Бензилиденгидразиды 2-хлор-4-нитробензойной кислоты, проявляющие активность в отношении вируса везикулярного стоматита

Бензилиденгидразиды 2-хлор-4-нитробензойной кислоты, проявляющие активность в отношении вируса везикулярного стоматита

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) go p

МИ!е3

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4000047/04 (22) 30.1г85 (46) 30.12.93 Бюл. Ма 47 48 (71) Харьковский фармацевтический институт; Новосибирский медицинский институт (72) Гайдукевич АН„Микитенко ЕЕ; Левитин ER;

Яворовская В.Е; Евстропов АН. (54) БЕНЗИЛИДЕНГИДРАЗИДЫ 2-ХЛОР4-НИТРО6ЕНЗОЙНОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЕ АКТИВНОСТЬ В ОТНОШЕНИИ ВИРУСА ВЕЗИКУЛЯРНОГО СТОМАТИТА (57) Изобретение касается гидразидов кислот, в частности R-бензилиденгидразидов 2-хпор4-нитробензойной кислоты, где R-и или о-СН 0-, Д (Ю) 811 (1Ц 1367393 Ai (5Ц С В К 3Н Д 6% или и — С Н 0- (ГБ), которые проявляют активность

2 Б в отношении вируса везикулярного стоматита и могут быть использованы в медицине. Цель — созда- . ние новых активных и малотоксичных веществ указанного класса Синтез ГБ ведут из гидразида

2-хлор-4-нитробензойной кислоты и соответствутощего алкоксибензальдегида в среде этанола при кипении. ВыхОд %: YfUl. о С; брутто ф-ла: а)97,190 — 192; С Н С!М 0:. б) 98, 193 — 195;

С Н GN 0; в) N,3, 189 — 191; С Н ClN0.

Новые ГБ ймеют низкую тока чность (максимально переносимая доза от 125 до 250 мг/кг, против 100 мг/кг дпя рибамидила). 3 табл.

1367393

Иас аретение относится к новым хими ес:им oepинениям Формулы где R-n-СНзО, О-СНзО или п-СгН5О, которые проявляют активность в отношении вируса веэикулярного стоматита.

Цель изобретения — изыскание в ряду производных ароматических карбоновых кислот новых соединений. обладающих антивирусным действием в отношении вируса везикупярнога стоматита и имеющих меньиию такси .ность.

Пi р и м е р 1. Пара-метоксибензилиденгидразид 2-хлор-4-нитробензойнай кислоты. 3,0 г (0,0139 моль) гидразида

2-хМор-4-нитробензойной кислоты и 1,9 r (0,0139 моль) п.-метоксибензальдегида растворяют в 60 мл этанола и нагревают на водяной бане при кипении в течение 15 мин.

По охлаждении разбавляют реакционную среду водой. Выпадают желтые кристаллы.

Кристаллиэуют из этанопа, ." Ыхад 4,5 - (97%), Т.пл. 190-192 C.

Найдена, %: С 54,12; М 13,08; Н 3,66.

C цН12С(КзО4

Вычислена, %: С 53,98; К 12,59; Н 3,62.

R;;=.3,56 (этилацетат — хларофаом 4: I);

Р .:=0;82 (прог анап — хлороформ 1:1), Хроматсч.рафирование осуществлена на пластине "Silufol-uv-254".

Струк. ура полученного соединения подтверждена данными ИК-спектров в таблетках калия брамида: зон 3268, Р о-снз

"..885, 2935, 2985, со 1665, v"iso 1600, дчн 1500, до21350, 1, - 765(см ), Спектр соединения снят на спектрофо-.ометре "Specord".

Пример "... Орта-метоксибензилиденгидрэзид 2-хлор-4-нитробензойной кислоты. 2,5 г (0,01 "6 моль) гидразида

2-хлор-4-нитробензойной кислоты и 1,6 r (0,0116 моль) и-метаксибензальдегида растворяют в 50 мл этанола и нагревают на водяной бане в течение 1 мин. Па охлаждении раствор разбавляют водой и выпавшие кристаллы фильтруют, Кристаллизуют иэ этанола. Выход 3.27 г (98%), Т.пл. I 93 ю л„-ОС

Найдена, ",4: С 53,78: N 12,46; Н 3,50.

С15Н t2CIN3O4.

