов определяют по розеткообразованию. со сд ел 05

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИ4ЕСКИХ

РЕСПУБЛИК,gg,„, 1357756

А1 (51) 4 G Ol N 1/28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

Н А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3858439/28-!4 (22) 22.02.85 (46) 07.12.87. Бюл. ¹ 45 (7! ) Институт иммунологии (72) В. М. Земсков, С. В. Родионов, В В. Шербухин и Е. Н. Николаева (53) 616-0.88.8 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР по заявке № 3622962/28-13, кл. G Ol !! 33/48 ! 0.08.83.

Europ J. lmmunologu, 1979,9:385 — 39l.

Ваг-Shavit Z. Complement and Fe-receptor.

Mediated. (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ПОПУЛЯЦИИ НЕЗРЕЛЫХ МАКРОФАГОВ ИЗ МОНОНУКЛЕАРНЪ|Х ФАГОЦИТОВ (57) Изобретение относится к цитологии и иMìóíoëогии. Цель изобретения — вы 1еление чистой фракции незрелых макрофагов и увеличение их выхода. Животным вводят в брюшную полость сбалансированный фосфатно-солевой буфер с сывороточным альбутонеальной полости наносят на полистиро- ловые чашки, предварительно инкуоированные в той же среде. Клетки со средой инкубируют. Неприлипшие клетки смываюг.

Оставшиеся клетки заливают средой 199 с фетальной телячьей сывороткой и повторно инкубируют. Адгезию макрофагов определяют по розеткообразованию.

1357756

Форлула изобретенич

Составитель М. Позняк

Редактор В. Данко Техред И. Верес Корректор В. Бутяга

Заказ 5504)40 Тираж 776 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4!5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к медицине. а именно к иммунологии и цитологии.

Цель изобретения — выделение чистой фракции незрелых макрофагов и увеличение их выхода. 5

Прилер. 15 мыц|ам вводят в брюшную полость 3 мл 0,01 М сбалансированного фосфатно-солевого буфера рН 7,2 — 7,4, содержа щего, мас.%:

Сывороточный альбумин 15,0 — 20,0

Ионы кальция 6,8 — 7,7

Фосфатно-солевой буфер рН 7,2 — 7,4 Остальное

Далее получают перитонеальные макрофаги, наносят клетки из перитональной полости на полистироловые чашки, предварительно в течение ночи инкубированные в той же среде.

Клетки со средой инкубируюг в течение 40 мин при 4 С.

Неприлипшие клетки смывают. Оставшиеся клетки заливают средой 199 с 10%" íîé 20 фетальной телячьей сывороткой и повгорно инкубируют 30 мин при 37=С.

Лдгезия макрофагoB определяется 00 ! о GEA розеткообразованию. !g GEA розетко образование с макрофагами, адгезированными в среде с ионами Са в фосфатносолевом буфере 31 мМ, у здоровых мышей равно 289+ 3! . Все клетки представлены незрелыми макрофагами (контроль по активности эстсразы).

Способ выделения популяции незрелых макрофагов из мононуклеарных фагоцитов путем нанесения клеток Hd полистирол, покрытий субстратом белковой природы с последующим инкубированием. от.шчающийеч тем, что, с целью выделения чистой фракции незрелых макрофагов и увеличения их выхода, в качестве субстрата используют среду. содержащую сывороточный альбумин, ионы кальция и фосфатно-солевой буфер при следующих соотношениях компонентов, мас %:

Сывороточный альбумин 15,0 — 20,0

Ионы кальция 6,8 — 7,7

Фосфатно-солевой буфер рН 7,2 — 7,4 Остальное пр- ем нанесение клеток проводят после предварительнои инкубации полистирола в субстрате в течение 12 — 24 ч, а содержание незрелых макрофагов определяют по количеству адгези ров а нных клеток.