Способ получения антирабической вакцины

Способ получения антирабической вакцины

Реферат

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения антирабической вакцины. Цель изобретения повышение чистоты целевого продукта, а также повышение надежности инактивации вируса. Для осуществления способа штамм вируса бешенства "Внуково 32" выращивают в культуре клеток, собирают вируссодержащую жидкость, инактивируют ее последовательной обработкой ультрафиолетовыми лучами и формалином. Инактивированный вирус подвергают концентрированию и очистке с помощью ультрафильтрации через пористые мембраны и гель-фильтрации на пористых кремнеземах, модифицированных поливинилпирролидоном. 1 з.п.ф-лы, 2 табл.

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к получению противовирусных вакцин. Цель изобретения повышение чистоты целевого продукта, а также надежности инактивации вируса. Способ осуществляют следующим образом. Производственный штамм вируса бешенства "Внуково-32" выращивают в культуре первичных клеток почек сирийского хомяка, полученную вируссодержащую культуральную жидкость собирают в бутыли по 15-18 л и для освобождения от клеточного детрита осветляют пропусканием через пористые мембраны с диаметром пор 1900-2000 нм. Осветленную вирусную взвесь инактивируют ультрафиолетовыми лучами в аппарате-иррадиаторе, где расстояние поступающей на вращающийся металлический круг вирусной суспензии от ультрафиолетовых ламп составляет 18 см, скорость вращения круга 20 об/мин. Затем к инактивированной ультрафиолетовыми лучами вирусной взвеси добавляют формалин из расчета 1 мл формалина на 8 л вирусной взвеси, что соответствует концентрации 0,0116-0,0125% взвесь тщательно перемешивают и помещают на 20-22 ч в холодильную камеру при 4^оС. Инактивированную взвесь концентрируют на ультрафильтрационном аппарате с тангенциальным потоком жидкости с площадью фильтрующей поверхности мембран 1 2 м². Диаметр пор мембран 40-60 нм. Давление на внутреннюю поверхность мембран 0,5-0,7 атм. Концентрирование продолжают 1-2 ч до уменьшения объема вируссодержащей жидкости в 45-50 раз. Для удаления вирусных частиц, адсорбировавшихся в пpоцессе концентрирования на внутренней поверхности мембран, в течение 10 мин проводят барботаж, заключающийся в попеременном закачивании в ультрафильтрационный аппарат концентрата и стерильного воздуха, дальнейшее концентрирование жидкости при этом не происходит. Концентрированную вирусную взвесь собирают в сосуд и проводят очистку ее на колонке с пористым кремнеземом МПС-1М-1000, модифицированным поливинилпирролидоном. Используют колонки размером 5,6 х 85 см с 2,1 л кремнезема в трис-фосфатном буфере, рН 7,8. Один цикл гель-фильтрации позволяет очистить 250 мл концентрированной вирусной взвеси и получить 400 мл очищенного пpепарата, содержащего не более 160 мкг/мл примесных белков и имеющего относительную иммуногенность не менее 2,5 МЕ. К полученному очищенному концентрату добавляют человеческий альбумин в трис-НСl буфере до конечной концентрации 0,05% сахарозу до конечной концентрации 7,5% желатозу до 1,0% разливают в ампулы по 1,5 мл и подвергают лиофильной сушке. Сухой препарат хранят при 4^оС. П р и м е р. Изготовление антирабической вакцины серии N 6. Вируссодержащую культуральную жидкость штамма вируса бешенства "Внуково-32", полученную в культуре клеток почек серийского хомяка в объеме 40 л, осветляют путем фильтрации через лавсановые мембраны с диаметром пор 2000 нм, инактивируют в аппарате-иррадиаторе ультрафиолетовых лучей, добавляют 5 мл формалина (конечная концентрация 0,016-0,0125%) и выдерживают в течение 20 ч при 4^оС. Содержание белка 5,6 мг/мл; относительная иммуногенность в опыте на мышах 0,6 МЕ. Концентрирование проводят на ультрафильтрационном аппарате с тангенциальным потоком жидкости с площадью фильтрующей поверхности 2 м². В качестве фильтрующих мембран используют пористые лавсановые фильтры с порами диаметром 40-60 нм. Давление 0,5 атм. Через 2 ч концентриpования объем концентрата доводят до 800 мл (содержание белка 10 мг/мл; относительная иммуногенность 4,09 МЕ), после чего в течение 10 мин проводят барботаж, заключающийся в попеременном закачивании в фильтрационный аппарат концентрата и стерильного воздуха, концентрирование жидкости при этом не происходит. Содержание белка увеличивается до 15 мг/мл; относительная иммуногенность 7,0 МЕ. Очистку концентрированного вируса проводят на колонке с модифицированным поливинилпирролидоном МПС-1М-1000. После трех последовательных циклов гель-фильтрации получают 1200 мл очищенного концентрата, содержащего 140 мкг/мл белка, имеющего относительную иммуногенность на мышах 3,5 МЕ. К полученному очищенному концентрату добавляют человеческий альбумин в трис-НСl буфере до конечной концентрации 0,05% сахарозу до 7,5% желатозу до 1,0% разливают в ампулы по 1,5 мл, замораживают при -60^оС, высушивают по вакуумом. Сухой препарат хранят при 4^оС. Способ обеспечивает получение антирабической вакцины с повышенной надежностью инактивации и высокой иммуногенной активностью. Результаты испытания вакцины приведены в табл.1 и 2.

Формула изобретения

1. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ путем выращивания вакцинного штамма вируса бешенства "Внуково-32" в культуре клеток с последующей инактивацией вируссодержащей жидкости ультрафиолетовыми лучами, концентрированием и высушиванием целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения чистоты целевого продукта, концентрирование и очистку вируссодержащей жидкости осуществляют последовательно путем ультрафильтрации через пористые мембраны с диаметром пор 40 60 нм в тангенциальном потоке жидкости, а затем гель-фильтрации на пористых кремнеземах, модифицированных поливинилпирролидоном. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что, с целью повышения надежности инактивации вируса, после инактивации ультрафиолетовыми лучами суспензию вируса обрабатывают формалином в конечной концентрации 0,0116 0,0125% от объема суспензии вируса.

РИСУНКИ

Рисунок 1

MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 30.01.2003

Извещение опубликовано: 10.07.2008        БИ: 19/2008