Способ количественного определения гликогена в животных тканях

Способ количественного определения гликогена в животных тканях

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к биологии и ветеринарии и может быть использовано для экспрессной оценки качества продуктов для животных. Целью изобретения является сокращение длительности процесса. Проводят анализ двух одинаковых образцов ткани , обработанных трийодидом калия, один из которых находится в окисленной форме, а другой - в неокисленной . Разница между содержанием адсорбированного образцами йода пропорциональна количеству гликогена и измеряется калориметрическим или электрохимическим способом. 2 табл. с (С (Л

СО(ОЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

568 А1 (19) (11) (su 4 Г О 1 N 3 3 /4 8

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

К А BTOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3824462/30-13 (22) 12.12.84 (46) 30.01.88. Бюл. М- 4 (71) Украинская сельскохозяйственная академия и Киевская станция по борьбе с болезнями животных (72) Г.А,Золенко, А.К.Птицын, Л.Г.Хомякова и М.И.Юрченко (53) 547.458.6(088.8) (56) Кононской A.È. Гостохимия.

Киев: Вища школа, 1976, . 141.

Чечеткин А.В. и др. Практикум по биохимии сельскохозяйственных животных. М.: 1980, с. 98, 288. (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛИКОГЕНА В ЖИВОТНЫХ ТКАНЯХ (57) Изобретение относится к биологии и ветеринарии и может быть использовано для экспрессной оценки качества продуктов для животных.

1(елью изобретения является сокращение длительности процесса. Проводят анализ двух одинаковых образцов ткани, обработанных трийодидом калия, один из которых находится в окисленной форме, а другой — в неокисленной. Разница между содержанием адсорбированного образцами йода пропорциональна количеству гликогена и измеряется калориметрическим или ле трохимическим способом. 2 табл.

137

Изобретение относится к биологии и ветеринарии и может быть использовано для экспрессной оценки качества продуктов убоя животных.

Целью изобретения является экспрессное получение количественных результатов анализа.

Пример 1. Определение гликогена калориметрическим путем.

Для анализа используют образцы говяжьего мяса. Опытные и сравнительные навески мышечной ткани по 1,0 г гомогенизируют в течение 15 мин в фарфоровых ступках с добавлением

10 мп раствора трийодида калия, приготовленного на 0,2 33 КЛ с растворенным в нем до насыщения кристаллическим йодом (сравнительный раствор) и 10 мл раствора трийодида калия, приготовленного так же, как и вышеуказанный, но с содержанием 0,5 мМ

t3J04 (опытный раствор). После гомогенизации каждую из проб переносят в наполовину заполненную песком стеклянную колонку 1000х20 мм и отфильтровывают в режиме отсоса.

Промывание отфильтрованных гомогенатов осуществляют 20 мл петролейного эфира, остаток которого удаляют из колонок воздушным потоком. Экстракцию адсорбированного на полисахаридах йода осуществляют четыреххлористым углеродом путем последовательного введения его в колонку малыми объемами по 0,5 мл до полного извлечения йода. Объем собранного экстракта йода доводят до 10 мл и калориметрируют против четыреххлористого углерода.

Концентрацию йода как в опытном, так и в сравнительном растворе определяют при сопоставлении их экстинкций с экстинкциями растворов контрольного концентрационного ряда с заранее заданными количествами йода.

Концентрация йода (С ), адсорбированного на гликогене, пропорциональна его содержанию в ткани (С ) и равна разнице концентраций йода в опытном и сравнительном растворах (Со) и (Сс

Полное время анализа гликогена в одном с бразце ткани соответствует не более 30 мин, Результаты этих определений отражены в табл. 1 и срав0568

2 иены с результатами способа количественного определения гликогена с антроновым реактивом.

Из табл. 1 видно, что данные предлагаемого способа анализа гликогена, выполненные калориметрическим путем, выражаются в мгХ адсорбированного гликогеном йода, они пропорциональны таковым способа-прототипа, которые выражены в мгХ гликогена. Эта зависимость нелинейная и по математическим расчетам определяется фор15 мулоЙ

Я ах

У

У где у — количество, мгЕ, гликогена

20 в исследуемой пробе, х — количество, мгЖ, адсорбированного гликогеном Йода, а — коэффициент перевода, равный 0,22.

Таким образом, формула имеет следующий вид:

0,22 х у

Пересчет по данной формуле представлен в табл. 2.

Пример 2. Определение гликогена в говяжьем мясе электрохимическим путем осуществляют с помощью

35 описанной выше схемы с измерительным прибором ." 195/3 чувствительностью

1,5 х 10 А/дел.