Вычислено, %; С 53.98: N 12.59;.Н 3,62.

R<>=0,49 (этилацетат — хлороформ:1);

Rr2=0,72 (пропаноп — хлороформ 1:1).

Условия хгюматаграфирования аналогичны приведенным в примере 1.

Структура полученного соединения подтверждена данными ИК-спектров в таб5 летках калия брамида т ын 3195, т оснз

2845, 2945, 3050, wc 1665. Р но 1595, дин 1505, А<с 2 1345, v с-с 745 (см ).

Пример 3. Пара-этоксибензилиденгидразид 2-хлор-4-нитробенэойной кисло10 ты. 5,0 г (0,023 моль) гидразида

2-хлор-4-нитробензойной кислоты; 3,5 г (0,023 моль) п-этоксибензальдегида растворяют в 100 мл этанола и нагревают на водя. ной бане в течение 30 мин. По охлаждении разбавляют водой, образовавшиеся кристаллы кремового цвета фильтруют, суша", и перекристалпиэовывают иэ этанола. Выход

6,5 г(81,3%); Т.пл. 189 — 191 С.

Найдено,, : С 55.71; N 12.01; Н 4.01.

С16 Н14С 1 йз04

Вычислено, %: С 55,26; N 12,08; H 4,06.

Rfi=0,54 (этилацетат — хлороформ 4;1);

Rr2=0,84 (пропаноп — хлороформ 1:1).

Хроматографиравание осуществлялось на пластинах "ЗНаГо!-uv-254", Проявление хроматограмм проводилось УФ-облучением, Структура полученного соединения подтверждена данными ИК-спектров в таб30 летках калия брамида ион 3250. иос2н5

2845, 2935, 2965, с-о 1665, H йр2 1600;

Рио2 1350; дин 1500; ис-ci 765 (см ), Полученные соединения представляют собой кремово-желтые мелкокристаллические вещества, растворимые в спирте, ацетоне, диоксане. ДМФА и не растворимые в воде.

Изучение физиологической активности осуществлялось следующим образом. Опре40 деление токсичности испытуемых химических соединений (ХС) проводили в культуре фибробластов эмбриона человека (ФЗЧ), для чего к питательной среде 199 добавляли различные количества ХС, начиная с 5000

45 мкг и менее на 1 мл среды, Наблюдение за культурой клеток вели на протяжении 4 сут с ежедневным просмотром. За максимальную переносимую дозу (МПД) испытуемого

ХС принимали его наибольшее количество, которое не вызывала дегенерации клеток.

Рабочая доза (РД) составляла 1/2 МПД.

Данные по определению МПД испытуемых соединений a культуре ФЗЧ приведены в табл.1.

Определение противовируснай активности к PHK-содержащим вирусам Коксаки

А13 (Flores), Каксаки В4 (Power) ECHO 11 (UpsaIa), везикулярнага стоматита (Indiana) и ДНК-содержащему вирусу простого герпе1367393 са 1 типа (штамм Л-2) проводили в культурах клеток ФЭЧ и Нер-2 в условиях адноцикловога опыта. При смене среды в культуре клеток к 0,8 мл среды 199 добавляли РД исследуемого ХС в объеме 0,1 мл и 100

ТЦД5оjo,1 мл соответствующего тест-вируса.

Каждый опыт сопровождался контролем тест-вируса, взятого в той же дозе. Все пробирки с культурой клеток инкубировали при

37 С в течение одного цикла репродукции каждого тест-вируса. Затем после промораживания при -10 С проводили титрование проб общепринятым методом, Снижение титра вируса под влиянием ХС íà 2 0 Ig u более па сравнению с контролем оценивали как проявление активности иснытуемога

ХС. Исследование противогриппоэной активности ХС проводили в развивающихся куриных эмбрионах с использованием вируса гриппа А (Виктория) 35/72 НЗ N2.

Противавирусная активность бензилиденгидраэидов 2-хлор-4-нитробенэойной кИслоты приведена в табл.2.

Определение величины химиотерапевтическаго индекса (ХТИ) (см. табл.3) по отношению к вирусу везикулярного стоматита проводили следующим методом. Тест-вирус в дозе 100 ТЦДьо,о,1 <л вносился v культуру клеток и инкубировался 1 ч при 37ОC. Непосредственно после адсс рбции вирус сливался, клетки отмывались средой 199 и в пробирки вносилась среда поддержки, содержащая различные концентрации исследуемого- и репарата. Наблюдение велось на протяжении 72 ч с е.кедневным просмотрам. Отсутствие цитопатического действия вируса в опыте при "срабатывании" его в контроле, позволяло считать препарат в указанной концентрации активным.

