Колориметрический способ определения количества фосфолипидов в хроматографических фракциях в тонком слое силикагеля

Колориметрический способ определения количества фосфолипидов в хроматографических фракциях в тонком слое силикагеля

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к колориметрическим методам определения фосфолипидов в хроматографических фракциях в слое силикагеля и может быть использовано в клинической, экспериментальной и технической биохимии. Целью изобретения является упрощение и ускорение способа определения фосфолипидов в хроматографических фракциях в тонком слое силикагеля, что достигается непосредственным окрашиванием фосфолйшадов в присутствии силикагеля. Способ включает обработку анализируемой фракции фосфолипидов вместе с силикагелем в центрифужной цробиркё 0,03-0,1 мл 0,5-2%- ного водного раствора дезоксихолата, смесью хлороформа и метанола (1:0,8):

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (19) (И) (5g 4 С 01 N 30/90

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A ВТОРСНОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬПЪЙ (21) 4048004/31-25 (22) 25.04.86 (46) 23.01.88. Бюл. М 3 (71) Харьковский государственный университет им. А. М. Горького (72) В.В. Лемешко и A.Ï. Листопад (53) 543.544(088.8) (56) Кирхнер В. Тонкослойная хроматография. — N.: Мир, 1981, т. 2, с.99.

Journal of ЬдиЫ Research, 14, 1973, р, 695-697. (54) КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИИ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ФОСФОЛИПИДОВ В ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ ФРАКЦИЯХ В ТОНКОМ

СЛОЕ СИЛИКАГЕЛЯ (57) Изобретение относится к колориметрическим методам определения фосфолипидов в хроматографических фракциях в слое силикагеля и может быть использовано в клинической, экспери.ментальной и технической биохимии.

Целью изобретения является упрощение и ускорение способа определения фосфолипидов в хроматографических фракциях в тонком слое силикагеля, что достигается непосредственным окрашиванием фосфолипидов в присутствии силикагеля. Способ включает обработку анализируемой фракции фосфолипидов вместе с силикагелем в центрифужной цробирке 0,03-0,1 мл 0,5-2Хного водного раствора деэоксихолата, смесью хлороформа и метанола (1:0,8): (1: 1,5) в количестве О, 3-0,5 мл и после перемешивания еще одну обработку 0,2-0,27 мл 0,5-2Х-ного водного Е раствора дезоксихолата с последующими окрашиванием фосфолипидов молибденовым реагентом и фотометрированием С, хлороформной фазы.

Формула изобретения

Султанович

Корректор В. Гирняк

Заказ 285/46 Тираж 847

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

13687

Изобретение относится к аналитической химии и к определению фосфолипидов в хроматографических фракциях в слое силикагеля. 5

Целью изобретения является упрощение и ускорение способа опреде-. ления.

Способ осуществляется следующим образом. 10

Обнаруженные на хроматографических пластинах пятна фосфолипидов вырезают ножницами .(в случае силуфоловых пластинок с алюминиевой подложкой) или соскабливают (в случае подложки из стекла).и помещают анализируемую пробу в центрифужную пробирку. Силикагель смачивают 0,03-0,1 мл

0,5-2 -ного водного раствора дезоксихолата, отслаивают стеклянной палоч- 20 кой силикагель (в случае силуфоловых пластинок), добавляют 0,3-0,5 мл смеси хлороформ:метанол (1:0,8):(1:

1,5), встряхивают, добавляют 0,20,27 мл 0,5-2 -ного водного раствора дезоксихолата, встряхивают, вынимают фольгу (в случае силуфоловых пластинок), добавляют 0,6 мл концентрированного молибденового реагента, встряхивают, добавляют 1 мл З0 хлороформа (или другой объем в зависимости от требуемой чувствительности), встряхивают и определяют оптическую плотность нижней хлороформной фазы при длине волны 700-715 нм. Оп- 35 ределение концентрации фосфолипида проводят по калибровочному графику.

Пример. Количественное определение различных фосфолипидов. 40

Участок силуфоловой пластины, содержащий фракцию фосфолипида, вырезают ножницами и переносят в центриСоставитель Ю.

Редактор О. Юрковецкая Техред М.Дидык

79 2 фужную пробирку. Силикагель смачивают 0,05 мл 1 -ного водного раствора дезоксихолата, отслаивают силикагель от пластины, добавляют 0,4 мл смеси хлороформ: метанол (1: 1), встряхивают, вынимают фольгу, добавляют

0,6 мл молибденового реагента, встряхивают, добавляют 1 мл хлороформа, встряхивают, центрифугируют при

3000 об/мин в течение 5 мин и определяют оптическую плотность нижней хлороформной фазы при длине волны

710 нм.

Процент обнаружения индивидуальных фосфолипидов и смесей значимо неотличен от 100% что позволяет применять предлагаемый способ для количественного определения разнообразных фосфолипидов.

Колориметрический способ определения количества фосфолипидов в хроматографических фракциях в тонком слое силикагеля, включающий зкстракцию анализируемого материала, окрашивание молибденовым реагентом и фотометрирование, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа определения, силикагель, содержащий анализируемую фракцию фосфолипидов, обрабатывают 0,030,1 мл 0,5-2 -ного водного раствора дезоксихолата, затем добавляют 0,30,5 мл смеси хлороформ:метанол (1:

0,8):(1:1,5), полученную смесь перемешивают, добавляют 0,2-0,27 мл 0,52%-ного водного раствора дезоксихолата, после перемешивания смеси вводят молибденовый реагент и фотометрируют нижнюю хлороформную фазу.