Способ количественного определения белка

Способ количественного определения белка

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

Изобретение относится к микробиологии и может найти применение при количественном определении белка в растворах и экстрактах из различных биологических объектов. Целью изобретения является сокращение времени анализа при сохранении воспроизводимости и чувствительности метода. Щелочной экстракт белка из растертых листьев и клубеньков сои помещают в пробирку и добавляют медно-карбонатный реактив, содержащий 2% , 0,02% трехзамещенного лимонно-кислого Na и 0,01% . ЗН,0. Пробирку помещают в водяную баню с температурой 98°С на 10-15 с с последующим введением 0,5 мл 1 н. фенольного реагента Фолина-Чиокалтеу и вьщержкой в водян сй бане при 98 с в течение 30-40 с. Пробу охлаждают в воде и измеряют оптическую плотность окрашенных растворов на спектрофотометре при длине волны 750 нм. Количественное определение белка осуществляют в зависимости от измеренных значений оптической плотности. 3 табл. S (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

А1

„„SU„„1383201 (51) 4 G 01 N 33/02

Г

Е

Ъ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3811276/28-13

) (22) 31. 10. 84 (46) 23.03.88. Бюл. В 11 (75) H.Ã.Òåðìõèòàðîâà и А.В.Шульга (53) 641.12(088.8) (56) Peterson С.L. Analit. Biochem., 1979, v. 100, 201.

Мосолов В.В. и др. Прикладная био-: химия и микробиология, 1965, т. I вып. 2, с. 233-237. (54) СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЛКА (57) Изобретение относится к микробиологии и может найти применение при количественном определении белка в

\ растворах и экстрактах из различных биологических объектов. Целью изобретения является сокращение времени анализа при сохранении воспроизводимости и чувствительности метода. Щелочной экстракт белка из растертых листьев и клубеньков сои помещают в пробирку и добавляют медно-карбонатный реактив, содержащий 2% Na

0,02% трехзамещенного лимонно-кислого Na и 0,01% CuSO<.5H<0. Пробирку помещают в водяную баню с температурой 98 С на 10-15 с с последующим введением 0,5 мл 1 н. фенольного реагента Фолина-Чиокалтеу и выдержкой в водяной бане при 98 0 в течение

30-40 с. Пробу охлаждают в воде и измеряют оптическую плотность окрашенных растворов на спектрофотометре при длине волны 750 нм. Количественное определение белка осуществляют в зависимости от измеренных значений оптической плотности. 3 табл.

1383201

Изобретение относится к микробиологии, биотехнологии, биохимии и касается определения белка в растворах и экстрактах из различных биологических объектов.

Цель изобретения — сокращение времени анализа при сохранении воспроизводимости и чувствительности метода.

Оптическая плотность не изменяется 10 в течение 1 ч и более длительного времени и воспроизводится при повторных анализах вследствие того, что достигается плато" оптической. плотности.

В табл. 1 — 3 приведены средние данные из трех определений содержания белка, полученные согласно предлагаемому способу, и контрольные данные согласно известному способу. 20

Пример 1. В пробирку помещают

1 мл щелочного экстракта (0,5 í. NaOH) белка концентрацией 5-80 мкг/мл из растертых листьев и клубеньков сои и добавляют 5,0 мл медно-карбонатного реактива содержащего %: ИадСОЗ трехзамещенный лимонно-кислый Na

0,02; CuSOy 5Н О 0,01. Пробирки ставят в водяную баню температурой 98 С на 15 с, затем быстро добавляют

0,5 мл 1 н. фенольного реагента Фолина-Чиокалтеу, энергично встряхивают и снова помещают в водяную баню температурой 98 С на 30 с. Пробы охлаждают в воде и измеряют оптическую плотность окрашенных растворов на спектрофотометре при длине волны

750 нм. !

Контроль. Аликвоты щелочного экстракта белка согласно известному спо- 40 собу после добавления 5 мл медно-карбонатного реактива выдерживают при комнатной температуре 15 мин, а затем после добавления (используют исключительно короткие интервалы време- 5 ни и высокие температуры для проведения реакций образования медно-протеинового комплекса при взаимодействии анализируемого белка с медно-щелочным реактивом — 1-я реакция) и последую50 щего восстановления реактива ФолинаЧиокалтеу образовавшимся медно-протеиновым комплексом (2-я реакция) создаются условия, когда достигается максимальная величина оптической плотности, что обеспечивает достаточную чувствительность метода (5 мкг/

/мл), 0 5 мл 1 н. раствора ФолинаЧиокалтеу выдерживают в термостате при 37 С 30 мин.

Пример 2. Осуществляют так же, как в примере 1, за исключением того, что в качестве проб берут щелочные экстракты из дрожжей Candida

valida u Candida didensii, время проведения 1-й реакции 10 с 2-й реакции 35 с. Температура водяной бани 100 С, Пример 3. Осуществляют так, же, как в примере 1, за исключением того, что в качестве проб берут щелочной экстракт из биомассы Penicillium sizovae время проведения 1-й реакции 10 с, 2-й реакции 40 с.

Температура .водяной бани 99 С.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет проводить количественное определение содержания белка в пробах в течение не более двух минут, что в

7,5 раза быстрее известного ускоренного метода определения белка, причем полученные данные практически не отличаются от результатов, полученных известными методами.

Формула изобретения

Способ количественного определе" ния белка, предусматривающий отбор пробы, смешивание с медно-карбонатным реагентом, выдерживание, последующее нагревание с реактивом, ФолинаЧиокалтеу и измерение оптической плотности окрашенного раствора, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью сокращения времени анализа при сохранении воспроизводимости и чувствительности ме тода, выдерживание пробы, смешанной с медно-карбонатным реагентом, и последующее нагревание с реактивом Фолина-Чиокалтеу проводят в кипящей водяной бане в течение

10-15 и 30-40 с соответственно.

1383201

Таблица 1

Образец Содержание белка, мкг/мл, по способу известному предлагаемому

57,0

54,0

68,5

68,5

60,0

59,2

35 3

36,4

Т а б л и ц а 2

Содержание белка, мкг/мл, по способу

Образец известному предлагаемому

38,0

39,0

45,7

46,2

36;5

35,5

49,6

50,1

50,1

51,3

50,2

49,7

45,0

46,0

52,4

53,6

45,7

45,9

Т а б л и ц а 3

Образец Содержание белка, мкг/мл, по способу известному предлагаемому

48,5

50 0

41,1

42,0

33,6

31,9

50 3

49 9

43,2

43,1

57 0

55,0