Для анализа применяют окислитель40 ный и нейтральный растворы, котбрые создают на электродах электрохимической системы концентрационный элемент с положительным полюсом на окислительном электроде. При добавлении в окружающий его раствор йодистого калия потенциал в таком элементе стре- . мится к нулю, при достижении которого система готова к анализу. При добавлении гомогенизатов в периэлектродные объемы начинается процесс частичного окисления органического вещества ° Содержание периодной кислоты в растворе падает и окислительный электрод приобретает отрицатель55 ный заряд, который затем начинает частично компенсироваться в связи с тем, что йод из этого раствора адсорбируется на образовавшемся иэ гликогена полиальдегиде. В результате

1370568

15 у - Ь у = а+ Ьх или х а

Сравнительная характеристика способов анализа гликогена в мясе

Номера проб

Измеряемые характеристики

Способ с антроновым реактивом

190

204

126,6

Количество измерений, п

10,89

24,49

12,89

12, 01

27, 02

13,25

8,29

18,65

14,73

Коэффициент варьирования, ч

5,83

5,89

6,55

Точность среднего, р описанных процессов показание измерительного прибора устанавливается на некоторой величине, отличной от нуля, обратно пропорциональной количеству гликогена в пробе °

Замер электропотенциала осуществляют после 15 мин гомогенизации опытной и контрольной навесок мышечной ткани по 1,0 г с указанными выше растворами объемом по 10 мл. Время определения анализа гликогена электрохимическим путем сос-.авляет 15 мин.

Результаты определений представлены в табл. 2.

Из таблицы 2 видно, что данные определения гликогена электрохимическим путем имеют обратно пропорциональную зависимость по сравнению с базовым способом и выражены в амперах. Эти данные соответствуют уравнению связи где х — количество гликогена в пробе, мг7., у — ток (I). пропорциональный ЭДС электрохимической системы

1,5 х 10 А/дел х дел, Среднее содержание гликогена в пробе (М), С, мг7.

Ошибка среднего значения, m

Среднеквадратическое отклонение,8

Предлагаемый способ (калориметрический) Ь вЂ” расчетный коэффициент, равный 1779, 12; а — расчетный коэффициент, равный 4,448.

Таким образом, формула перевода для электрохимического варианта:

I — 1779 12

-4,448

Пересчет по формуле приведен в табл. 2 в строке 13. формула изобретения

Способ количественного определения гликогена в животных тканях, включающий отбор проб, приготовление исследуемого образца, введение в него реагента, проведение химической реакции в оптимальных условиях с последующей оценкой полученных результатов, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса определения, при приготовлении образца его делят на две пробы, при этом в качестве реагента используют трийодид калия, который вводят в одну пробу в окисленной форме, а в другую — в неокисленной, а оценку результатов осуществляют по разнице количества связавшегося йода.

Таблица 1

1 370568

Номера проб

Измеряемые характеристики

41,2

50,4

31,8

Количество измерений, п

2,14

1,71

1,27

3,85

4,82

2,86

7,64

8,99

11,7

Коэффициент варьирования, v

3,4

3,39

5,19

112, 64

209,41

186,72

Таблица 2

Сравнительная характеристика способов анализа гликогена в мясе

Номера проб

Измеряемые характеристики пп

126,6

204

190

2. Количество измерений, и

8,29

5. Коэффициент варьирования, v

6,55

6. Точность среднего, р

5,89

5,83

1216

814

934

8. Количество измерений, и

17.10

13,! 8

9. Ошибка среднего значения, m

23,0

Количество адсорбированного гликогеном йода (М), С, мг%

Ошибка среднего значения, m

Среднеквадратическое отклонение,о

Точность среднего, р

Пересчет по формуле (в мг7) гликогена

Базовый способ (с антроновым реактивом) 1 ° Среднее содержание гликогена в пробе (М), С,, Mr#

3. Ошибка среднего значения, m

4. Среднеквадратическое отклонение,8

Предлагаемый способ (электрохимический) 7. Ток (I), пропорциональный ЭДС электрохимической системы (М), 1,5 х 10 Л/дел х дел

18) 65

14, 73

12,01

27,02

13,25

10,89

24,49

12,89

1 370568

Продолхение табл.2

Измеряемые характеристики

Номера проб и

I 2

29, 66

51,77

38,47

11. Коэффициент варьирования, v

3,64

5,54

3,16

2,46

1,62

1,41

12. Точность среднего, р

13. Пересчет по формуле (в мг7.) гликогена

206,9

190

126,6

Составитель И.Тареева

Техред A.Kðàâ÷óê Корректор О.Кундрик

Редактор А.Маковская

Заказ 415/45

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ухгород, ул. Проектная, 4

10. Среднеквадратическое отклонение,3

Тирах 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 (з