В культуре ФЭЧ соединения имели следующие МПД: Il-метаксибензилиденгидраэид 2-хлор-4-нитрабенэайной кислоты 250 мкг/мл, а-метаксибензилиденгидразид 2хлор-4-нитробензойной кислоты 125 м кг/мл, и-эта к си бе н эил иде н гид разид 2хлор-4-нитрабензойной кислоты 125 мкг/мл.

Из данных, приведенных в табл,2. следует, что все 3 соединения снижали уровень та, Другой противавирусный препарат широкого сг ектра действия — рибамидил — имеет МПД 100 мкг/мл. Преимуществом предлагаемых соединений является их меньшая токсичность (МПД от 125 до 250

20 мкг/мл). K тому же рибамидил, как и кутизон, не оказывает влияния на репродукцию вируса везикулярного стоматита.

Как следует из полученных данных (см. табл. 1-3), предлага "мые соединения менее токсичны, чем известный пративавирусный препарат р бамид лл. B отличие от последнега они обла ==-ют выраженной активна30

cTblo (ХТИ=-2) против вируса веэикулярного стоматита (семейство рабдовирусав). Подобная активность обнаружена впервые. Учить вая отсутствие химиопрепаратов, эффективных в отношении рабдавирусав (куда входит, в частности, вирус бешенства). ь

35 данные воединения могут применяться в экспериментальной терапии рабдовирусных инфекций, а также быть модельными

40. для направленного синтеза более активных соединений. (Бб) Колла B.Э. и Бердинский И.С. Фармакология и химия производных гидразина.

Йошкар-Ола, 1976, с,169 — 170.

Линицкая Г.Л, и др. Вопросы вирусологии, 1983, ¹ 6, с,673 — 675. "

50 репродукций вируса толька везикулярнога стоматита на 3,5 Ig: 5,5 ig; 3,0 Ig соответственно. Для всех трех соединений ХТИ-2.

Аналог предлагаемых соединений па структуре "Кутизон", являющийся производным гидразина, в 4 — 5 раз более токсичен (LD5o 54 мг/кг), чем и-метоксибензилиденгидраэид 2-хлор-4-нитробензойной кислоты (LDM 250 мг/кг) и а-метокси- или и-этокси10 бензилиденгидразиды 2-хлор-4-нитробензойной кислоты (05а для обоих 200 мг/кг).

Токсические дозы установлены на беспородных белых мышах массой 16-18 r, Кроме того, хотя кутизон и проявляет активность против вируса гриппа, ан не активен по отношению к вирусу везикулярнаго стомати1367393

Таблица 1

Соединение. мкг/мл

1000,0

500,0! 250.0

+ + + + дегенерация 100 $ клеток, + + + дегенерация 75 g, клеток, + + дегенерация 50 клеток, + дегенерация 25 7 клеток. — отсутствие дегенерации.

Таблица 2

Соединени

1 окс

0.5

1,0

3,5

1,0

Q,5

5,5

П р и м е ч а н и е. Вещество считается проявляющим активность при снижении уровня репродукции вируса на 2,0 Ig и более.

1- Уетокси( бензилиденгидра; эид 2-хлср-

,4-нитробен- I зойной кислоты ".-Ìeò0êcè бензилиде нгидразид . 2-хлор-4нитробензойной кислоты ! и-3 токсибенэилиденгидразид

2-хлор-4нитробензойной

L кислоты ржка репродукции вирусов в культурах клеток ФЭЧ, 1367393

Таблица 3

* Н.ы. — не исследовали.

Составитель Л.Иоффе

Техред М.Моргентал

Корректор Л Пилипенко

Редактор С.Рекова

Тираж Подписное

НПО "Поиск" Роспатента

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Заказ 3466

Производственно-издательский комбинат "Пагент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 10 I

Формула изобретения

Бензилиденгидразиды 2-хлор-4-нитробензойной кислоты общей формулы

5 где R n СИЗО б СНзО или п С И О про . являющие активность в отношении вируса везикулярного стоматита.