Способ определения концентрации аминогликозидного антибиотика

Способ определения концентрации аминогликозидного антибиотика

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5i) 4 С 12 Q 1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ .,:;;.,:

К А8TOPCKOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 4064921/28-13 (22) 29.04,86 (46) 23.03.88. Бюл. У 11 (71) Государственный научно-исследовательский институт по стандартиза ции и контролю лекарственных средств (72) С.П.Катруха, Н.С.Евтушенко и М.П.Кудрявцева (53) 615.9.90(088.8)

{56) J. Chin. chem, 25/7, 1979, р.1222-1225.

J.Chromatogr 298, 1984, р.445-457.

Amer.J.Clin.Phathol., 71, 1979, р.428-432. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ АМИНОГЛИКОЗИДНОГО АНТИБИОТИКА (57) Изобретение относится. к биотех.нологии и может быть использовано

„„SU„„1382849 А 1 для качественной и количественной характеристик стандартов, субстанций и лекарственных форм аминогликозидных антибиотиков. Цель изобретенияповышение точности способа, которая достигается тем, что раствор антибиотика основания смешивают в соотношении 1:4 с раствором фенилизотиоцианатом {ФИТЦ) в ацетонитриле, реакционную пробу инкубируют при 68-72 С в течение 10-.12 мин. После охлаждения до комнатной температуры полученное фенилкарбонильное производное хроматографируют на силикагеле с обращенной фазой С, а элюцию проводят в зависимости от времени от начала элюции возрастающей концентрации с 53 до 987. ацетонитрила в фосфатном буфере рН 6,9.

С:

1382849

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для .:качественной и количественной характеристик стандартов, субстанций и ле- карственных форм аминогликозидных антибиотиков, в том числе для обнаружения в исследуемых образцах приме-. сей известнойи неизвестной структуры.

Целью изобретения является повышение точности способа.

Пример 1. К 50 мкл рабочего ,раствора канамицина А основания добав. ляют 200 мкл раствора фенилизотиоциа- 15 ната (ФИТЦ) в ацетонитриле (50 мкл

ФИТЦ в 1 мл ацетонитрила) и пробу ин

;кубируют при 70 С в течение 10 мин. После охлаждения до комнатной темпе ратурыы к реакционной смеси добавляют 20 750 мкл 50Х-ного ацетонитрила и алик, :воту наносят на колонку хроматографа, : 4,6х250 мм, заполненную Zornax ODH, 5 мкм. В течение первых 4 мин элюцию . ведут подвижной фазой, состоящей 25 из 53Х ацетонитрила и 47Х 0,03 М фос"

: фатного буфера рН 6,9. Начиная с 5 .по 10 мин, концентрацию ацетонитрила в подвижной фазе увеличивают до 98Х.

Скорость элюции 1 мл/мин, петля в 30 инжекторе 10 мкл, детектирование производных фенилтиокарбонила (ФТК) осуществляют с помощью ультрафиолетового детектора при 254 нм, скорость ленты на самописце 0,5 см/мин. Обработку хроматографических данных проводят по площадям пиков. За 10 мин при

70 С происходит практически количественная модификация всех аминогрупп антибиотика (в канамицине А четыре щ0 аминогруппы). Это положение подтверждается наличием на хроматограмме незначительных пиков, соответствующих продуктам частичного замещения (с временами выхода между 2,57 и

3 12 мин). Суммарная площадь этих пиков составляет менее 1,9Х. Площадь пика полностью замещенного производного (время выхода 3,60 мин) составляет 119, т.е. достигается максимальное значение.

Пример 2. К 50 мкл раствора тобрамицина основания концентрацией

5 мг/мл добавляют раствор ФИТЦ, и модификацию и хроматографию ФТК-производного антибиотика проводят так же, как описано для канамицина А в примере 1. В контрольном опыте раствор тобрамицина заменяют дистиллированной водой..

В аналитическом опыте по сравнению с контрольным на хроматограмме получают только один пик производного ФТК со временем выхода 8,59 мин, что свидетельствует а 100Х-ной модификации всех пяти аминогрупп антибиотика. При калибровке прибора установлена линейная зависимость между площадями пиков на хроматограмме и концентрацией антибиотика в растворах в пределах концентраций 0,1-5 мг/мл.

Пример 3. Показана принципиальная возможность определения си-: зомицина и гентамицина в лекарственных формах и стандартах. Растворы сизомицина сульфата и гентамицина концентрацией 5 мг/мл обрабатывают таким же образом, как и канамицин А, Время выхода ФТК-сизомицина 11,73 мин.

В случае гентамицина на хроматограмме обнаруживают три пика с временами выхода 11,24, 11,69 12,35 мин.

Пик 11,24 мин неоднородный, с раздвоением, что указывает на присутствие двух ФТК-производных. Полученная картина раздепения ФТК-гентамицина свидетельствует об обнаружении в нем четырех веществ, что согласуется с известным положением, что препарат гентамицина состоит из четырех компонентов — С,, С, С, С

Предлагаемый способ определения аминогликозидных антибиотиков прост и не требует дорогостоящего оборудования и реактивов, Выполнение анализов занимает не более 45 мин. Метод позволяет проводить качественный и количественный анализы основного компонента лекарственной формы, определять наличие примесей и идентифицировать отдельные компоненты сложных лекарственных форм.

Ф о р м ул а и з о б р е т е н и я

Спо со б о пред еления концен тр ации аминогликозидного антибиотика путем модификации основания антибиотика по аминогруппам с последующим разделением полученного производного на колонке с обращенной фазой методом жидкостной хроматографии, элюции смесью ацетонитрила и фосфатносолевого буфера и определения концентрации антибиотика, отличающийся тем, что, с целью повышения точности

1382849

Составитель С.Листвинова

Техред Л.Олийнык Корректор И.Зрдейи

Редактор Н,Гунько

Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д,415

Заказ 1263/22. Производственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная,4 способа, основание антибиотика модифицируют в соотношении 1:4 по объему фенилизотиоцианатом в среде ацетонитрил — вода при 68-72 С в течение

10-12 мин, разделение полученного фенилкарбонильного производного антибиотика проводят на силикагеле с обращенной фазой Сд,, а элюцию проводят при нейтральном значении рН, при этом концентрацию ацетонитрила в элюирующей смеси повышают с 4 до

10 мин с 53 до 98Х.